A1/A2型β-酪蛋白检测方法研究进展

乳中最常见的β-酪蛋白主要分为A1型和A2型。A2型为原始β-酪蛋白，而A1型等变异体是源于DNA突变所导致的氨基酸序列发生变化。由于A1 β-酪蛋白基因型的个体牛具有较高的产奶量，因此在不断选育后产生了大量的A1型等变异体。但研究表明，A2 β-酪蛋白比A1 β-酪蛋白表现出更好的生物活性。目前已开发出了各种A2奶类产品，但其中的A1/A2型β-酪蛋白的检测方法还未标准化。就目前常见的A2 β-酪蛋白的检测方法进行了分类阐述总结，分别从分子、蛋白质水平以及代谢物差异等方面检测A2 β-酪蛋白或检测A2奶中是否存在A1 β-酪蛋白。这对未来创新、改进检测A2 β-酪蛋白的方法以及建立乳制品中A2 β-酪蛋白检测及定量分析提供理论参考，以期更好的便携式现场检测方法标准化地应用于现实。     

水牛αS1-酪蛋白多态性对马苏里拉干酪品质的影响

目的分析水牛α_(S1)-酪蛋白多态性对马苏里拉干酪品质的影响。方法以α_(S1)-酪蛋白AB型、α_(S1)-酪蛋白BB型和混合组水牛乳样为原料分别制成全脂马苏里拉干酪,比较3组水牛乳样和干酪在组成、功能特性和微观结构等方面的差异。结果α_(S1)-酪蛋白AB型水牛乳在脂肪、蛋白质和总固形物含量上显著高于BB型。制成马苏里拉干酪后,AB型干酪的蛋白质含量显著高于BB型和混合组干酪。BB型和AB型干酪在硬度、咀嚼性和胶黏性上显著高于混合组。结论不同基因型α_(S1)-酪蛋白水牛乳的乳成分存在差异,α_(S1)-酪蛋白多态性与水牛乳马苏里拉干酪的组成、质构和融化特性等存在显著关联。     

A2β-酪蛋白的功能性及其在乳制品中应用的研究进展

牛奶中富含多种营养成分,包括蛋白质、脂质、碳水化合物等,每100 g牛奶中就含有3 g蛋白质,其中主要包括乳清蛋白和酪蛋白。β-酪蛋白占牛奶蛋白总量的24%～28%,其主要包括两种基因型：A1型与A2型。A1β酪蛋白经消化后产生的β-酪啡肽-7会导致人体消化功能紊乱、心血管疾病等不良反应。A2β-酪蛋白则产生较少甚至并不产生β-酪啡肽-7,在胃肠道消化、提高抗氧化功能、降低胆固醇浓度等方面具有益生作用。本文综述了β-酪蛋白基因型在人体内消化后所产生的影响,并阐述了A2β-酪蛋白的益生功能,讨论其对人体健康的作用。并从β-酪蛋白基因型在乳制品中的应用入手,阐述A2β-酪蛋白乳制品的研究进展,为今后乳制品中A2β-酪蛋白的功能研究提供指导意义。     

稳定同位素稀释-超高效液相色谱-三重四极杆质谱法测定牛奶及牛源性婴幼儿配方乳粉中A1型和A2型β-酪蛋白含量

目的 建立基于纯化蛋白和稳定同位素稀释-超高效液相色谱串联三重四极杆质谱法定性及定量测定牛奶及牛源性婴幼儿配方乳粉中A1和A2两种β－酪蛋白变异体的分析方法。方法 首先将β-酪蛋白标准品中A1和A2两种β－酪蛋白变异体在高效液相色谱仪上分离，通过各自的纯化蛋白确定两种变异体在标准品中的含量，再将试样中的牛β-酪蛋白经胰蛋白酶酶解成肽，经超高效液相色谱串联三重四级杆质谱检测。通过筛选的特异肽段，经β-酪蛋白标准品及稳定同位素稀释内标法计算，获得试样中牛β-酪蛋白A1变异体和A2变异体的含量。结果 本研究采用的β－酪蛋白标准对照品中A1和A2β－酪蛋白变异体含量分别为20.8%和55.1%，且在检测中两种变异体标准曲线的线性相关系数均大于0.99，方法重现性中相对标准偏差2.29%-4.72%。结论 本方法溯源性及精密度好，适用于牛奶及牛源性婴幼儿配方乳粉中两种β-酪蛋白变异体的测定。     

