牛奶中β-内酰胺类和三聚氰胺检测方法的建立

建立一种快速、简便,同时针对牛奶中β-内酰胺类抗生素和三聚氰胺残留的检测方法。应用竞争抑制免疫层析原理,研制β-内酰胺类和三聚氰胺胶体金试纸条。该试纸条检测限分别为青霉素G2μg/L、氨苄青霉素3μg/L、阿莫西林3μg/L、苯唑青霉素6μg/L、邻氯青霉素6μg/L、双氯青霉素6μg/L、萘夫西林20μg/L、头孢喹肟20μg/L、头孢哌酮40μg/L、头孢曲松50μg/L、头孢噻呋90μg/L、头孢洛宁10μg/L、三聚氰胺50μg/L,假阳性率低于5%、假阴性率为0,检测时间不超过15min。该方法操作简便、灵敏度高、特异性强,适用于乳品流通环节中β-内酰胺类抗生素和三聚氰胺残留的快速检测。     

牛奶中黄曲霉毒素M1胶体金试纸条的研究

应用胶体金免疫层析技术,建立一种快速检测牛奶中黄曲霉毒素M1的方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,单克隆抗体胶体金标记物的制备并冻干成微孔试剂,样品吸收垫和反应膜的制备,试纸条的组装。所研制的黄曲霉毒素M1快速检测试纸条的检测限为0.3μg/L,检测时间为10 min,假阳性率和假阴性率为0。试纸条使用简单方便,适合进行现场快速检测牛奶中残留的黄曲霉毒素M1。     

嗜热脂肪芽孢杆菌试管法检测牛乳中β-内酰胺类抗生素残留

采用嗜热脂肪芽孢杆菌试管法对牛乳中6种最为常见的β-内酰胺类抗生素残留进行检测,指出嗜热脂肪芽孢杆菌试管法为半定量检测法,对牛乳中β-内酰胺类抗生素残留具有较好的灵敏性.牛乳中青霉素G、氨苄青霉素、羟氨苄青霉素的检测限为6μg/kg,头孢氨苄的检测限为150μg/kg,苯唑青霉素的检测限为15μg/kg、头孢匹林的检测限为30μg/kg.在检测时间、操作难易程度上较BSDA法具有一定的优越性,可应用于牛乳中β-内酰胺类抗生素残留的检测.     

应用酶联免疫法快速检测乳品中β-内酰胺类抗生素残留

建立乳品中β-内酰胺类抗生素残留酶联免疫快速检测方法。应用氨苄青霉素抗体,通过人工制备了氨苄青霉素(Amp)和辣根过氧化物酶(HRP)的结合物Amp-HRP,建立直接ELisa竞争法检测β-内酰胺类抗生素,确定了各种β-内酰胺类抗生素的检出限,并对检测条件进行了优化。检测了已知阴性和阳性的生鲜牛乳样品,结果表明对于阴性和阳性牛奶样品的检测未出现假阳性或者假阴性结果。该方法检测结果准确可靠,可广泛应用于检测乳品中β-内酰胺类抗生素残留的检测。     

基于胶体金免疫层析技术的赤霉素快筛试纸条的研制

研制快速检测豆芽中赤霉素的快筛试纸条。采用免疫层析技术,以胶体金为标记物制备赤霉素单克隆抗体-胶体金偶联物,以竞争抑制模式制备赤霉素胶体金免疫层析试纸条。该试纸条对豆芽中赤霉素的检测限为100 μg/kg,灵敏度为98%,特异性为97%,假阴性率为2%,假阳性率为3%。该方法操作简便,具有较高的灵敏度和特异性,可广泛应用于豆芽中赤霉素残留的现场筛查和检测。     

动物组织中呋喃它酮代谢物快速检测试纸条的研制

介绍了检测动物组织中呋喃它酮代谢物的胶体金试纸条的研制方法,主要包括胶体金标记物的制备并冻干成微孔试剂,样品吸收垫和反应膜的制备,试纸条的组装等研究步骤,所研制出的呋喃它酮代谢物快速检测胶体金试纸条对动物组织的最低检测限为1.0μg/kg,检测时间短,试纸条特异性好、假阳性率不高于5%、假阴性率为0,可应用于动物组织中呋喃它酮代谢物的快速检测和现场筛查,具有较高的市场应用前景。     

