秘鲁鱿鱼肌动蛋白的分离纯化及结构初探

目的:建立从秘鲁鱿鱼肌原纤维蛋白中分离纯化肌动蛋白的方法,实现肌动蛋白的批量制备。方法:使用磷酸盐缓冲液从秘鲁鱿鱼中提取肌原纤维混合蛋白,提取液首先经过阴离子交换层析分离出只有微小电荷差别的蛋白质,然后用凝胶过滤层析对混合组分中的小分子物质进行去除(如脱盐等操作),再使用大分子蛋白分离纯化系统纯化,得到纯度高的肌动蛋白(AC)。采用SDS-PAGE、HPLC、MALDI-TOF-MS 3种方法鉴定所分离的蛋白纯度和分子质量,采用光散射技术对肌动蛋白在溶液中的粒径分布进行表征。结果:本文从肌原纤维蛋白中提取出了纯度较高的肌动蛋白,且肌动蛋白的水力学半径(Rh)为3.46 nm。结论:初步建立一种分离纯化肌原纤维蛋白中AC的新方法,为实现肌动蛋白的批量制备提供技术支撑。     

牛乳中骨桥蛋白的分离纯化与鉴定

从新鲜牛乳中分离纯化骨桥蛋白,并对其进行鉴定。运用生物化学技术,通过离心脱脂后,再经过离子交换层析、疏水层析、透析等技术达到分离纯化目的;随后对分离纯化得到的产物进行SDS-PAGE电泳、免疫印迹技术鉴定。分离纯化得到分子质量约为60 ku、纯度95%以上的高活性骨桥蛋白。通过上述方法可以得到纯度较高的骨桥蛋白,为将来进一步对骨桥蛋白活性及结构研究奠定了基础。     

乳清浓缩蛋白中的α-乳白蛋白的分离纯化

以乳清浓缩蛋白(WPC80)原料,分离纯化得到高纯度的α-乳白蛋白.采用选择性沉淀法,通过搅拌沉淀、离心、NaCl清洗和复溶等过程分离纯化α-乳白蛋白,同时采用SDS-PAGE电泳和反相高校液相色谱分析各阶段蛋白溶液,以筛选出各阶段反应的最佳条件.最终获得的α-乳白蛋白制备品的纯度为73%,其回收率为85%左右,并除去了WPC中95%的β-乳球蛋白.采用此种方法分离纯化的α-乳白蛋白纯度高,可以应用于婴儿配方食品的生产.     

核桃分离蛋白的制备工艺优化及功能特性北大核心CSCD

为制备蛋白纯度高于90%的核桃分离蛋白,采用糖化酶纯化核桃蛋白,探究了酶解温度、酶解pH、酶解时间、加酶量和料液比5个因素对核桃蛋白提取率和纯度的影响,并与低变性核桃蛋白粉(由核桃仁仅经过脱脂制备)比较考察其氨基酸组成与功能特性。结果表明,核桃蛋白纯化的最佳工艺条件为:加酶量80 U/g,料液比1∶8,酶解温度55℃,酶解时间40 min,酶解pH 5.0。在最优条件下,蛋白纯度为94.37%。制备的核桃分离蛋白氨基酸组成合理,持水性为3.72 g/g,吸油性为1.57 g/g,乳化性为57.60%,均明显优于低变性核桃蛋白粉。研究证明糖化酶纯化法得到的核桃分离蛋白品质较好。     

蒲公英中绿原酸的提取纯化及表征

目的:将蒲公英中绿原酸进行提取、纯化,建立一套高效的纯化方法,并对产品进行表征。方法:优选蒲公英粉碎,超声波提取得粗提液,蒸出乙醇后,经大孔树脂和聚酰胺柱层析进行分离纯化,进行梯度洗脱,乙酸乙酯重结晶得产品。结果:经过高效液相色谱、紫外-可见光谱、核磁共振氢谱、傅里叶变换红外光谱技术分析得产品为绿原酸,产率为0.072%,高效液相色谱显示其纯度可达99.8%。结论:采用超声波粗提-柱层析分离-产品结晶的方法,可有效提取蒲公英中的绿原酸,产品纯度高。     