响应曲面法优化β-酪蛋白及其A1、A2型变异体检测方法的酶解条件

利用响应曲面法优化β-酪蛋白及其A1、A2型变异体超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）检测方法的酶解条件。将酶解设备（X1）、酶解时间（X2）和酶加入量（X3）作为影响因子，以A2型β-酪蛋白(Y1)、A1型β-酪蛋白(Y2)和β-酪蛋白总量（Y3）的质量浓度为评价指标。根据Box-Behnken中心组合试验设计原理，针对检测方法中酶解反应这一关键步骤，通过单因素实验优选，响应曲面法研究酶解时间（X2）和酶加入量（X3）与A2型β-酪蛋白(Y1)、A1型β-酪蛋白(Y2)和β-酪蛋白总量（Y3）之间的关系。确定最佳酶解条件为：酶解设备（X1）为水浴摇床，酶解时间（X2）为2.5 h，酶加入量（X3）为15μL。     

高原娟姗牛β-酪蛋白A2纯合基因型的筛选鉴定

为了筛选出A2A2基因型娟姗牛，组建A2型奶牛育种核心群，为A2牛奶的开发应用奠定基础。从云南欧亚乳业公司鹤庆有机牧场核心群选取385头娟姗牛进行尾静脉采血，提取血液中基因组DNA，检测浓度和纯度后，将提取的DNA进行PCR扩增并送公司测序，同时对血清中β-酪蛋白的含量进行检测。经不同公司各自使用不同引物进行检测，结果一致。在所有娟姗牛中，检测到3种基因型：A2A2基因型198头、A1A1基因型29头、A1A2基因型158头；3种基因型奶牛分别占51.43%、7.53%和41.04%,A2基因频率达71.95%。娟姗牛β-酪蛋白的平均含量为5.58μg/mL,A2A2型和A1A2型奶牛的β-酪蛋白含量均显著低于A1A1型奶牛（P<0.05），但是A2A2型和A1A2型奶牛之间则无统计学差异（P>0.05）。结果表明，通过DNA测序检测突变位点核苷酸能够鉴定出A2A2基因型娟姗牛，β-酪蛋白含量测定不能分辨出A2A2型和A1A2型娟姗牛。与ELISA蛋白检测方法相比，DNA测序法具有快速准确、成本较低等优点，可作为牛群分型的理想方法。     

商品发酵剂对凝固型核桃酸奶品质的影响研究

以鲜牛乳和核桃粕为原料,研究核桃粕添加量和9种市售商品酸奶发酵剂对凝固型核桃酸奶品质的影响。通过单因素试验研究核桃浆与鲜牛乳的适宜配比,以感官评分、酸度、持水力、硬度、黏度等为指标评价不同发酵剂对凝固型核桃酸奶品质的影响。结果表明核桃浆与鲜牛乳的适宜配比为1:5;7菌型酸奶发酵剂(1号)发酵的核桃酸奶品质较好,核桃酸奶黏度为6688.15mPa·s,持水力65%,硬度2.082 N,粘附力-0.742 N,挤压做功41.09 mJ,pH4.44,滴定酸度71.28°T;研究结果表明一些市售商品酸奶发酵剂可用于凝固型核桃酸奶的生产。     

酪蛋白与乳清蛋白比例对酸奶凝胶性质的影响

研究了乳中酪蛋白和乳清蛋白比例对凝固型酸奶流变学特性和微观结构的影响,结果表明,固定蛋白质质量分数、降低酪蛋白和乳清蛋白的比例,可以明显提高酸奶凝胶的质量.乳中蛋白质质量分数一致时,酸奶凝胶的硬度、黏度、持水力随着酪蛋白和乳清蛋白比例的减小而增大,凝胶网络结构变得更规则、致密,孔隙更小.在低蛋白质质量分数下,降低乳中酪...     

Κ-酪蛋白基因多态性与牛乳加工性能的关联

为比较不同κ-酪蛋白基因型牛乳在加工特性上的差异,采用流变仪等仪器检测不同基因型牛乳的流变性能、热稳定性、表面疏水性、抗氧化性及乳化性。研究结果表明这几种κ-酪蛋白基因型牛乳之间热稳定性、表面疏水性和抗氧化性没有显著差异,而κ-酪蛋白基因型AB和AA牛乳的流变性能显著好于AE和BE,且AE的乳化性能显著强于其它3种基因型的牛乳,这表明κ-酪蛋白基因多态性与乳品加工之间存在关联。     

