乳酸菌发酵产维生素B_1和B_6的研究

研究以10株乳酸菌(LB,LA,LP,BL,LCR,LCP,SF,ST,LC,LR)为发酵剂,分别在鲜牛乳、蔬菜汁和MRS肉汤培养基中进行发酵,并利用高效液相色谱法分别研究了其发酵48h后的维生素B1和维生素B_6的含量。结果表明:10株乳酸菌在MRS肉汤培养基中的维生素B_1的含量为1.02~2.37mg/L,维生素B_6的含量为0.35~5.32mg/L;在发酵乳中的维生素B_1的含量为0.32~1.38mg/L,维生素B_6的含量为0.56~2.85mg/L;在5种发酵蔬菜汁中维生素B_1的含量为8.43~12.45mg/L,维生素B_6的含量为13.43~23.62mg/L。     

几株乳酸菌的抗氧化活性研究

选用来自传统发酵乳酸菌产品中分离的10株乳酸菌,研究了它们与抗氧化活性相关的清除DPPH自由基和O_2~-自由基的能力以及SOD酶、CAT酶和GSH-PX酶的产生情况。结果显示:10株乳酸菌对DPPH自由基和O_2~-自由基都有一定的清除能力,其中LB菌株对DPPH清除能力较强,清除率达到80.56%,BL菌株对O_2~-清除能力较强,清除率达到36.78%;10株乳酸菌均具有产生这3种酶的能力,LCP和LA产生较多的SOD酶和CAT酶,其中SOD酶活力达到91.29,90.56U/mL,CAT酶活力达到41.31,39.94U/mL,LC产生较多的GSH-PX酶,活力可达到65.45酶活力单位。     

鲜牛乳中乳杆菌的检测及脂肪酶、蛋白酶测定方法的研究

对鲜牛乳中乳杆菌、脂肪酶及蛋白酶的检测方法进行了初步研究 ,并以改良MRS培养基检测了 4个鲜牛乳样品中的乳杆菌数目 ,以改进的脂肪酶活力分析法测定了 4个样品的脂肪酶活力及蛋白酶活力 ,取得了较满意的结果     

蓝莓酵素发酵工艺优化

以新鲜蓝莓为原料,植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）和酵母菌作为发酵菌种,以蛋白酶活力及超氧化物歧化酶（SOD）活力为评价指标,通过单因素试验和正交试验优化最佳发酵工艺条件。结果表明,植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）单独发酵蓝莓酵素时,发酵工艺条件为植物乳杆菌接种量为4%,39 ℃条件下发酵1 d。在此条件下蛋白酶活力及SOD酶活力分别为39.44 U/mL和84.17 U/g。植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）和酵母菌复合菌种发酵工艺条件为同时接入4%植物乳杆菌与0.15%的酵母菌,34 ℃条件下培养4 d,蛋白酶活力及SOD酶活力分别达到了55.76 U/mL和81.27 U/g,该方式是最佳的蓝莓酵素制备工艺。     

基于关键因素调控发酵生产过氧化氢酶

采用正交试验策略,分析了不同关键因素对重组E.coli发酵生产过氧化氢酶(CAT)的影响,确定CAT合成的最优摇瓶发酵条件为:甘油5 g/L、酵母粉35 g/L、初始pH 7.5、诱导温度为30℃。在3 L发酵罐发酵生产CAT过程中,当转速为300 r/min时,酶活力最高为201 17.2U/mL,最适发酵产酶初始甘油质量浓度为10 g/L。以0.67 g/(L·h)的速率进行流加甘油时,最高酶活达28 243.0 U/mL。在诱导开始时一次性补入16.7 g/L甘油,当发酵至47 h时CAT酶活达到最大值为50 369.5 U/mL,为优化前酶产量的2.5倍。     

β-葡聚糖酶产生菌的选育及培养基初步优化

麦芽的皮层和胚乳糊粉层中都残存有内源酶无法完全降解的β-葡聚糖,进而影响浸出率和麦汁粘度、过滤难度和啤酒胶体稳定性。在啤酒生产中,添加外源β-葡聚糖酶可以有效解决这些问题。采用刚果红营养平板法(GCN平板法)从衡水老白干和老龙口酒曲中筛选了3株β-葡聚糖酶活力较高且生产周期短的菌株(分别标记为4#、8#、12#),通过液态发酵,测得酶活分别为0.362U/mL、0.542U/mL、0.511U/mL。并对发酵培养基进行了优化,得到8#初始菌株最佳酶活为0.556U/mL。对该菌株进行紫外诱变,得到突变株酶活为:0.879U/mL。     

