中心组合设计优化两歧双歧杆菌BB01增殖培养基

为了提高两歧双歧杆菌培养液中的活菌数,采用中心组合设计对其增殖培养基进行了优化。在前期单因素试验的基础上,首先通过Plackett-Burman试验筛选出了影响两歧双歧杆菌生长的4个主因子,再通过中心组合设计试验及响应面分析确定了4个主因子的最佳浓度为:三氯化铁、水苏糖、蒺藜提取液和pH分别为0.012 g/L、8.0 g/L、2.5%和6.90,用优化后的增殖培养基培养两歧双歧杆菌,24 h后其培养液OD600为1.398±0.007,比优化前提高了24.28%。     

双歧杆菌原生质体的制备及其转化系统的建立

考察了长双歧杆菌WBL001菌体生长状态、酶解浓度、时长、温度以及不同渗透压稳定剂等因素,获得长双歧杆菌WBL001原生质体制备及再生的优化条件:长双歧杆菌以3%接种量活化至MRS培养基,培养至对数中期(OD600∶1),5μg/mL变溶菌素,37℃孵育30 min,以原生质体稳定液SMM为反应缓冲液,原生质体生成率达到81%,其再生率达到48%;在此基础上,通过聚乙二醇PEG融合,将穿梭表达载体pBAX转入双歧杆菌原生质体,成功建立双歧杆菌转化体系。     

促双歧杆菌生长培养基的优化

为了促进双歧杆菌更好地生长,根据双歧杆菌的营养需求,采用正交试验,优化MRS培养基中的碳源、氮源和增殖因子。试验结果显示,优化MRS培养基的最佳配比是:大豆蛋白胨0.37%、胰蛋白胨1.13%、葡萄糖1.0%、酵母浸出粉0.7%、胡萝卜汁7.5%、番茄汁7.5%、玉米浆5.0%。双歧杆菌在优化MRS培养基中所得菌数是普通MRS培养基中的10倍。     

混合制剂中快速计数双歧杆菌鉴别培养基的研究

研制了一种混合制剂中快速计数双歧杆菌鉴别培养基。用添加X-Gal的改良MRS培养基和厌氧胶法对4种标准双歧杆菌(长双歧杆菌、短双歧杆菌、青春双歧杆菌、两歧双歧杆菌)和2种标准乳酸菌(保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌)分别单独培养、混合培养,结果在X-Gal培养基上,双歧杆菌单独培养及与乳酸菌混合培养双歧杆菌均为白色菌落或浅蓝色菌落,而乳酸菌为蓝色菌落。结果表明,在X-Gal培养基上双歧杆菌和乳酸菌有明显的鉴别性,可用于双歧杆菌和乳酸菌混合制剂的菌落鉴别计数。     

3种低聚糖对两歧双歧杆菌BB03生长的影响

以MRS培养基为对照,研究了不同浓度的水苏糖、低聚木糖及低聚半乳糖对两歧双歧杆菌BB03生长的影响.结果表明,在MRS培养基中添加0.2%～1.0%的水苏糖在前期能加速两歧双歧杆菌的生长,最佳添加量为1.0%,低聚木糖的最适添加量为0.8%,低聚半乳糖的最适添加量为0.6%.     

益生菌产品中双歧杆菌计数培养基的比较研究

对添加单株双歧杆菌(分别为乳双歧杆菌BB12和长双歧杆菌BB536)的益生菌产品进行双歧杆菌计数实验.比较了在相同的稀释条件和培养条件下,倾注MRS、半胱氨酸盐酸盐+MRS(CYS-MRS)、BBL3种培养基,培养计数结果的差异.结果对添加乳双歧杆菌BB12的益生菌产品,3种培养基计数结果差异较显著(P＜0.05),B...     

