乳品中β-内酰胺类抗生素快速检测试纸条研制

通过β-内酰胺类抗生素-载体蛋白偶联物的合成,单克隆抗体的制备与纯化,胶体金标记物的制备,β-内酰胺类抗生素单克隆抗体-胶体金标记物的制备并冻干到微孔试剂,样品吸收垫和反应膜的制备等研究过程,研制出乳制品中β-内酰胺类抗生素的快速检测试纸条。检测限分别为:青霉素G2μg/L、氨苄青霉素4μg/L、阿莫西林5μg/L、苯唑青霉素/邻青霉素/双青霉素均为6μg/L、头孢洛宁10μg/L、萘夫西林20μg/L、头孢喹肟20μg/L、头孢曲松25μg/L、头孢哌酮50μg/L、头孢噻呋90μg/L;本试纸条特异性好、假阳性率不高于3%、假阴性率为0,检测时间不超过15min,检测限量达到了我国和欧盟的要求,适用于乳品流通环节乳品中β-内酰胺类抗生素残留的检测。     

牛奶中β-内酰胺类和三聚氰胺检测方法的建立

建立一种快速、简便,同时针对牛奶中β-内酰胺类抗生素和三聚氰胺残留的检测方法。应用竞争抑制免疫层析原理,研制β-内酰胺类和三聚氰胺胶体金试纸条。该试纸条检测限分别为青霉素G2μg/L、氨苄青霉素3μg/L、阿莫西林3μg/L、苯唑青霉素6μg/L、邻氯青霉素6μg/L、双氯青霉素6μg/L、萘夫西林20μg/L、头孢喹肟20μg/L、头孢哌酮40μg/L、头孢曲松50μg/L、头孢噻呋90μg/L、头孢洛宁10μg/L、三聚氰胺50μg/L,假阳性率低于5%、假阴性率为0,检测时间不超过15min。该方法操作简便、灵敏度高、特异性强,适用于乳品流通环节中β-内酰胺类抗生素和三聚氰胺残留的快速检测。     

嗜热脂肪芽孢杆菌试管法检测牛乳中β-内酰胺类抗生素残留

采用嗜热脂肪芽孢杆菌试管法对牛乳中6种最为常见的β-内酰胺类抗生素残留进行检测,指出嗜热脂肪芽孢杆菌试管法为半定量检测法,对牛乳中β-内酰胺类抗生素残留具有较好的灵敏性.牛乳中青霉素G、氨苄青霉素、羟氨苄青霉素的检测限为6μg/kg,头孢氨苄的检测限为150μg/kg,苯唑青霉素的检测限为15μg/kg、头孢匹林的检测限为30μg/kg.在检测时间、操作难易程度上较BSDA法具有一定的优越性,可应用于牛乳中β-内酰胺类抗生素残留的检测.     

应用酶联免疫技术建立鲜乳中β-内酰胺酶间接检测方法

建立酶联免疫间接快速测定鲜乳中β-内酰胺酶的方法。方法 应用氨苄青霉素抗体,人工制备氨苄青霉素和辣根过氧化物酶的结合物Amp-HRP,建立氨苄青霉素酶联免疫检测方法。应用该方法分别检测样品反应管和阴性对照管中氨苄青霉素,通过比较两者OD₄₅₀值,间接判断样品中是否含有β-内酰胺酶。结果 成功建立了酶联免疫间接快速测定鲜乳中β-内酰胺酶的方法,检测灵敏度可达0.0005IU/ml。结论 该方法检测结果准确可靠,可广泛应用于鲜乳中β-内酰胺酶的检测。     

青霉素结合蛋白的重组表达及其在β-内酰胺类抗生素检测中的应用

目的 获得重组表达纯化的青霉素结合蛋白(penicillin binding proteins, PBPs),研究其在β-内酰胺类抗生素检测中的应用。方法 以来源于肺炎链球菌Streptococcus pneumoniae R6的PBP2x蛋白为对照,以PBP1a蛋白作为目标受体,研究其与β-内酰胺类抗生素的亲和作用。结果 经纯化后的重组蛋白PBP2x和PBP1a检测头孢噻呋、青霉素G、氨苄青霉素、喷沙西林、阿莫西林的半抑制浓度(inhibitory concentration, IC50)都在7.02 ng/mL以下,明确了PBP1a和PBP2x具有β-内酰胺类抗生素结合能力。结论 该研究为开发新的基于PBPs蛋白检测β-内酰胺类抗生素的免疫学方法奠定了基础。     

动物源食品中β-内酰胺类抗生素多残留免疫分析方法研究进展

β-内酰胺类抗生素是指化学结构中含有β-内酰胺环的一类抗生素,主要包括青霉素类和头孢菌素类.由于其使用方法不当或不遵守休药期规定等原因给人类健康带来严重危害.本文介绍了动物源食品中β-内酰胺类抗生素的现有残留检测方法,以及实现多残留快速检测的实验思路,包括目标抗体的获得和检测技术的选择.     