组氨酸标签蛋白纯化介质——EDTA-壳聚糖的制备与应用

以离子液体为溶剂,溶解具有较强金属螯合能力的EDTA-壳聚糖,能够保持较强的稳定性。将其用于涂膜处理,螯合两种金属离子(Ni2+,Zn2+),形成M2+-EDTA-壳聚糖(M=Ni,Zn),并对组氨酸标签蛋白进行特异性亲和纯化。结果表明:EDTA-壳聚糖经过涂膜处理后,形成坚韧而富有弹性的膜,用于组氨酸蛋白分离取得良好的效果,相比直接用于EGFP-(His)6-NH2蛋白纯化分离表现很大的优势,得到目的蛋白的纯度约为95%,与涂膜前相比,缩短了10 min的分离时间,且能更好地特异性吸附目的蛋白,在一定程度上节约了时间和成本。     

牛乳铁素的制备纯化与氨基酸序列分析

对牛乳铁素的制备和分离纯化方法进行研究.牛乳铁蛋白经胃蛋白酶水解,其产物经不同分离介质进行分离纯化,用毛细管电泳检测其纯度.用氨基酸分析仪确定其氨基酸组成,并进行适合度检验.结果表明,采用Butyl-Toyopearl 650M树脂分离,其纯度为95.6%.纯化出的产物氨基酸组成和序列与已知的牛乳铁素无显著差异.     

魔芋ACE抑制肽的分离纯化及活性检测

利用碱溶酸沉法从魔芋飞粉中提取魔芋蛋白,以魔芋蛋白为原料,利用碱性蛋白酶酶解制备魔芋ACE抑制肽粗品;其粗品通过超滤法除去大分子杂质,再经过Sephadex G-15柱层析分离,最后经过RP-HPLC纯化后得到纯度较高的魔芋ACE抑制肽,并且对超滤膜进行选择、Sephadex G-15柱层析分离进行条件优化;以马尿酸含量为指标,紫外分光光度法测其活性。实验结果表明:选择规格为1 kDa超滤膜;Sephadex G-15最佳分离条件为浓度为120 mg/mL、流速为0.8 mL/min、上样量为1.0 mL;经过RP-HPLC纯化后得到魔芋ACE抑制肽抑制率可达到92.85%。空白液中Hip含量为22.50 mg,反应液中Hip含量为9.22 mg,说明魔芋ACE抑制肽抑制活性较好。     

利用硅胶柱层析分离纯化平贝总碱的研究

目的：对东北特产平贝母的生物碱进行分离纯化研究。方法：用硅胶柱层析法对平贝总碱进行分离纯化,固定相为薄层层析硅胶G,流动相为乙酸乙酯- 甲醇- 氨水(17:2:1)。用HPLC-ELSD 法对分离出的贝母素甲和贝母素乙的纯度进行测定。结果：分离出贝母素甲和贝母素乙,贝母素甲纯度为93.19%、贝母素乙纯度为92.09%。结论：采用的硅胶柱层析分离纯化可得到纯度较高的分离组分。     

人参中人参皂苷提取分离研究进展

人参皂苷是人参的主要活性成分之一,具有提高免疫力,抗氧化,抗疲劳,抗肿瘤等多种药理活性作用,如何高效率得到高质量的人参皂苷现已成为研究热点。因此,本文综述了人参皂苷提取、分离纯化方法,并对其进行了比较,为其确定人参皂苷的最佳提取分离纯化方法,旨在为人参皂苷开发和利用提供一定的科学依据。     

Characterization of Water Extractable Crude Polysaccharides from Cherry,Raspberry, and Ginseng Berry Fruits: Chemical Composition and Bioactivity