乳清蛋白粉对凝固型酸奶品质的影响

为提高凝固型酸奶的品质及安全性,将1%、1.5%、2%、2.5%、3%、4%、5%乳清蛋白粉(Whey protein powder,WPP)加入全脂乳粉中生产酸奶,以不添加WPP的凝固型酸奶为对照组,测定酸奶酸度、持水力(WHC)、脱水收缩敏感性(STS)、质构特性、流变学特性和微观结构变化,并进行感官评定,研究不同添加量乳清蛋白粉对凝固型酸奶品质特性的影响,以确定WPP最适添加量。结果表明:随着乳清蛋白粉添加量的增加,酸奶的滴定酸度、持水力、乳酸菌总数、硬度、胶着性、粘弹性、凝胶性逐渐增加,脱水收缩敏感性(STS)逐渐减小;当WPP添加量为2%时,酸奶的持水力、粘弹性都明显提升,STS明显降低,且具有较好的口感、更连续的网络结构,与对照组相比综合品质得到明显提高。     

低温微滤处理对牛乳组成、胶束结构及凝乳性质的影响

β-酪蛋白具有低温溶出的特性。本文通过低温微滤处理制备了β-酪蛋白脱除率为10、20、30%的牛乳,运用HPLC、场发射扫描电镜、流变仪以及激光共聚焦研究了这些牛乳的蛋白组分、酪蛋白胶束结构及凝乳性质变化。结果表明：脱脂乳与低温微滤处理得到的牛乳样品的脂肪含量,总钙含量及pH值无显著性差异,但总蛋白含量有显著性差异,其中κ-酪蛋白和αs2-酪蛋白浓度无差异,αs1-酪蛋白浓度有显著差异,但低温处理样品间αs1-酪蛋白浓度则无差异,β-酪蛋白及乳清蛋白浓度差异极显著,其浓度随处理时间增加显著减小。脱脂乳与牛乳样品均可形成致密的具有空隙的凝胶结构,且其酸凝乳及酶凝乳所表现的流变学变化趋势相似,但随着β-酪蛋白脱除率升高,表征凝乳块硬度的最大G''逐渐下降,凝胶结构逐渐变疏松,出现的孔隙则更大更多。     

转谷氨酰胺酶对牛乳酪蛋白功能性质的影响

采用微生物转谷氨酰胺酶 (TG)对牛乳中的酪蛋白进行了酶法改性 ,并对改性后牛乳中酪蛋白功能性质如溶解性、起泡性、泡沫稳定性和持水性进行了研究 .结果表明 ,牛乳经TG作用后 ,其酪蛋白功能性质发生了较大变化 ,酪蛋白的起泡性、泡沫稳定性和持水性都有不同程度的增加 ,而溶解性略有下降 .实验中考察了TG作用的时间、温度、剂量等因素对酪蛋白功能性质的影响 ,结果显示 ,要获得综合性能优良的酪蛋白 ,TG最佳的作用条件为 :pH 7.0 ,5 0℃ ,6 0min ,酶的添加量0 .1～ 0 .2U/mL .     

低聚半乳糖糖基化法降低牛乳αs1-酪蛋白抗原性和免疫原性

用等电点沉淀法从牛乳中提取酪蛋白,根据αs-酪蛋白对尿素溶液溶解特性从酪蛋白中提取αs-酪蛋白,并用阴离子交换层析使αs1-酪蛋白与αs2-酪蛋白分离。用低聚半乳糖通过在一定条件下的美拉德反应对αs1-酪蛋白进行糖基化处理,通过竞争ELISA实验检测αs1-酪蛋白糖基化产物的抗原性。结果表明,该糖基化产物的抗原抗体结合常数Kd较αs1-酪蛋白上升3.7倍,即低聚半乳糖糖基化处理使αs1-酪蛋白的抗原性得到显著降低。用动物实验和非竞争ELISA实验检测αs1-酪蛋白糖基化产物的免疫原性,结果显示免疫原性降低19%,该实验证实对降低牛乳αs1-CN抗原性和免疫原性具有显著效果,为开发较理想的、切实可行的新脱敏奶粉生产技术提供了科学依据。     

改性乳清蛋白对凝固型酸奶品质及胆酸盐结合能力的影响

本研究利用酶结合苹果酸复合改性乳清蛋白（WPI-E+MA）,添加至凝固型酸奶,以期改良凝固型酸奶质构及胆盐结合能力。通过蛋白质浓度、持水力、游离巯基、粒径、粘弹性及胆酸盐结合能力等指标,评价WPIE+MA对凝固型酸奶品质、凝胶结构及胆酸盐结合能力的影响。结果表明,WPI-E+MA能够改善凝固型酸奶的持水力、表观粘度、剪切应力与粘弹性,8%添加量时达到最优;酸奶的凝胶网状交联结构因WPI-E+MA的添加变得更加致密、聚合度更高。脱氧胆酸钠（SDC）、胆酸钠（SC）、牛磺胆酸钠（STC）结合率均在8%的添加量达到最大值,结合能力良好。WPI-E+MA可有效改善凝固型凝固型酸奶的品质并显著提高胆酸盐结合能力。     

