海参肽的提取分离及其体外抗氧化活性

以水解度为指标,试验研究了复合蛋白酶、木瓜蛋白酶、水产蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶和碱性蛋白酶对海参蛋白的水解能力,确定以复合蛋白酶为最佳用酶。以料液比、加酶量、酶解时间为试验因素,水解度为响应值,通过响应面法对提取工艺进行优化,结果表明该酶最佳酶解条件为:加酶量0.79%、料液比1︰5.35 (g/mL)、酶解时间3.93 h。在此条件下,海参蛋白水解度为21.38%。分别用截留分子量3 kDa和1 kDa超滤膜对海参肽进行分级分离,得到分子量大于3 kDa, 1～3 kDa和小于1 kDa 3种海参肽,将不同分子量海参肽分别在ABTS+·清除活性、还原力、DPPH·清除活性、O_2~-·清除活性4种体系下比较三者体外抗氧化能力。结果显示:分子量小于1 kDa海参肽对ABTS+·、O_2~-·清除活性最强, 1～3 kDa海参肽次之,大于3 kDa海参肽最弱;分子量大于3 kDa海参肽还原力以及对DPPH清除活性最强。     

中国毛虾二肽基肽酶-IV抑制肽的分离纯化与结构鉴定

食源性二肽基肽酶-IV(dipeptidyl peptidase-IV,DPP-IV)抑制肽有助于调节机体血糖。为实现中国毛虾的高值化利用，从中国毛虾酶解产物中制备DPP-IV抑制肽，使用动物蛋白酶水解中国毛虾，以DPP-IV抑制率为评价指标分离多肽，并通过分子对接确定抑制作用位点。结果表明，酶解液经超滤、Sephadex G15和反相高效液相色谱分离纯化和液相-质谱联用技术鉴定后，得到了5条DPP-IV抑制肽，氨基酸序列分别为YGGQFPTRPD、PALPSIPH、IFTAPQVP、PAFPHPLP和LGDAPGEVP;其中PALPSIPH和PAFPHPLP对DPP-IV的抑制活性较高，二者的IC₅₀值分别为(2.68±0.06)和(1.61±0.06) mmol/mL。分子对接结果表明PALPSIPH和PAFPHPLP主要通过氢键与DPP-IV活性中心及其以外的位点相结合，以此达到抑制作用。该研究基于中国毛虾制备食源性DPP-IV抑制肽，为水产蛋白来源降血糖功能性食品开发利用和新型DPP-IV抑制肽的研究提供参考。     

利用牡蛎制备DPP-IV抑制肽及其活性分析

以牡蛎肉为原料制备二肽基肽酶-IV（dipeptidyl peptidase-IV,DPP-IV,EC 3.4.14.5）抑制肽。通过对比5 种蛋白酶（木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、胰酶、中性蛋白酶和复合蛋白酶）制备的酶解液对DPP-IV的抑制活性,发现胰酶制备的酶解液对DPP-IV抑制效果最好。通过优化胰酶酶解条件,确定最优酶解条件为加酶量0.8%、pH 8.0、温度37 ℃,酶解时间90 min。酶解液经超滤、Sephadex G-15和高效液相色谱分离纯化,获得肽片段。通过质谱鉴定筛选得到2 种肽段的序列为Glu-Ile-Thr-Ala-Leu-Ala-Pro-Ser-Thr-Met-Lys（EITALAPSTMK）和Ile-Leu-Ala-Pro-Pro-Glu-Arg（ILAPPER）。利用BIOPEP在线模拟分析了这2 个肽的胃肠液消化特性。采用固相合成法合成肽段APSTM和ILAPPER,并应用于DPP-IV抑制活性研究。结果显示,2 个肽段的IC50值分别为354.81 μmol/L和16.98 μmol/L。分子对接结果表明,抑制肽与DPP-IV的活性部位主要以氢键、范德华力和π键相互作用为主。本研究通过酶解牡蛎肉制备高抑制活性的DPP-IV抑制肽,为以牡蛎为原料的功能性食品开发利用提供了理论基础。     