牛奶中β-内酰胺和四环素类抗生素二联检测试纸条的初步研究

抗生素越来越多地被应用于畜牧业中,其在乳制品中的残留问题也备受关注.乳品中残留抗生素不仅危害人体的健康,而且影响经济贸易的正常进行.为适应基层检测牛奶中抗生素残留的需求,作者采用胶体金免疫层析方法,建立了可以同时测定牛奶中的β-内酰胺类抗生素和四环素类抗生素的二联胶体金试纸条.该方法简单可靠,可同时检测牛奶中12种β-内酰胺类抗生素和4种四环素类抗生素,是一种值得推广的定性筛选方法,可作为液相色谱等定量检测仪器法的补充.     

采用液相色谱-串联质谱法准确测定原料奶中的舒巴坦

正舒巴坦是一种典型的竞争性不可逆的β-内酰胺酶抑制剂,与β-内酰胺环类抗生素联合应用,通过对酶的抑制,保护抗生素免受破坏,提高抗菌活性,被广泛应用于医疗行业。由于原料奶中的青霉素类抗生素残留量有限量要求,因此为消除这种青霉素类抗生素残留,不法商贩向原料奶中添加β-内酰胺酶来降解抗生素;而为了逃避质检机构对β-内酰胺酶的检测,商贩极     

乳及乳制品中β-内酰胺酶抑制剂检测方法的研究进展

β-内酰胺酶可降解乳及乳制品中的残留抗生素,是国家严格监管的非法添加物质。通过添加β-内酰胺酶抑制剂可抑制β-内酰胺酶的活性,干扰β-内酰胺酶阳性奶的检出,非法添加行为严重威胁消费者身体健康,降低了群众对乳品安全的信任度。本文综述了β-内酰胺酶抑制剂(克拉维酸、舒巴坦、他唑巴坦)的分类、性质及其检测方法的研究进展,主要包括分光光度法、微生物法、高效液相色谱法、液相色谱串联质谱法、酶联免疫吸附法、生物传感器等方法,并探讨这些方法在乳及乳制品中的应用及其优缺点,为建立乳品中β-内酰胺酶抑制剂的标准检验方法提供理论和实验依据。     

牛乳中氨苄青霉素残留的受体分析法测定

建立基于受体识别技术检测牛乳青霉素类抗生素残留的新方法。通过生物技术制备与青霉素类抗生素具有高度亲和力的受体蛋白质,进而以其为识别元件开发间接竞争氨苄青霉素残留检测方法。青霉素受体包被质量浓度5μg/mL,生物素化氨苄青霉素质量浓度500ng/mL 条件下,对其残留量进行测定,检出限为2μg/kg,有较好的精密度及回收率。在样品中残留的青霉素种类已知的前题下(以氨苄青霉素为例),本方法可以作为定量筛选方法。     

LC-MS/MS测定动物源食品中10种β-内酰胺类抗生素残留

采用高效液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定动物源食品中青霉素G、青霉素V、阿莫西林、氨苄西林、苯唑青霉素、萘夫西林、双氯西林、哌拉西林、头孢氨苄、头孢唑林等10种β-内酰胺类抗生素残留量,以青霉素G-D7为内标。样品用磷酸盐缓冲溶液提取(鸡蛋和牛奶样品提取后用乙酸锌和亚铁氰化钾沉淀蛋白),然后提取液用正己烷除脂,经PEP-2固相萃取柱净化,采用高效液相色谱-串联质谱测定,内标法定量。在相应浓度范围内,10种β-内酰胺类抗生素线性系数R2均大于0.99,检测限为0.25~2.0μg/L。在低、中、高3个浓度水平下,10种β-内酰胺类抗生素在不同基质中的回收率均在80%~120%之间,相对标准偏差小于10%。该方法可以满足不同基质的动物源食品中上述10种β-内酰胺类抗生素的测定需求。     