野生蓝靛果发酵过程中品质变化及挥发性物质分析

本文研究了植物乳杆菌发酵蓝靛果浆及果汁的品质变化,分析了48 h发酵过程中p H、活菌数、总酚含量、花色苷含量、清除·OH能力、清除DPPH·能力、SOD酶活力和淀粉酶活力的变化,通过气相色谱-质谱联用法(GC-MS)分析了发酵48h时蓝靛果浆及果汁的挥发性物质。研究发现,经过发酵,蓝靛果浆及果汁的品质变化如下:p H显著下降(p0.05),最终分别为3.71和3.51;植物乳杆菌数量在20 h和24 h达到最高,分别为7.42 Log CFU/mL和7.85 Log CFU/mL;总酚含量均在40 h时达到最大值,分别为0.89±0.06mg/mL和0.70±0.02mg/mL;花色苷含量显著降低(p0.05);清除·OH能力在40h时达到最高,分别为(83.12±3.59)%和(80.60±2.87)%;清除DPPH·能力变化不显著(p0.05);SOD酶活力于36 h达到最大值,分别为(45.59±1.07) U/mL和(49.59±0.71) U/mL;淀粉酶活力于48 h达到最大值,分别为(8.77±0.37) U/mL和(11.93±0.57) U/mL。通过GC-MS分析,在发酵蓝靛果浆及果汁中分别检测出86种和70种挥发性物质。癸酸乙酯(34.42%)和辛酸乙酯(21.37%)是发酵蓝靛果浆中主要的挥发性物质;辛酸乙酯(20.67%)、乙基9-癸烯酸酯(17.82%)和癸酸乙酯(15.51%)是发酵蓝靛果汁中主要的挥发性物质。癸酸乙酯是发酵蓝靛果中的特征性风味物质。     

基于2 种培养基生长的植物乳杆菌发酵草鱼的关键风味比较

探讨以不同培养基生长的植物乳杆菌发酵草鱼,分析在各发酵阶段挥发性物质的变化与差异,为发酵草鱼的特征性风味物质的研究提供参考。运用电子鼻和顶空固相微萃取-气相色谱-质谱联用仪对挥发性物质进行检测和分析,结合感觉阈值,通过相对气味活度值确定草鱼发酵的关键风味成分。结果显示：电子鼻能灵敏地检测到草鱼发酵过程中气味的变化,线性判别式分析能够区分各个样品间的差异。气相色谱-质谱在MRS肉汤和质量分数12%脱脂牛乳培养基发酵草鱼鱼肉中分别检测出90 种和70 种挥发性成分,主要为烃类、醇类、醛类、酮类、酯类、酸类及其他化合物。2 种培养基发酵草鱼鱼肉中共有的关键风味化合物主要有D-柠檬烯、1-辛烯-3-醇、庚醛、辛醛、癸醛和3-羟基-2-丁酮;MRS肉汤培养基中发酵草鱼鱼肉的关键风味化合物主要有E-2-壬烯醛和2,3-丁二酮;质量分数12%脱脂牛乳培养基中发酵草鱼鱼肉的关键风味化合物主要有己醛、壬醛和丁酸乙酯。     

以豆渣为基质高产纤维素酶菌株的选育

以豆渣为培养基,通过时里氏木霉Rut C-30进行紫外诱变,经水解圈法初筛和摇瓶发酵复筛,选育出适合在豆渣中生长,并且产纤维素酶和半纤维素酶活力较高的菌株LX0121.菌株产纤维素酶(FPA)和半纤维素酶活力的变化规律基本一致,在28℃摇床培养4d达到酶活高峰期,酶活分别为5.87U/mL和125.6U/mL.     