Water extractable crude polysaccharides from three sweet cherry varieties, raspberries, and ginseng berry pulp were evaluated for their chemical composition, structural features, molecular weight, and bioactive properties. The yields of the crude polysaccharides isolated from cherries, raspberries, and ginseng berry pulp ranged from 0.79 to 0.18% on a dry weight fruit basis. All of the crude polysaccharides contained protein, phenolic compounds, and uronic acid. Each crude polysaccharide contained the sugar monomers: rhamnose, arabinose, xylose, mannose, galactose, and glucose. Of the water extractable polysaccharides obtained from the mature fruits, the crude polysaccharides from the raspberries had the highest molecular weight while the crude polysaccharides from the ginseng berry pulp had the smallest molecular weight. Results from Fourier transform infrared spectroscopy suggested that the crude polysaccharides contained a monosaccharide with six carbon atoms in a D-glucopyranose ring and a protein component. The crude polysaccharides from cherries, raspberries, and ginseng berry pulp were shown to possess antioxidant activity as determined with the ferric reducing antioxidant power and the 2,2-azinobis (3-ethyl-benzothiazoline-6-sulfonic acid) (ABTS) radical scavenging assays. The effect of crude polysaccharides on: (1) caspase 3 activation, which was determined using a hypoxia/reoxygenation model, and (2) immunostimulation, which was determined by evaluating the inflammatory mediator response, were examined. Only crude polysaccharides obtained from certain varieties of sweet cherries inhibited caspase 3 activation in a dose-dependent manner, while only the crude polysaccharides obtained from ginseng berry pulp stimulated immune function. Crude polysaccharides present in small fruits do possess bioactivities that may enhance human health.     

响应曲面法优化人参种籽蛋白提取工艺

为提高人参籽粕蛋白的提取率,采用碱溶酸沉工艺,在单因素实验基础上,采用Box-Benhnken响应曲面法优化提取工艺参数。结果为提取时间40.07min,pH9.97,料液比1:16,提取温度40.01℃,回归方程R2=0.9998,验证实验蛋白质平均提取率为65.74%,与预测值相近,响应模型可靠。     

人参山药挤压膨化工艺优化及其理化性质研究

采用双螺杆挤压膨化工艺制备人参、山药膨化制品,并研究其最佳工艺条件及其膨化前后理化性质的变化。以生晒参、山药饮片为实验材料,将生晒参粉与山药饮片粉按1:1比例混合,在单因素的基础上,以膨化制品的径向膨化率为考察指标,根据L₉(34)正交表进行正交试验,确定人参、山药复合粉挤压膨化的最佳工艺参数,并对膨化前后的营养品质、物理化特性、有效成分进行比较分析。结果显示:人参、山药复合挤压膨化的最佳工艺参数为:螺杆转速为250 r/min,Ⅲ区温度160 ℃,物料水分含量24%,在此条件下得到疏松多孔的膨化制品,产品径向膨化率达到最大值为2.43。人参、山药复合粉挤膨化后与膨化前营养化学成分相比,粗灰分含量差异不大(P>0.05),粗脂肪、TDF、IDF、粗蛋白质、可溶性蛋白质、总淀粉、支链淀粉含量均降低(P<0.05);可溶性膳食纤维、直链淀粉均有提高(P<0.05),分别提高了12.96%、18.03%。膨化后与膨化前物理特性比较,糊化度、WSI、WAI均有提高;人参、山药复合粉基本营养化学成分与物理特性相关性分析表明,膨化前后的糊化度变化率与淀粉含量变化率、支链淀粉含量变化率呈显著负相关(P<0.05),WAI值的变化率与IDF呈极显著正相关(P<0.01),WSI值与支链淀粉、脂肪、TDF、IDF含量变化率呈显著负相关(P<0.05)。膨化前后人参总皂苷由5.50%下降到5.15%,差异显著(P<0.05)。结论:通过挤压膨化技术的应用,使人参、山药复合粉的理化性质得到了改善,为进一步研究奠定理论基础。     