动物源性食品中β-内酰胺类抗生素前处理及检测方法研究进展

β-内酰胺类抗生素兽药残留是目前重要的动物源性食品安全问题之一,检测食物基质中痕量兽药残留依赖于有效的前处理方法和精密的分析仪器。文中阐述了β-内酰胺类抗生素兽药的研究背景和现状,并对国内外食品中β-内酰胺类抗生素兽药残留的液液萃取、固相萃取(SPE)、基质辅助固相分散萃取和Qu ECHERs等前处理方法及微生物测定、免疫测定、液相色谱法、液相色谱质谱法、毛细管电泳分析方法等检测方法进行了综述,拟为动物源性食品中β-内酰胺类抗生素药物的残留监控提供理论参考,综述指出SPE为最有前景的前处理方法,而质谱技术的发展和仪器的小型化为检测仪器的发展趋势。     

液相色谱-串联质谱法测定水产品中β-内酰胺类抗生素的残留

建立了同时测定水产品中,6种β-内酰胺类抗生素药物残留的高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)检测方法.样品经乙腈-水(15∶2,v∶v)混合液提取,HLB固相萃取柱净化.以乙腈-0.01mol/L醋酸铵溶液(pH4.5)作为流动相,C18色谱柱进行分离,电喷雾正离子多反应监测模式进行检测.方法检测限为0.2～2.0μg/kg,加标回收率为80.8％～92.9％,相对标准偏差为2.6％～9.1％(n=9).该方法准确、灵敏、简便,适用于水产品中6种β-内酰胺类抗生素残留的测定.     

利用反相阳离子交换混合模式色谱同时检测10种β-内酰胺类抗生素

建立了反相/弱阳离子交换混合模式色谱(C18/WCX)对10种β-内酰胺类抗生素(头孢羟氨苄、头孢替唑钠、头孢呋辛钠、头孢唑啉、头孢拉定、头孢西酮、头孢孟多酯钠、头孢噻吩、哌拉西林、氯唑西林钠)同时检测的方法。以乙腈/甲酸铵/水为流动相,与常规反相色谱分析Unitary C18为对照,结果表明,中性条件下优化流动相洗脱梯度,10种β-内酰胺类抗生素在C18/WCX具有较高的分离选择性。通过缓冲盐浓度和pH值的调控,发现C18/WCX与样品间分离机制由反相作用力与离子交换两种作用力共同作用。研究表明,混合模式色谱在β-内酰胺类抗生素的分离分析中具有较大的潜力。     

2005—2016年宁波市3种来源的非伤寒沙门菌对β-内酰胺类抗生素耐药性

目的 采用氨苄青霉素和第三代头孢菌素耐药水平、产超广谱β-内酰胺酶水平和可能耐药分子机制等指标,评价非伤寒沙门菌对β-内酰胺类抗生素的耐药水平,为相关疾病控制和治疗提供数据支撑。方法 采用美国临床和实验室标准化研究所(CLSI)纸片法检测2005—2016年宁波市在临床患者、食品和河水中分离的非伤寒沙门菌菌株对氨苄青霉素、头孢曲松和头孢曲松/克拉维酸的耐药水平,并通过聚合酶链式反应(PCR)技术检测菌株中是否携带有blaTEM、blaCTX-M和blaOXA 3种编码β-内酰胺酶的耐药基因以及1类(IntI1)和2类整合子基因(IntI2)。结果 从临床患者、食品和河水中共分离893株非伤寒沙门菌,其对氨苄青霉素的耐药率为37.8%(338/893),对头孢曲松耐药和产超广谱β-内酰胺酶的菌株占比分别为7.7%(69/893)和7.3%(65/893)。检测菌株中耐氨苄青霉素最高的3种血清型为印第安纳沙门菌(100.0%,11/11)、德尔卑沙门菌(69.7%,23/33)和鼠伤寒沙门菌(57.4%,148/258)。其他检出对头孢曲松耐药和产超广谱β-内酰胺酶的非伤寒沙门菌血清型有阿贡那沙门菌(4株)、肯塔基沙门菌(2株)和明斯特沙门菌(2株)。blaTEM基因主要存在于只对氨苄青霉素有耐药性的菌株中,blaCTX-M和blaOXA基因主要存在于对头孢曲松有耐药性的菌株中。检出的IntI1基因均为完整的整合子结构,包含1类整合子3′端Sul1和qacEΔ1基因,未检出IntI2基因。结论 分离自临床患者、食品和河水中的非伤寒沙门菌对氨苄青霉素具有较高的耐药水平,对第三代头孢菌素表现一定程度的耐药性。在印第安纳沙门菌、德尔卑沙门菌和鼠伤寒沙门菌等血清型中存在高水平的β-内酰胺类抗生素耐药现象。对β-内酰胺类抗生素耐药的非伤寒沙门菌具有较复杂的的分子机制,增加了耐药扩散的风险,应加强对非伤寒沙门菌耐药水平的监测和耐药机制的分析。     