水苏糖、低聚木糖及半乳糖对双歧杆菌生长的影响

以MRS培养基为对照,研究了不同浓度的水苏糖、低聚木糖及低聚半乳糖对两歧双歧杆菌BB01生长的影响。结果表明:在MRS培养基中添加0.2%~1.0%的水苏糖对两歧双歧杆菌BB01的生长有一定的促进作用,添加0.2%~1.0%的低聚木糖对两歧双歧杆菌BB01的生长没有影响,添加0.2%~1.0%的低聚半乳糖对两歧双歧杆菌BB01生长有明显的促进作用,这可缩短培养时间。     

耐氧两歧双歧杆菌高密度培养的研究

讨论了耐氧两歧双歧杆菌在小瓶培养、发酵罐间歇培养、及流加培养的生长及代谢特性,探讨了其高密度培养的途径。在发酵罐流加培养试验中,通过流加碱和流加基质培养,使双歧杆菌生长的OD600值达到1.67,菌体浓度约为6.3×1010个/mL,乳酸浓度达到620mg/100mL,并使双歧杆菌生长的周期明显延长。     

环境因素对长双歧杆菌CICC6069生物膜生成的影响

目的:研究不同环境因子对长双歧杆菌CICC6069生物膜生成能力的影响。方法:通过增添或删除培养基MRS和TSB的组成成分,改变双歧杆菌培养的营养和环境条件,测定不同条件对双歧杆菌生物膜生成的影响。结果:不同环境因子对双歧杆菌生物膜生成的影响不同,葡萄糖、MgSO4及渗透压可促进长双歧杆菌CICC6069生物膜的生成;EDTA、大豆蛋白胨及pH可抑制长双歧杆菌生物膜的生成;MnSO4对双歧杆菌生物膜生成的影响有培养基依赖性。结论:长双歧杆菌CICC6069生物膜的生成依赖环境条件,不同环境因子对长双歧杆菌生物膜的生成有不同的影响。其中,MgSO4、NaCl、葡萄糖对双歧杆菌生物膜生成的影响比较显著。     

两歧双歧杆菌促生长培养基的初步筛选

本试验首先比较了两歧双歧杆菌在TPY,PTYG和改良MRS培养基的生长情况,发现PTYG作为两歧双歧杆菌的生长培养基相对较好;然后在PTYG培养基中加入乳清蛋白水解液和乳糖,结果表明乳清蛋白水解液与乳糖对两歧双歧杆菌的生长有一定的影响,其适当添加量为10%乳清蛋白水解液（mL/mL）和1.5%乳糖（g/g）。     

双歧杆菌抗消化道逆环境特性的研究

应用模拟胃液pH、胃液、肠液、肠胆盐环境 ,研究青春双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌和短双歧杆菌的抗消化道逆环境特性。在pH1 5酸性条件下作用 1 5h ,存活率分别为 0 14 %、17 86%、49 0 9%和 9 5 3 %。在加有胃蛋白酶的模拟胃液中作用 1 5h ,存活率分别为 :45 3 9%、97 2 7%、84 5 3 %和 85 5 1%。在含胰蛋白酶的模拟肠液中作用 12h ,存活率分别为 :2 9 17%、47 97%、87 70 %和 77 2 7%。青春双歧杆菌、长双歧杆菌和短双歧杆菌的活菌数随胆盐浓度升高而下降 ,2 %胆盐浓度条件下作用 12h ,三者的存活率分别为 5 92 %、13 96%和 61 2 4%。而婴儿双歧杆菌在各胆盐浓度条件下 ,均有生长趋势 ,这种趋势随胆盐浓度升高而下降。研究结果表明 ,消化道逆环境对双歧杆菌的存活有不同程度的影响 ,以婴儿双歧杆菌和长双歧杆菌的耐性最好。     

双歧杆菌对仔猪小肠黏液糖蛋白的粘附研究

通过扫描电镜观察细菌在仔猪肠黏膜的粘附状况，发现肠道茵群与黏膜表面的黏液层有密切联系。采用放射性代谢标记方法研究所拥有的双歧杆菌与仔猪肠黏膜黏液糖蛋白的粘附，发现青春双歧杆菌的粘附能力最强，为44．61%；其次是短双歧杆菌，为33．20％；婴儿双歧杆菌和长双歧杆菌分别是18．40％和11．78％。结果表明，所实验的糖、初乳粉以及婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、大肠杆菌和沙门氏茵上清均能导致青春双歧杆菌粘附下降，而青春双歧杆菌和短双歧杆菌上清却有促进其粘附的作用。     