大豆分离蛋白基参菌薄片生产工艺及其品质研究

目的：基于大豆分离蛋白、木耳、榛蘑、元蘑、滑子蘑和人参等原料加工制成大豆分离蛋白基参菌薄片(Soy protein isolate based ginseng mushroom thin slice, SPGMTS)食品。方法：采用单因素及响应面试验法优化大豆分离蛋白基参菌薄片生产工艺,并对其品质、理化特性进行检测。结果：参菌粉粒度 210 目、人参粉用量 3.1%、涂膜厚度 0.80 mm和海藻酸钠用量 8.41%的情况下,SPGMTS的食品感官评分最高达 94.7 分。理化特性分析发现SPGMTS中蛋白质、脂肪和灰分含量分别为39.14 g/100g、3.98 g/100g和5.84 g/100g。此外,SPGMTS中包含异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、苏氨酸、缬氨酸、精氨酸、组氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、脯氨酸和丝氨酸。SPGMTS中人参皂苷Rb1、人参皂苷Re+Rg1和人参总皂苷含量分别为0.25 g/100、038 g/100和0.88 g/100。结论：影响大豆分离蛋白基参菌薄片在食品中感官评分的因素由大到小依次是参菌粉粒度、人参粉加入量、涂膜厚度、海藻酸钠加入量。本产品食用方便,吸收方便,营养丰富,清肺清肠,市场前景看好。     

人参蛋白对小鼠抗疲劳作用的研究

目的：研究人参蛋白对小鼠的抗疲劳作用。方法：选用昆明小鼠,经灌胃给予人参蛋白0.1,0.2,0.4g/kg,同时设空白对照组,连续灌胃30d。分别观察小鼠的体重变化情况、负重游泳时间、血乳酸、肝糖原和血清尿素氮的含量。结果：人参蛋白能明显延长小鼠游泳时间、降低血乳酸值、增加肝糖原及血清尿素氮含量。结论：人参蛋白具有增强小鼠抗疲劳功能的作用。     

人参浸提液处理对烧鸡食用品质的影响

为研制高品质的营养保健人参烧鸡产品,探究人参对烧鸡脂肪和蛋白氧化的抑制作用及食用品质的影响规律,以烧鸡为研究对象,探讨不同种类和不同添加量的人参对烧鸡的剪切力、pH值、出品率、色泽、质构、蛋白质羰基含量、蛋白质巯基含量、硫代巴比妥酸反应物质（thiobarbituric acid reaction substances,TBARS）值和感官评分等品质特性的影响。结果表明：红参浸提液的总皂苷含量最高,其对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除能力及2,2’-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)阳离子自由基清除能力最强;林下参浸提液中多酚和黄酮含量最高;随着人参添加量的增加,烧鸡的硬度与咀嚼性增强,L*、a*、b*值和巯基含量明显增加,TBARS值与羰基含量显著降低（P＜0.05）;人参添加量相同时,红参浸提液对烧鸡羰基及巯基含量的影响最大（P＜0.05）,白参浸提液处理烧鸡的TBARS值最高;烧鸡的感官评分随着人参添加量的增加先显著增大后显著降低（P＜0.05）,在添加量为1.0%时感官综合评分最高。因此,适当地加入人参浸提液可以改善烧鸡的色泽,提高烧鸡的食用品质,抑制脂肪与蛋白氧化,其中红参浸提液的作用效果最佳。     

Effects of high hydrostatic pressure on structure and colour of red ginseng (Panax ginseng)

BACKGROUND: The conventional method of processing ginseng (Panax ginseng) roots into red ginseng involves mainly heating and drying processes. In the present study, this method was modified by using high hydrostatic pressure (HHP) to improve the physicochemical characteristics of red ginseng. RESULTS: The HHP process (600 MPa for 1 min) significantly improved the histological properties of red ginseng by increasing cellular disruption and release of cell contents. The total reducing sugar content was significantly (P < 0.05) higher (increased from 10.67 to 15.25 mg g^?1) in red ginseng processed at 600 MPa for 1 min. Similarly, the total free amino acid content also increased significantly (from 2.81 to 7.77 mg g^?1). The HHP process resulted in superior and more even colouration and gave an attractive visual appearance to red ginseng. The optical density at 420 nm and Hunter's colour a value (redness) of extracts prepared from red ginseng increased significantly (P < 0.05) with the application of HHP. CONCLUSION: HHP‐processed red ginseng has significantly higher reducing sugar and free amino acid contents together with a more compact cell structure and superior visual quality (brighter red colour). Hence the application of HHP in red ginseng processing can result in ginseng products of improved quality compared with those obtained by the conventional method. Copyright © 2012 Society of Chemical Industry     