牛乳的过氧化物酶处理与凝固型酸奶品质的变化

利用辣根过氧化物酶和阿魏酸处理牛乳并制备凝固型酸奶,采用质构仪和流变仪分别对不同酸奶样品的质构和流变特性进行对比研究。研究结果表明,辣根过氧化物酶、阿魏酸和明胶的添加对酸奶样品的主要成分组成没有影响,但对酸奶质构和流变特性的影响较大。与对照样相比,添加明胶、添加酶和阿魏酸、添加酶酸奶样品的硬度分别增加38.03%、34.07%和17.08%,黏度分别增加45.13%、40.85%和28.36%,而乳清析出率分别降低12.02%、6.28%和3.41%。同时,酸奶的表观黏度、触变性和粘弹性也都增加,增幅最大者为添加明胶酸奶样品,其次是添加酶和阿魏酸的酸奶样品,增幅最小的是添加酶的酸奶样品。研究结果显示利用辣根过氧化物酶、阿魏酸处理牛乳可以改善凝固型酸奶的品质。     

牛乳中酪蛋白的结构特性及其应用

酪蛋白及其制品具有较高的营养价值和优良的功能特性,本文概述了牛乳中酪蛋白的组成及其结构特性,并针对其各种特性概述了在食品工业中的应用情况。     

定量分析加热后乳清蛋白与酪蛋白的结合

将复原脱脂乳在 70～ 90℃范围内加热 1 0～ 2 5min后 ,用超速离心分离出酪蛋白微粒 ,并用毛细管电泳法定量分析。结果显示 ,β-乳球蛋白更容易结合到酪蛋白微粒上。当加热条件为 70℃、1 0 min时就有相当多的 β-乳球蛋白发生了这种结合 ,这时酪蛋白微粒中没发现任何 α-乳清蛋白 ,只有当加热温度大于 75℃时才有少量 α-乳清蛋白与酪蛋白微粒结合。复原脱脂乳经 90℃、2 5min加热后几乎所有 β-乳球蛋白都已转入酪蛋白微粒部分 ,而只有近 50 %的α-乳清蛋白转入酪蛋白微粒。     

酪蛋白组分分离技术及消化性测定

本研究以牦牛乳干酪素为原料，分离得到纯度为74．2％的α-酪蛋白组分和纯度为75．0％的B．酪蛋白组分，其得率分别为69．5％和26．5％。通过酸凝性实验观察到在37℃，pH4．0条件下，α-酪蛋白组分形成了颗粒较大的凝块，而β-酪蛋白组分形成的是松软的絮凝物。体外消化实验结果亦显示β-酪蛋白组分的消化性要明显好于α-酪蛋白组分和牛乳酸沉酪蛋白。因而分离得到的β-酪蛋白组分可作为生产利于婴儿消化的新式配方乳粉的基料。     

酸奶的生产

当今世界上风行的多种酸奶,可以分为三种形式:1.凝固型酸奶这是一种传统形式的酸奶,牛乳在接种发酵剂后即进行分装。牛乳的发酵是在分装的容器内进行的。2.搅拌型酸奶牛乳的发酵是在大型储罐内进行的。发     

液相色谱-高分辨串联质谱法测定奶粉中A2β-酪蛋白及β-酪蛋白与乳清蛋白含量关系的研究

目的:建立奶粉中A2β-酪蛋白分离定量的液相色谱-高分辨串联质谱法,并利用婴儿配方奶粉中酪蛋白、乳清蛋白和总蛋白含量的关系,间接得到乳清蛋白含量。方法:样品经前处理后,采用ACQUITY UPLC HSS T_(3)柱(100 mm×2.1 mm×1.8μm),0.1%甲酸-水和乙腈为流动相,梯度洗脱分离。多反应离子监测模式定量测定其中的A2β-酪蛋白特征肽。结果:在0.02~2.0μmol/L范围内线性关系良好(r=0.9938)。在低、中、高三水平加标试验中,回收率在94.9%~98.7%,相对标准偏差在1.7%~3.7%,检出限为0.80 mg/100 g,可满足对奶粉中A2β-酪蛋白定量要求。采用该法对市售11批声称A2奶粉和18批未声称A2奶粉(以下简称A2奶粉和普通奶粉)中A2β-酪蛋白进行测定。结论:A2奶粉中A2β-酪蛋白占总β-酪蛋白含量的86.2%~98.7%,而普通奶粉则低至20.0%~50.0%。另外,乳清蛋白含量的间接测定值和理论计算值经统计分析,无明显差异(P>0.05),为分析婴儿配方奶粉中乳清蛋白含量是否符合国标要求提供参考。