带鱼蛋白水解液抑制二肽基肽酶IV活性的研究

本文首次报道酶解带鱼蛋白获得具有抑制二肽基肽酶IV活性的水解液。探讨Flavourzyme风味蛋白酶水解带鱼蛋白以及水解液抑制二肽基肽酶IV的活性,获得优化的酶解工艺。采用单因素试验研究酶解时间、加酶量、温度和鱼水比对DPP-IV抑制的影响,并在此基础上进行正交试验,得出优化的酶解条件。采用底物发色法测定DPP-IV抑制率,结果表明:在优化的酶解条件下:温度45℃,加酶量1.6%,酶解时间4.5 h,鱼水比1∶3,带鱼蛋白水解液对DPP-IV的抑制率达96.97%。     

咸蛋清蛋白深度酶解工艺优化研究

以咸蛋清为原料,用酸性蛋白酶对其进行酶解,以蛋白回收率和水解度为指标,通过单因素实验考察了酶解时间、加酶量、pH和酶解温度对咸蛋清深度酶解的影响,优化了咸蛋清蛋白深度酶解工艺,并对最佳工艺条件下获得的咸蛋清蛋白酶解液进行肽分子量分布的测定。研究结果表明:咸蛋清蛋白深度酶解最佳工艺条件是:稀释后的咸蛋清调节pH至4.0,酸性蛋白酶的加酶量为0.3%(E/S),温度为55℃,酶解时间为48h;此最佳工艺得到的咸蛋清蛋白酶解液中肽分子量主要为3000u以下,其中分子量为1000~3000u占49.28%,分子量为1000u以下占35.73%。     

乳清分离蛋白酶解制备抗氧化和ACE抑制活性产物

以乳清分离蛋白为原料,通过对肽浓度、游离氨基酸含量及水解度的研究,探讨了碱性蛋白酶Alkaline、中性蛋白酶NPU、肽酶AX和风味蛋白酶Flavourzyme对乳清蛋白酶解的影响。在优化碱性蛋白酶Alkaline水解条件的基础上,考察了中性蛋白酶NPU、风味酶Flavourzyme添加时间,获得了复合酶分步酶解工艺:酶解温度55℃,加入1.5% Alkaline([E/S]),维持pH8.5酶解10 min,待pH7.2时加入1% NPU([E/S]),酶解240 min,加入1% Flavourzyme([E/S])继续酶解20 min。在此条件下,肽浓度达到60 g/L以上,游离氨基酸含量为4348 mg/kg。获得的酶解产物基本无苦味。酶解物分子量主要分布在<1 kDa(69.62%)。酶解产物具有ABTS自由基清除和ACE抑制活性,IC₅₀值分别为1.02(0.377 μmol Trolox当量/mg)和1.38 mg/mL。综上,采用复合酶酶解乳清分离蛋白可获得具有抗氧化活性和ACE抑制活性产物,为乳清酶解物在功能食品或保健品领域的运用提供科学参考。     

豌豆蛋白深度酶解制备咸味肽的研究

以水解度、蛋白回收率和感官评价为指标,探究不同蛋白酶、酶解温度、pH及时间对豌豆蛋白酶解效率的影响,并对其酶解工艺进行优化,同时对最优酶解条件下获得的豌豆蛋白酶解产物的肽分子量分布和氨基酸组成进行分析。结果表明:豌豆蛋白最优酶解条件为采用风味蛋白酶酶解,温度50℃,pH 7.0,酶解时间24 h,在此条件下,豌豆蛋白水解度为22.63%,蛋白回收率为58.08%,且该酶解产物中小分子肽(1 kDa)约为65.60%。豌豆蛋白酶解产物中必需氨基酸含量为39.16%,鲜味氨基酸含量为36.79%,甜味氨基酸含量为15.03%。     