婴儿源益生性双歧杆菌的筛选及肠道定殖性研究

本研究旨在从婴儿粪便中筛选出具有潜在益生特性的双歧杆菌,并探究其肠道定殖情况,为双歧杆菌的产品开发提供优良的菌株。采用MRS培养基对样品进行分离纯化,菌株经F6PPK检测及16S r DNA测序鉴定,之后进行模拟胃肠液、胆盐耐受性、对食源性致病菌(大肠杆菌、沙门氏菌、单增李斯特菌等)的抑制及对HT-29细胞的粘附能力测定,将筛选出的菌株进行动物实验,测定其肠道定殖能力。分离到的27株双歧杆菌,经分子生物学鉴定为7个不同的种:Bifidobacterium longum、Bifidobacterium breve、Bifidobacterium bifidum、Bifidobacterium pseudocatenulatum、Bifidobacterium infantis、Bifidobacterium animalis和Bifidobacterium adolescentis。体外实验表明,B.longum A9、B.breve A4、B.bifidum B6、B.longum C6、B.adolescentis F8和B.infantis H6等具有较强的潜在益生特性;动物实验表明,B.infantis H6和B.longum C6具有较强的肠道定殖能力。B.longum C6和B.infantis H6有望作为优良的益生性菌株,应用于双歧杆菌的产品开发。     

鲟鱼肝酶解条件优化及酶解液对双歧杆菌增殖效果的研究

为提高鲟鱼肝脏的加工附加值，使用碱性蛋白酶，以水解度为评价指标，在单因素试验的基础上，通过Plackett-Burman试验、响应面分析法优化鲟鱼肝蛋白酶解条件。在此条件下，进一步探究了酶解液对双歧杆菌的促生长效果。结果表明，最优酶解条件为碱性蛋白酶添加量10 540 U/g鱼肝蛋白、体系初始pH值10.0、酶解时间8.6 h、酶解温度45 ℃、料液比1∶10（g∶mL），此条件下水解度（81.7%）是优化前（40.4%）的1.02倍。鲟鱼肝蛋白酶解液对青春双歧杆菌、两歧双歧杆菌、动物双歧杆菌、长双歧杆菌、短双歧杆菌和婴儿双歧杆菌6种均具有显著的促生长效果。研究结果为鲟鱼加工副产物利用提供了新途径，同时也为双歧杆菌促生长因子的研发提供新思路。     

菊芋汁双歧杆菌培养基的筛选优化

本文研究了双歧杆菌在菊芋汁中的生长状况,考察了添加不同物质对双歧杆菌生长的影响。结果表明,双歧杆菌在菊芋汁中能够良好生长,在菊芋汁中添加胰蛋白胨、牛肉膏、玉米浆、半胱氨酸盐、大豆蛋白胨对双歧杆菌促进生长作用极显著。采用正交试验法确定了菊芋汁双歧杆菌培养基的配方:菊芋汁+0.3%玉米浆+0.5%大豆蛋白胨+0.025%半胱氨酸盐酸盐,双歧杆菌在其中的活菌数可以达到109以上。     

Relationship between oxygen sensitivity and oxygen metabolism of Bifidobacterium species.

Bifidobacteria, which are obligate anaerobes, were studied to determine the relationship between their sensitivity to oxygen and oxygen metabolism. Among the four species tested, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium breve, and Bifidobacterium longum differed from Bifidobacterium adolescentis in sensitivity to oxygen. The former three species showed marked growth under conditions of partial aeration, whereas the growth of B. adolescentis was suppressed by low concentrations of oxygen. Bifidobacteria express reduced NAD-oxidase and -peroxidase activities, which function in a pathway for two-electron reduction of molecular oxygen, producing hydrogen peroxide and, subsequently, water. Activities of reduced NAD-oxidase and -peroxidase were inversely correlated with their sensitivities to oxygen. Bifidobacterium adolescentis exhibited lowered activities of these two enzymes; the activities were 10 to 20% of those observed with B. infantis, B. breve, and B. longum. These observations are compatible with the hypothesis that reduced NAD-oxidase and reduced NAD-peroxidase in Bifidobacterium species play a role in prevention of oxygen toxicity. Superoxide dismutase activity was also detected in Bifidobacterium species. Superoxide dismutase is probably not involved in detoxification of oxygen, because the activity of this enzyme was extremely low, and the sensitivity to oxygen varied independently of superoxide dismutase activity.     