胶体金免疫层析试纸条在猪尿β-兴奋剂多残留检测中的应用

本研究采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,并对β-兴奋剂单克隆抗体进行标记。通过棋盘滴定法和单因素实验确定最佳的实验参数,研制出能同时检测多种β-兴奋剂的胶体金免疫层析试纸条。结果表明,本方法对克伦特罗的灵敏度最高,检测线性范围(IC20~IC80)为0.31~4.52μg/L,IC50为1.18μg/L,检出限(LOD,IC10)为0.14μg/L,猪尿样品无需处理,直接检测,单个样品检测时间只需8 min;与沙丁胺醇、马布特罗、溴布特罗、氯丙那林、西马特罗等β-兴奋剂类药物都有交叉,能实现β-兴奋剂的多残留检测。对阴性猪尿的加标回收实验中,试纸条批内实验回收率在83.6%~102.2%之间,试纸条批间实验回收率在84.2%~101.5%之间,且相对标准偏差均在10%以内,与ELISA、HPLC/MS法的对比实验表明,该试纸条能应用于猪尿中β-兴奋剂多残留的定量检测。     

牛奶中β-内酰胺和四环素类抗生素二联检测试纸条的初步研究

抗生素越来越多地被应用于畜牧业中,其在乳制品中的残留问题也备受关注.乳品中残留抗生素不仅危害人体的健康,而且影响经济贸易的正常进行.为适应基层检测牛奶中抗生素残留的需求,作者采用胶体金免疫层析方法,建立了可以同时测定牛奶中的β-内酰胺类抗生素和四环素类抗生素的二联胶体金试纸条.该方法简单可靠,可同时检测牛奶中12种β-内酰胺类抗生素和4种四环素类抗生素,是一种值得推广的定性筛选方法,可作为液相色谱等定量检测仪器法的补充.     

呋喃它酮代谢物5-甲基吗啉-3-氨基-2-恶唑烷酮单克隆抗体的制备、鉴定与胶体金免疫层析试纸条的研制

目的:制备5-甲基吗啉-3-氨基-2-恶唑烷酮(AMOZ)单克隆抗体,并建立AMOZ胶体金试纸条检测方法.方法:AMOZ与对醛基苯甲酸反应生成半抗原CP-AMOZ,将CP-AMOZ与BSA、OVA偶联制备完全抗原.免疫小鼠后制备腹水型抗体,ELISA检测抗体效价与其对CP-AMOZ半抑制浓度(IC50)和最低检测限(LOD),并检测抗体的特异性.胶体金与单抗偶联,同时在NC膜上包被完全抗原、兔抗鼠多抗分别作为检测线和质控线,制备免疫层析试纸条,测定试纸条的灵敏度与特异性.结果:成功制备CP-AMOZ-BSA、CP-AMOZ-OVA完全抗原及抗CP-AMOZ的单抗,抗体效价为1∶1.6×105,对CP-AMOZ IC50为0.86μg/L,LOD 0.07 μg/L,与其他硝基呋喃类药物代谢物及其衍生物均无交叉反应.制备的胶体金试纸条灵敏度5 μg/L.结论:成功合成了CP-AMOZ的完全抗原,免疫小鼠后制备了特异性强的单抗,并以此为基础研制出敏感、特异的胶体金快速检测试纸条.     