利用反相阳离子交换混合模式色谱法同时检测10种β-内酰胺类抗生素

目的建立反相/弱阳离子交换混合模式色谱(C18/WCX)对10种β-内酰胺类抗生素(头孢羟氨苄、头孢替唑钠、头孢呋辛钠、头孢唑啉、头孢拉定、头孢西酮、头孢孟多酯钠、头孢噻吩、哌拉西林、氯唑西林钠)同时检测的方法。方法以C18/WCX为固定相,以乙腈:甲酸铵:水为流动相,流速为1 m L/min;温度为30℃;检测波长为254 nm,并以常规反相色谱分析柱Unitary C18为对照。结果结果表明,中性条件下优化流动相洗脱梯度,10种β-内酰胺类抗生素在C18/WCX具有较高的分离选择性。通过缓冲盐浓度和p H值的调控,发现C18/WCX与样品间分离机制由反相作用力与离子交换2种作用力共同作用。结论研究表明,混合模式色谱在β-内酰胺类抗生素的分离分析中具有较大的潜力。     

抗生素分解剂β-内酰胺酶的检测方法研究

本研究是利用β-内酰胺酶对青霉素G的特异性分解作用以及舒巴坦对β-内酰胺酶活性有抑制作用原理,按比例添加青霉素G、抑制剂舒巴坦、β-内酰胺酶和被测物,根据添加有一定浓度的藤黄微球菌琼脂平皿上所产生的抑菌圈大小,建立了该酶的检测方法进而对非法添加和残留有β-内酰胺酶的食品进行定性检测.该方法在乳制品中对β-内酰胺酶的检出...     

基于量子点二抗偶联物的荧光免疫分析法测定牛奶中的氨苄青霉素

目的建立基于量子点二抗偶联物的荧光免疫分析法测定牛奶中的氨苄青霉素。方法采用共价偶联的方法将Qdot 655红色荧光量子点(quantum dots, QDs)与二抗偶联,利用制备好的QDs-二抗偶联物代替传统酶标二抗应用到检测牛奶中氨苄青霉素残留检测的荧光免疫分析方法中,并将该方法与酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)和高效液相色谱法(high performance liquid chromatography, HPLC)进行比较。结果该方法 50%抑制浓度(IC50)为8.3μg/L;检测限为2.5μg/L。空白牛奶加标回收率为94.0%～106.2%,变异系数为2.1%～9.2%。在实际样品的检测中,该方法与ELISA方法和HPLC方法测定的结果相比无显著差异(P0.05)。结论该方法准确、灵敏,适用于牛奶中氨苄青霉素残留的检测。     

液相色谱-串联质谱法测定禽蛋中β-内酰胺类药物残留

目的 建立了禽蛋中普鲁卡因青霉素、青霉素V、青霉素G、氨苄西林、氯唑西林、阿莫西林、头孢氨苄、头孢噻呋、头孢喹肟药物残留检测的液相色谱-串联质谱方法。方法 禽蛋用80%乙腈水溶液提取,PRiME HLB固相萃取小柱净化,用液相色谱-串联质谱测定,青霉素G-D7内标法定量。结果 在0.5-20μg/L的基质匹配标准溶液内9种β－内酰胺类药物均呈良好线性关系,相关系数均大于0.994。样品中9种β－内酰类药物的定量限为1μg/kg,在1μg/kg～10μg/kg的添加浓度范围内平均回收率为73%～96%,相对标准偏差(RSD)小于10%。本方法方便快捷准确,适于禽蛋中的9种β－内酰胺类药物残留检测。     

LC-MS/MS测定牛奶中六种青霉素类抗生素残留

目的建立一种用LC-MS/MS快速测定牛奶中6种青霉素类抗生素残留的方法。方法选择青霉素G-D7为内标,样品经乙腈沉淀蛋白,SPE柱净化、浓缩,有效地去除杂质。经高效液相色谱C18柱分离,选用含0·1%甲酸的水和乙腈作流动相,在26min内,在线梯度洗脱将6种青霉素类抗生素得以分离。结果方法检出限为青霉素G0·02ng/ml、青霉素V0·06ng/ml、苯唑西林0·04ng/ml、氯唑西林0·11ng/ml、奈夫西林0·02ng/ml、双氯唑西林0·19ng/ml,在0·2~2·0ng/ml线性范围内,相关系数r为0·991,回收率大于90%,方法精密度为4·87%。结论该方法准确可靠,重复性好,灵敏度高。可适用于牛奶中多组分β-内酰胺类抗生素的确认和准确定量检测,能满足各国对上述β-内酰胺类抗生素的最低检出要求。