分光光度法分析水果酵素中功效酶活性的研究

目的:利用分光光度法分别测定水果酵素中多种功效酶的活性。方法:借助分光光度计,采用3,5-二硝基水杨酸法、福林法、铜皂法和邻苯三酚终止法分别对液状水果酵素中淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶以及超氧化物歧化酶的活力进行测定。结果:液状水果酵素中淀粉酶活力为1.968 U/mL,蛋白酶活力为5.421 U/mL,脂肪酶活力为1.106 U/mL,超氧化物歧化酶活力为10.758 U/mL。结论:液状水果酵素中SOD酶活性最高,蛋白酶次之,淀粉酶和脂肪酶活性较低;后续实验中可优化发酵条件来提高其中的淀粉酶与脂肪酶活力。     

苹果酵素自然发酵过程中生物活性物质的变化

研究苹果酵素自然发酵过程中生物活性物质、功效酶及抗氧化能力的动态变化,并对总酚、总黄酮含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性与抗氧化能力之间的相关性进行分析。结果表明,苹果酵素自然发酵过程中,总酚和总黄酮含量在发酵60 d时达到最高,分别为1.16 mg/mL和0.45 mg/mL;SOD、脂肪酶、淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶酶活在发酵90 d时达到最高,分别为42.12 U/mL、23.34 U/mL、10.03 U/mL、6.15 U/mL和2.14 U/mL;DPPH·、O2-·、·OH、ABTS·清除能力和还原力（吸光度值）在发酵60～75 d时最高,分别为85.29%、78.85%、65.06%、59.04%和1.93。自由基清除能力和还原力与总酚含量呈显著正相关（P＜0.05）,与SOD活性呈极显著正相关（P＜0.01）,说明苹果酵素有较好的抗氧化能力。     

一株产酯化酶细菌的筛选

从汾酒大曲（后火曲、红心曲、清茬曲）中筛选出1株产酯化酶较高的菌株,从菌落外形及显微镜观察初步确认是葡萄球菌。该菌株在液体发酵培养基中,以37℃恒温摇床培养48 h,发酵液酶活力可达25.00 U/mL;对该菌株的发酵培养基进行碳源和氮源优化。结果表明,以豆饼粉作氮源,玉米粉为碳源,于37℃、180 r/min下摇床培养48 h,酶活力可达到33.33 U/mL。     

黑曲霉产柚苷酶的发酵条件优化

利用高效液相色谱法,检测发酵液中α-鼠李糖苷酶和柚苷酶的活力,考察碳源、pH值、搅拌转速、发酵温度对柚苷酶产量的影响,对黑曲霉DB056产柚苷酶的7L罐发酵工艺进行优化.研究结果表明,以20g/L柚皮苷为唯一碳源,发酵黑曲霉DB056产柚苷酶的效果最佳.发酵过程的pH值、搅拌转速和发酵温度的最优控制值分别为6.0、700 r/min和32℃,此时产酶效果最理想,发酵过程α--鼠李糖苷酶和柚苷酶最大酶活力分别达到1 133.00和788.42U/mL.将优化的发酵工艺放大到200 L发酵罐进行试验,α-鼠李糖苷酶和柚苷酶的最大酶活力分别为1 069.30 U/mL和727.44 U/mL.中试放大效果良好.     

干酪乳杆菌DI-1发酵产胞壁蛋白酶的培养基优化

采用Plackett-Burman和Box-Behnken方案,对影响干酪乳杆菌DI-1产胞壁蛋白酶(CEP)的MRS培养基成分进行筛选,结果表明,当在MRS培养基中添加磷酸氢二钾2.78g/L,柠檬酸二铵2.92g/L和乙酸钠4.36g/L时,CEP活性显著提高,此时酶活性为11.36U/mL,比基本MRS培养基提高了63.68%。在氨基酸和鸭肉水解肽添加试验中,当基础培养基中分别添加0.1g/L的精氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、丙氨酸和谷氨酰胺时,CEP的活性从6.94U/mL提高到11.11U/mL;当添加木瓜风味复合蛋白酶水解鸭肉蛋白多肽时,CEP活力提高到13.89U/mL。     

毛霉型豆豉发酵菌株分离鉴定与酶活分析

毛霉是毛霉型豆豉发酵的主要菌株,从永川豆豉和三台豆豉中分离到2株毛霉YC-1和ST-1,经分离、纯化、测序,鉴定为总状毛霉。用福林酚试剂法、滤纸酶活测定法和CMC酶活测定法分别测定2株总状毛霉YC-1和ST-1产蛋白酶、纤维素酶和β-葡萄糖苷酶3种酶的活力。结果表明:两株总状毛霉3种酶的酶活不同,YC-1和ST-1产蛋白酶活分别为176.891U/mL和51.201U/mL;产纤维素总体酶活分别为107.645 U/mL和66.762 U/mL;产β-葡萄糖苷酶活分别为80.430 U/mL和95.362U/mL。     