响应面法优化长双歧杆菌增殖培养基

为了提高长双歧杆菌发酵液中的活菌数,对其增殖培养基进行响应面优化。通过单因素试验筛选出长双歧杆菌的最佳碳源为乳糖,并发现低聚木糖、菊糖、低聚异麦芽糖、低聚果糖、苯丙氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、谷氨酸及赖氨酸均能显著促进长双歧杆菌的生长。利用Design Expert 8.06软件设计Plackett-Burman 试验筛选出影响长双歧杆菌生长的3个最重要因子,通过Box-Behnken试验及响应面分析确定3个因子的最佳添加量为：低聚木糖1.7g/L、菊糖3.6g/L、脯氨酸0.4g/L,用优化后的增殖培养基培养长双歧杆菌,18h后其活菌数达(1.75±0.02)×109CFU/mL,比优化前提高了95.64%。     

青春双歧杆菌的耐氧驯化及不同低聚糖对其增殖效果的影响

为改善青春双歧杆菌在发酵产品中活菌数低、菌种功效弱的情况,对厌氧青春双歧杆菌进行耐氧驯化,采用无氧有氧交替驯化法,在驯化过程中逐渐增加青春双歧杆菌培养液的氧分压,测定青春双歧杆菌驯化前后生理特性,并对比大豆低聚糖、低聚木糖、低聚麦芽糖对青春双歧杆菌增殖的影响。结果表明,青春双歧杆菌在耐氧驯化后对氧气的敏感程度下降,有氧条件下生长能力达标,产酸能力得到提升,菌体驯化前后形态基本一致,耐氧青春双歧杆菌代谢产生的乙酸与乳酸比值较厌氧青春双歧杆菌更适宜发酵,在3种低聚糖中,低聚木糖对青春双歧杆菌增殖作用明显,可作为青春双歧杆菌良好的双歧因子。耐氧驯化后的青春双歧杆菌有着优良的生理特性,能够作为潜在的益生菌菌种深入研究其功能并可应用于发酵食品中。     

长双歧杆菌多因素连续驯化的研究

双歧杆菌因对外界环境的耐受性较差,限制了其规模化生产和实际应用。通过对长双歧杆菌进行连续的耐氧、耐酸以及耐胆盐的驯化,使长双歧杆菌对氧、酸以及胆盐的耐受性有了一定的提高,活菌数和产酸性能都有所提高。耐氧驯化时,通过逐渐增加培养基中的氧分压的方法进行;耐酸驯化时,通过逐渐降低培养基的初始pH的方法进行;耐胆盐驯化时,通过逐渐增加培养基初始胆盐含量的方法进行。实验结果表明,耐氧耐酸驯化后的菌株活菌数能达到9.4×108 cfu/mL,为初始菌的1.92倍;耐胆盐驯化后的菌株在胆盐浓度为0.3%时培养也能保持一定的活菌数,而初始菌株不能存活。     

Growth-enhancing supplements for various species of the genus Bifidobacterium

Various biological materials were tested for their growth-promoting activity of several bifidobacterial species in a synthetic medium containing ample sources of inorganic salts, vitamins, nitrogen, and carbon. It was found that only Bifidobacterium adolescentis and B. longum (ATCC 15708) grew optimally or near optimally in the synthetic medium. All the other bifidobacteria tested grew optimally only in the synthetic medium supplemented with a growth promoter. The best growth promoters for all bacteria were bovine casein digest and yeast extract rather than human milk whey. Other growth promoters, including human and bovine milk wheys, hog gastric mucin, and bovine serum albumin digest were effective with some bacterial species but not with others. Bifidobacteria also grew well when the bovine casein digest (20 mg/ml) was used as the nitrogen source. Only the yeast extract was able to improve growth under these circumstances. The nature of these growth factors has not yet been determined.