高灵敏黄曲霉毒素B1免疫层析定量检测法的建立

以胶体金为标记物,借助于胶体金读取仪,建立了高灵敏的定量检测黄曲霉毒素B_1的胶体金免疫层析方法。试纸条制备时,当标记溶液pH为6.0,检测线全抗原的使用浓度为1.5mg/mL,金标抗体浓度为4μg/mL、用量为1.2μL时,所建立方法的灵敏度为5.7ng/L。通过加速保存试验,结果显示该试纸条的保存期大于1年。该试纸条应用于实际谷物及酱油加标样本检测,证明该方法可满足食品快速检测的需要。     

基于单克隆抗体的胶体金免疫层析法快速检测丁香酚

目的 采用免疫层析技术对丁香酚残留的胶体金免疫层析快速检测试纸条的制备开展研究。方法 用柠檬酸三钠还原法制备胶体金纳米颗粒, 标记丁香酚单克隆抗体得到胶体金-丁香酚单克隆抗体复合物。以硝化纤维素膜为固相载体, 包被丁香酚-BSA偶联物为检测带(T带), 羊抗鼠IgG为质控带(C带), 建立了丁香酚的胶体金免疫层析快速检测试纸条。结果 胶体金免疫层析试纸条具有较高的灵敏度和特异性, 检出限为2.0 mg/L。结论 本研究所开发的胶体金免疫层析试纸条可作为快速测定丁香酚的可靠、低成本的方法。     

盐酸克伦特罗快速检测胶体金试纸的研制

为建立快速检测猪尿等样品中盐酸克伦特罗（CL）的胶体金免疫层析方法,用柠檬酸三钠还原氯金酸制备了胶体金,将其标记抗CL单克隆抗体,制备了金标抗体;以CL-人血清白蛋白（HSA）为包被抗原、羊抗鼠IgG为质控线二抗,制成胶体金试纸。优化了胶体金颗粒粒径、标记抗体用量和pH值等各项参数,最终确定胶体金粒径为15 nm、每毫升胶体金溶液中添加20 ?g抗体、胶体金溶液pH值为7.4、金标抗体稀释液为添加0.1 %牛血清白蛋白（BSA）的0.05 mol/L磷酸盐缓冲液（pH 7.4）、金标抗体喷涂量为50 ?L/cm2、CL-HSA和羊抗鼠IgG的包被浓度分别0.5 mg/mL和2 mg/mL。研制的CL胶体金试纸检测限为3 ng/mL,与莱克多巴胺、沙丁胺醇等六种?-兴奋剂类药物无交叉反应。对42份猪尿样品的检测结果与市售酶联免疫（ELISA）试剂盒的符合率为100 %。试纸无需仪器辅助,操作简便,可在5 min内完成,适用于对CL残留进行现场检测。     

双甲脒胶体金免疫快速检测试纸条研制及其在蜂蜜中的应用

目的 基于胶体金免疫层析原理研制双甲脒快速检测试纸条,评价其在蜂蜜检测中的应用效果。方法 使用双甲脒-BSA偶联物作为人工抗原免疫小鼠获得单克隆抗体,制备胶体金微孔试剂,使用双甲脒-OVA偶联物和羊抗鼠IgG抗体分别作为试纸条的检测线和控制线,并对蜂蜜样品进行添加检测。结果研制的试纸条可以定性检测蜂蜜中双甲脒的残留,对蜂蜜中双甲脒的检测限为0.2mg/kg,检测用时约25min,,与双甲脒功能和结构相似的其他药物时无交叉反应,特异性较好。结论 本试验研制的试纸条适用于蜂场现场快速检测以及基层实验室中大量样本的筛查,为蜂蜜中抗生素残留控制提供有效监管手段。     

Rapid and Sensitive Immunochromatographic Strip for On‐site Detection of Sulfamethazine in Meats and Eggs

A rapid immunochromatographic (ICG) strip based on a conjugate of colloidal gold and monoclonal antibody (mAb) was developed for the rapid, sensitive, and on‐site detection of sulfamethazine in meat and egg samples. The detection limit of the ICG strip is 2 ng/mL, and the assay can be completed in 10 min. A cross‐reactivity test indicated that the ICG strip was highly specific to sulfamethazine with no cross‐reaction with sulfonamide compounds and other antibiotics. The results of the recovery test from meat and egg samples spiked with sulfamethazine were in good agreement with those obtained by the indirect competitive enzyme‐linked immunosorbent assay. These results demonstrated that the ICG strip can be used as a rapid and qualitative tool for on‐site screening of sulfamethazine in meat and egg samples.     