复合酶解裂壶藻渣制备抗氧化肽的工艺研究

以提取油脂后的裂壶藻渣为原料采用蛋白酶进行酶解,以水解度、蛋白回收率及产物抗氧化活性为指标,确定最佳复合酶解工艺。结果表明,在p H为7.5,水解温度为50℃,料水比为1∶12(w/w),加酶量为0.5%(E/S,w/w)条件下,采用复合蛋白酶与Alcalase 2.4 L复配方式(1∶1,w/w)酶解裂壶藻渣6 h后的产物水解效果与抗氧化活性均优于其他单酶或复合酶解产物。在此条件下,酶解产物的水解度为11.15%,蛋白回收率为70.82%,羟自由基半抑制浓度IC50为1.656 mg/m L,还原力为1.417(浓度3 mg/m L),具有较好抗氧化活性。     

海参体壁蛋白ACE抑制肽酶解工艺及产物分子量分布研究

以血管紧张素转化酶(ACE)抑制率和水解度为指标,筛选出适合海参体壁蛋白水解的酶。采用单因素和响应面法优化最优酶的水解条件,确定其最佳水解工艺,进而采用HPLC法探讨酶解产物的分子量分布。结果表明:中性蛋白酶在50℃、p H7.5、酶量3000 U/g、酶解5 h条件下,所得酶解产物的ACE抑制率最高,达到56.5%。此条件下酶解产物经HPLC分析,200~1000 Da(2~10肽)的海参多肽占44.1%。     

甲鱼碱溶蛋白肽的分离及抗肿瘤活性研究

为了获得具有抗肿瘤活性的肽段,研究以水解度为评价指标,评价了4种蛋白酶(酸性蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶)对甲鱼碱溶蛋白酶解效果的影响,确定中性蛋白酶为最适酶。用酶解、凝胶色谱制备甲鱼碱溶蛋白肽,用MTT肿瘤抑制实验评价抗肿瘤能力,并用HPLC测定高活性肽段的分子质量分布。结果显示:甲鱼碱溶蛋白经中性蛋白酶酶解获得较高水解度的产物,水解度为14.47%。经Sephadex G-25分离获得分子质量184~4 588 u的小分子肽,其具有较高的抗肿瘤活性,IC_(50)为32.26μg/m L。     

苦瓜皂苷与乳清蛋白水解物协同对二肽基肽酶-IV的抑制活性

为评价动植物源天然产物的二肽基肽酶-IV（dipeptidyl peptidase-IV,DPP-IV）抑制活性,以苦瓜皂苷（momordica saponins,MS）、乳清蛋白胃蛋白酶水解物（whey protein pepsin hydrolysates,WPPHs）、乳清蛋白胰蛋白酶水解物（whey protein trypsin hydrolysates,WPTHs）为原料,采用单因素试验和响应面分析优化水解条件,再将MS与WPPHs、WPTH进行复配,结合模拟体外消化,探究DPP-IV抑制活性。结果表明,MS、WPPHs及WPTHs具有DPP-IV抑制活性,最佳水解条件为：当酶添加量4%、pH 2.7酶解2 h时,WPPHs的DPP-IV抑制率最高为15.43%;当酶添加量4%、pH 7.6酶解4 h时,WPTHs的DPP-IV抑制率最高为14.62%。苦瓜皂苷与乳清蛋白水解物具有协同对二肽基肽酶-IV抑制活性作用,当MS与WPPHs、WPTHs的复配体积比均为1:1时,显著高于两者单独累加（p<0.05）。经胃消化后,WPPHs的DPP-IV抑制率降低2.02%,MS和WPTHs的DPP-IV抑制率升高0.99%、7.01%;经肠道消化后,WPPHs的DPP-IV抑制率升高2.23%,而MS和WPTHs的DPP-IV抑制率降低4.12%、2.70%。研究结果可为天然动植物源产物协同对二肽基肽酶-IV抑制活性提供了基础性数据,为降血糖功能性产品的开发提供新的方向。     

酶解鲢肉制取ACE抑制肽工艺条件的优化

采用复合风味酶水解鲢(Hypophthalmichthys molitrix)肉制取血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽,通过正交试验对水解工艺进行优化,并用SephadexG-15凝胶柱对酶解产物进行分离。结果表明:复合风味酶在温度50℃、pH8.0、料液比1:6、加酶量5000U/g.pr、水解12h的条件下,酶解产物的水解程度及对ACE的抑制率最高,其水解度为34.40%,氮利用率为92.01%,抑制率为66.52%;该酶解产物中相对分子质量较大和较小部分的ACE抑制活性偏低,只有相对分子量在一定范围内的短肽才对ACE具有较好的抑制作用,其中在第3洗脱峰处得到的ACE抑制肽活性最高,其ACE抑制率为63.04%。     