基于Heracles超快速气相电子鼻对不同产地西洋参快速鉴别研究

目的:应用Heracles超快速气相电子鼻技术建立不同产地西洋参基于气味差异的快速、有效鉴别方法。方法:采用Heracles超快速气相电子鼻对不同产地西洋参气味进行分析,获得西洋参样品的气味色谱信息,筛选色谱峰分离强度及区别能力强的色谱峰,结合Kovats保留指数及Arochembase数据库内容,对不同产地西洋参主要气味差异性化合物进行定性,通过主要差异化合物的气味阈值和相对含量,根据相对气味活度值（ROAV）分析主要差异化合物对西洋参气味的贡献程度大小,并进行PCA、DFA化学计量学模型分析。结果:通过Heracles超快速气相电子鼻从不同产地西洋参中筛选出丙醛、正戊醛、正己醛等13种主要差异化合物。通过对主要差异化合物的ROAV分析,确定正己醛、丙醛、十二醛、正戊醛、2,3,5-三甲基吡嗪、丁酸甲酯、2-庚醇7个主要差异化合物是对西洋参气味贡献较大的气味物质,其中正己醛是对西洋参气味贡献最大的关键气味化合物,正己醛、正戊醛、2,3,5-三甲基吡嗪、2-庚醇在美国产西洋参中含量最高;丙醛、丁酸甲酯在加拿大产西洋参中含量最高;十二醛在吉林产西洋参中含量最高。建立了PCA、DFA化学计量模型,PCA模型的识别指数为88,DFA模型的判别因子累计区分指数为100%,说明PCA、DFA模型均能较好地区分不同产地西洋参气味,能够对西洋参样品气味进行鉴别分析。结论:Heracles超快速气相电子鼻能够快速、有效地区别不同产地西洋参,为西洋参产地溯源提供了新的科学依据。     

人参蛋白对小鼠的耐缺氧及抗氧化作用

目的:研究人参蛋白对小鼠耐缺氧及抗氧化能力的影响。方法:通过常压耐缺氧、亚硝酸钠中毒、急性脑缺血性缺氧三项指标评价人参蛋白对小鼠的耐缺氧作用;通过测定肝脏和血清中丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性的变化,研究人参蛋白对小鼠体内抗氧化能力的影响。结果:与对照组比较人参蛋白组小鼠常压耐缺氧存活时间、亚硝酸钠中毒存活时间、急性脑缺血性缺氧张口喘气时间均延长;同时人参蛋白能降低肝脏和血清中丙二醛(MDA)的含量,并能提高肝脏和血清中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性。结论:人参蛋白对小鼠耐缺氧能力具有显著增强作用,对D-半乳糖造模小鼠有一定的抗氧化作用。     

不同年生西洋参中20种有机氯农药的气相色谱分析

建立西洋参中α-六六六(α-BHC)、4,4'-滴滴涕(4,4'-DDT)等20种有机氯农药残留量的一种简便有效的气相色谱分析方法,对陕西留坝县西洋参GAP生产基地不同种植地块、不同生长年限西洋参中有机氯农药的种类和含量进行测定,并探讨不同生长年限西洋参中有机氯农药富集规律。样品有机氯农药残留用正己烷-乙酸乙酯(1:1)溶液提取,通过弗罗里硅土小柱净化,正己烷-乙酸乙酯(1:1)溶液洗脱后浓缩定容,采用DB-17毛细管柱分离,气相色谱-电子捕获检测器(gas chromatography -electron capture detector,GC-ECD)检测,以保留时间定性,外标法定量。结果表明：10个西洋参样品中除异狄氏剂未检出外,标准溶液中的其他19种有机氯农药均有检出。不同种植地块同一生长年限西洋参有机氯农药残留含量差异较大,西洋参中有机氯农药残留含量基本呈现4年生西洋参高于3年生西洋参和5年生西洋参的规律。实验建立的方法简便有效,适用于西洋参中有机氯农药残留量的测定。