利用响应面法优化溶杆菌UCo1产溶菌酶的发酵培养基

采用响应面法对溶杆菌UCo1产溶菌酶的培养基进行了优化。首先对溶杆菌UCo1产溶菌酶的发酵培养基进行了单因素试验,确定了影响产酶的3个显著因素,即碳源麦芽糖,氮源大豆蛋白胨和表面活性剂Tween-20。采用Box-Behnken响应面法对溶菌酶的发酵培养基组成进行了优化,确定了最佳条件。结果表明,麦芽糖,大豆蛋白胨和Tween-20 3因素的最佳浓度分别为1.725%,3.25%,0.048%时,溶菌酶酶活达到6973.5U/mL,与模型所得到的最大预测值6990.99U/mL基本吻合,且较优化前的酶活力(6230.4U/mL)提高了11.93%。     

响应面优化微泡菌ALW1产褐藻胶裂解酶的发酵条件

采用单因素和响应面法对产褐藻胶裂解酶菌种Microbulbifer sp.ALW1发酵产酶的培养条件进行优化.通过单因素实验,得到发酵条件如下:培养基初始pH 7.5,接种量5％,装液量50 mL,温度25℃,最大酶活力达到117.1 U/mL.在单因素实验的基础上,通过Box-Behnken设计和响应面分析,得到最佳的发酵培养条件:培养基初始pH 8.0,接种量6.5％,装液量50mL,温度23℃,褐藻胶裂解酶活力达到130 U/mL,比基础培养条件下提高16.5％.     

影响泡菜发酵过程中SOD酶活性的因素研究

以保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)、副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)以及乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)为发酵菌种,以7种常见蔬菜为原料,研究了在泡菜发酵过程中影响SOD酶活的因素。并对SOD酶性质、邻苯三酚自氧化法检测SOD酶活力的最佳条件进行了初步研究。结果表明:不同发酵条件下,泡菜中SOD酶活性达到最大值的时间各不相同。25℃下,接种量、装料量改变时,在发酵时间内SOD酶活性总体呈先升高后降低的趋势,接种量为20%时,泡菜在发酵第4天SOD酶活性达到最大值95.75U/mL;装料量为60%时,在发酵第5天达到最大值101.52 U/mL;pH为5.0、温度为25℃时SOD酶活性较稳定,在检测时间内波动较小,不同浓度的Zn2+、Cu2+和Mn2+对SOD酶活性影响较小,Fe2+对SOD酶活性有较强的抑制作用;邻苯三酚自氧化法检测SOD酶活性的最佳条件为波长320nm,邻苯三酚浓度4.5mmol/L。     

虾夷扇贝裙边多糖提取物细胞抗氧化活性的研究

以虾夷扇贝裙边为原料,制备多糖提取物,其组成分别为:水分(5.38±0.14)%、碳水化合物(41.11±0.83)%、蛋白质(37.3±0.86)%、脂质(5.7±0.47)%、灰分(10.51±0.43)%。以RAW264.7细胞为模型检测多糖提取物对丙二醛(MDA)及活性氧(ROS)含量,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)酶活力的影响。结果表明,MDA与ROS的含量随多糖提取物浓度的增加而降低,且呈剂量依赖关系,浓度为200μg/mL时,MDA与ROS的量最低,分别为(40.8±0.6)nmol/mgprot与(96.5±2.9)%;SOD、CAT及GSH-Px酶活力随多糖提取物浓度的增加而提高,且呈剂量依赖关系,浓度为200μg/mL时,酶活力分别为(32.4±0.3)U/mL、(11.2±0.4)U/mL及(49.8±1.1)U。虾夷扇贝裙边多糖提取物具有良好的细胞抗氧化活性,为开发海洋功能食品奠定一定的理论基础。     

产壳聚糖酶的海洋青霉菌筛选及其寡营养发酵的探究

从海边海螺、贝壳及其附着物的微生物中筛选出产壳聚糖酶的青霉菌。以此菌为出发菌,以降低发酵产酶成本为目的,采用不同的发酵温度,分别添加不同诱导物进行发酵产酶,探讨温度、诱导物对菌种生长、酶活力的影响。实验结果表明:低聚糖诱导产酶效果最好,室温25℃进行壳聚糖酶发酵,普通培养基酶活力最高达3.57U/mL。海水寡营养发酵产酶的适宜培养基配方为(g/L):蛋白胨9g、葡萄糖10g的海水培养基,酶活力可以达到3.16U/mL,初步实现利用海水进行寡营养发酵产酶,该菌株具有工业应用潜力。