几种蛋白酶对文蛤肉的水解效果

在一定的酶解条件下,用Alcalase 2.4L、胰蛋白酶、复合风味酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶等几种蛋白酶对文蛤内进行水解,测定了这几种蛋白酶的水解度,以及其水解物的氨基态氮含量、可溶性蛋白含量和透明度,并用凝胶过滤色谱(Sephedex G-25)对水解物的分子质量分布进行了粗略分析。结果表明,Alcalase水解物分子质量的分布范围较广,适合制备具有一定肽链要求的短肽,酸性蛋白酶水解物分子质量较小,适合制备文蛤调味品,中性蛋白酶水解物分子质量主要集中在1 000 u左右与10 000u左右,胰蛋白酶和复合风味酶的水解物分子质量大部分在1 500 u以上。     

马氏珍珠贝软体酶法制备降糖肽的工艺优化及肽段分析

目的:以二肽基肽酶-IV（dipeptidyl peptidase，DPP-IV）抑制率和葡萄糖消耗量为指标优化马氏珍珠贝软体的酶解工艺，并对酶法制备的降糖肽进行分析。方法:以人肝癌细胞（HepG-2）胰岛素抵抗模型的葡萄糖消耗量、体外二肽基肽酶-IV（dipeptidyl peptidase，DPP-IV）抑制率为评价指标，比较筛选了酸性蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、复合蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶对马氏珍珠贝软体的酶解效果，通过单因素及正交试验分析酶解温度、料液比、加酶量、酶解时间等因素对酶解物降糖活性的影响，确定最佳酶解工艺，以液相串联质谱（Nano LC-MS/MS）分析酶解物中肽类物质组成。结果:酸性蛋白酶酶解的产物葡萄糖消耗量和DPP-IV抑制率优于其他种类蛋白酶，马氏珍珠贝软体制备降糖肽的最佳酶解条件为:45 ℃、3 h、料液比1:3.5（w:w）、加酶量1000 U/g，在此条件下的葡萄糖消耗量为37.53%、DPP-IV抑制率为74.21%。最佳工艺制备的马氏珍珠贝软体酶解物中93.88%的肽段分子量低于2000 Da，22.63%的肽段为疏水性肽段，74.92%的肽段N端至少有含有一个疏水性氨基酸。结论:本研究酶法制备的马氏珍珠贝软体降糖肽可通过抑制DPP-IV的活性及减少胰岛素抵抗发挥降糖作用，对功能食品的研发具有一定的指导意义。     

ENZYMATIC HYDROLYSIS OF WHEY PROTEINS BY TWO DIFFERENT PROTEASES AND THEIR EFFECT ON THE FUNCTIONAL PROPERTIES OF RESULTING PROTEIN HYDROLYSATES

Whey protein concentrate (WPC 80) was hydrolyzed by Alcalase 2.4 L and Protamex to 5, 10, 15 and 20% degree of hydrolysis (DH). WPC 80 and its hydrolysates were analyzed, compared and used for measuring some functional properties. All hydrolysates were different from WPC 80 in protein, moisture and ash content. Free amino groups and protein solubility increased with increasing DH. The peptides produced by hydrolysis had smaller molecular sizes, and their average molecular weight decreased as the DH increased. Except hydrolysates generated by Alcalase 2.4 L at 5% DH, all others showed poor emulsifying and foaming properties compared with unhydrolyzed WPC 80. Gelation properties of WPC 80 and its hydrolysates were different. The global amino acid compositions did not differ significantly between the different hydrolysates, and they were very close among WPC 80 and its hydrolysates except for Methionine, Glycine, Histidine and Valine.     