胶体金免疫层析法快速检测配方羊奶粉中的牛β-乳球蛋白

建立了一种可快速检测配方羊奶粉中牛β-乳球蛋白(β-lactoglobulin,β-lg)的胶体金免疫层析检测方法。通过杂交瘤技术制备β-lg单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb),半抑制浓度(50% inhibiting concentration,IC₅₀)为5.87 μg/mL。将胶体金标记的β-lg mAb包被于金标垫,β-lg和山羊抗小鼠IgG标记于硝酸纤维素膜(nitrocellulose membrane,NC膜)分别作为检测线(T线)和质控线(C线),开发了可检测β-lg的免疫层析试纸条。该试纸条对β-lg的检测限(limit of detection,LOD)值为50 μg/mL,与其他基质成分均未产生有效交叉反应,对全脂山羊乳粉中掺杂脱脂牛奶粉(nonfat skim milk,NFSM)、脱盐乳清粉(desalted whey powder,DWP)和乳清蛋白粉(whey protein powder,WPP)的LOD值分别为5%、5%和0.1%。运用该方法对9个市售配方羊奶粉进行分析,检测结果与商品化酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒一致。该方法前处理快速简单,5 min即可裸眼判定结果,可用于配方羊奶粉商品的现场快速检测。     

Immumochromatographic assay for determination of hexoestrol residues

One-step membrane-based competitive colloidal gold-based immunoassays in lateral-flow formats for the rapid detection of hexoestrol (HES) were developed. Nitrocellulose membrane strip was separately coated with goat anti-rabbit IgG (control line) and HES hapten–OVA conjugate (test line). Anti-HES polyclonal antibody labelled with colloidal gold particles was firstly incubated with HES. A positive reaction as a result of the remaining antibody–gold conjugate combining with antigen coated on the membrane was obvious by visual detection, with detection limits for lateral flow of 10 μg/kg for detecting HES standard solution, and the limit of detection was 20 μg/kg for detecting the HES spiked in swine urine and liver. The assay time for test was less than 5 min, suitable for rapid testing on-site.     

同时检测两种真菌毒素的胶体金试纸条的研制

目的：研究制备同时检测黄曲霉毒素B1（aflatoxin B1,AFB1）和赭曲霉毒素A（ochratoxinA,OA）两种真菌毒素的胶体金快速检测卡。方法：以人工合成抗原OVA-AFB1、OVA—OA和抗AFB1单克隆抗体、抗OA单克隆抗体为原料,用硝酸纤维膜和玻璃纤维纸作为载体,制作出同时检测AFB,和OA的胶体金...     

三聚氰胺单克隆抗体制备与鉴定

目的制备高度特异的三聚氰胺单克隆抗体,经酶联免疫吸附试验鉴定并制备胶体金试剂盒。方法以牛血清白蛋白交联的三聚氰胺为抗原,免疫BALB/c小鼠,通过传统杂交瘤融合和筛选技术制备抗三聚氰胺单克隆抗体,经纯化制备腹水,采用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immune sorbent assay, ELISA)对抗体进行效价测定、亚类测定、交叉鉴定和蛋白质免疫印迹试验(westernblot)特异性鉴定后制备胶体金试剂盒。结果筛选出1株抗三聚氰胺单抗,制备的三聚氰胺胶体金试剂盒敏感值能达到30μg/L。结论获得了高度特异的且能稳定分泌三聚氰胺抗体的细胞株。     

胶体金免疫层析法快速检测黄曲霉毒素B1的研究

本文应用胶体金免疫层析技术,建立了一种快速检测食品中黄曲霉毒素B1的方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体并喷于玻璃纤维上,黄曲霉毒素B1偶联抗原和二抗鼠抗驴分别结合于硝酸纤维膜上,依次将样本垫、胶金垫、硝酸纤维膜和吸水纸组装切割成胶体金试纸条并装入检测卡中。测试结果表明黄曲霉毒素B1快速检测试纸条的灵敏度为5ng/ml,检测时间为10min,批内和批间重复性为100%,假阳性率和假阴性率均为0。使用简单方便,非常适合现场快速检测黄曲霉毒素B1。