鳙鱼肉酶解物清除羟自由基的研究

采用优化酶法从鳙鱼肉蛋白中制备具有清除Fenton体系产生的羟自由基(·OH)活性的抗氧化肽.应用响应面分析法以酶解液对Fenton体系产生的羟自由基(·OH)的清除率为指标优化最佳酶解工艺;酶解液相对分子质量分布采用凝胶层析法测定.复合蛋白酶是水解鳙鱼肉制备具有清除羟自由基活性酶解物的适合酶,最佳酶解条件为:温度40℃、酶解时间30 min、PH=7.0、酶加量为600 U/g底物、底物:水=1:2;活性肤相对分子质量范围为519～1088.响应面分析法是优化酶解工艺可行的方法;具有清除羟自由基活性的肽是一些寡肽.     

燕麦麸蛋白ACE抑制肽的制备及性质研究

以燕麦麸为原料制备了燕麦麸蛋白,并利用蛋白酶对其酶解。测定了不同蛋白酶的水解产物的ACE抑制活性,以Alcalase和Trypsin酶解物活性最强。在此基础上进一步考察了Alcalase和Trypsin酶解物的DH对ACE抑制活性的影响,结果表明DH11.0%的Alcalase酶解物和DH12.2%的Trypsin酶解物有最大ACE抑制活性,分别达92.31%和86.36%。两种酶解物的肽组分相对分子质量均较低,大部分都低于1 000u。氨基酸分析表明ACE抑制肽中富含Glu、Leu、Pro和Phe。为了达到活性组分富集的目的,超滤技术是一种切实可行的方案。     

海参皂苷Echinoside A的酶解及其产物结构鉴定与溶血毒性

利用商业酶将海参皂苷Echinoside A(EA)酶解成低溶血毒性的次级苷。为了得到溶血毒性更低的稀有次级海参皂苷,以海参皂苷Echinoside A为底物,选用5种商品糖苷酶,对其进行酶解。利用TLC、高效液相色谱-质谱法(HPLC-MS)和电喷雾串联质谱法(ESI-MS/MS)筛选出具有能将海参皂苷EA降解生成新物质的商品糖苷酶,并进行其酶解产物结构鉴定和溶血毒性研究。结果表明,果胶酶、果胶酶Ultra SP-L和纤维素酶有酶解效果,其中果胶酶酶解生成二糖基次级海参皂苷(化合物1)和一糖基次级海参皂苷(化合物2);果胶酶Ultra SP-L和纤维素酶酶解生成化合物1,其他两种酶对海参皂苷EA没有酶解作用。溶血实验证明酶解产物的溶血毒性相对于海参皂苷EA的溶血毒性有明显地降低,其中化合物2的溶血毒性降低到30%以下,效果显著。     

不同蛋白酶水解酪蛋白及其对产物功能性质的影响

采用Alcalase 2．4L和Protamex两种蛋白酶分别水解酪蛋白酸钠（蛋白质含量88．03％）至5％、10％、15％和20％等不同的水解度（DH），并对酪蛋白酸钠及填水解产物的各种功能性质进行了分析测定。结果表明：酪蛋白酸钠经水解后，蛋白质、水分和灰分含量发生变化，游离氨基量增加且增加与DH相关；水解产物中的多肽分子量较小，平均分子量小于8103D，并且分子量随DH的增大而减小，在DH为15％和20％的水解产物中多肽分子量均低于5043D：水解产物的溶解性随DH的增大而增强，在pH4．0～5．0、DH10％～20％的范围内产物溶解度84．8％～98％，说明在等电点条件下，酪蛋白酸钠水解后溶解性得到改善：与酪蛋白酸钠相比，水解产物的乳化性和起泡性减弱；不同水解产物的氨基酸组成差异不是很大，与酪蛋白酸钠也很接近。     

挤压预处理后小麦面筋蛋白酶解特性的变化

小麦面筋蛋白经挤压预处理后,利用复合蛋白酶(Protamex)和木瓜蛋白酶(Papain)酶解。与未挤压的酶解产物相比较,经挤压预处理后的酶解产物水解度明显提高(77%～122%),鲜味明显增强,但蛋白质回收率有所下降。挤压预处理后的小麦面筋蛋白酶解产物高分子组分减少,低分子组分显著增加,面筋蛋白酶解液中的鲜味物质以小分子肽和游离氨基酸为主。