冬虫夏草多糖单糖组成及免疫活性研究

以鲜冬虫夏草为原料,采用水提醇沉、Sevag法脱蛋白制备鲜冬虫夏草粗多糖(FCSP),通过苯酚硫酸法、考马斯亮蓝法、高效凝胶渗透色谱联用蒸发光散射检测器(HPGPC-ELSD)、傅立叶红外变换光谱(FT-IR)及离子色谱-脉冲安培检测器联用法(HPAEC-PAD)对FCSP的纯度、分子量分布、单糖组成进行分析,并考察FCSP刺激巨噬细胞增殖和释放NO、TNF-α的免疫活性。结果表明,粗多糖FCSP由葡萄糖(59.13%)、甘露糖(21.73%)和半乳糖(19.14%)三种单糖组成,且含有1.186×104 kDa(3.510%)、1.070×103 kDa(24.232%)和2.115×10 kDa(72.258%)三个多糖组分;体外细胞实验表明,FCSP可显著增强巨噬细胞增殖活性,有效刺激细胞释放NO和TNF-α(P<0.05)。FCSP良好的免疫调节作用可为后期药品的开发以及冬虫夏草新资源食品的申报提供参考。     

紫苏叶多糖分离纯化及体外抗氧化活性

通过水提醇沉法得到紫苏叶粗多糖（Perilla frutescens leaf polysaccharides，PFP），并用DEAE-52纤维素层析法对其进行分离纯化，获得4个多糖组分PFP-1、PFP-2、PFP-3和PFP-4。PFP-1为中性低聚糖，但总糖含量较低；PFP-2重均分子量为4.7 kDa，峰位分子量为2.2 kDa，主要组成单糖为半乳糖醛酸；PFP-3主要由两种分子量段的多糖组成，主要峰位分子量为5.2 kDa和40.0 kDa，为杂多糖，所含单糖种类较多，主要含半乳糖醛酸和半乳糖；PFP-4分子量较小，主要组成单糖为半乳糖和阿拉伯糖。体外抗氧化活性试验表明，PFP的DPPH自由基清除能力、ABTS+自由基清除活性和Fe3+还原能力较强，具有良好的抗氧化活性，其中组分PFP-3和PFP-4抗氧化活性与PFP接近，是其发挥抗氧化作用的关键组分。     

莴苣茎水溶性多糖的单糖组成及免疫调节活性研究

为了探究莴苣茎中多糖类物质,以莴苣茎为原料,水提醇沉法制备得到莴苣茎水溶性多糖,高效液相色谱法分析多糖的单糖组成,小鼠巨噬细胞RAW264.7给药试验研究多糖的免疫调节活性。结果表明:莴苣茎水溶性多糖主要由半乳糖醛酸、半乳糖和阿拉伯糖组成,其摩尔比为22.6030.4217.88;在试验的浓度范围内(5~200μg/mL),莴苣茎水溶性多糖可以显著提高小鼠巨噬细胞活力和吞噬中性红的能力,并刺激小鼠巨噬细胞分泌产生NO,表明其具有免疫调节活性。该研究结果可为莴苣茎的高效利用和产品开发提供理论依据。     

茉莉花渣中果胶型多糖的结构特征与免疫调节作用

为探究茉莉花渣中果胶型多糖的结构特征与免疫调节作用，本研究通过水提醇沉、蛋白脱除、阴离子交换柱层析和凝胶柱层析分离得到两种多糖JSP-3和JSP-4。通过相对重均分子量测定、单糖组成测定、部分酸水解液-质联用测定以及核磁共振波谱分析了两种多糖结构特征，最后以小鼠巨噬细胞RAW 264.7为模型，通过探究其对小鼠巨噬细胞的增殖率、吞噬率、ROS产生量以及NO、TNF-α、IL-6分泌量的影响来研究免疫调节作用。结果表明，JSP-3和JSP-4为两种均一多糖，相对重均分子量分别为15.48 kDa和 44.75 kDa，主要由半乳糖醛酸、鼠李糖、半乳糖和阿拉伯糖构成，存在不同比例的半乳糖醛酸聚糖结构域（JSP-3:32.87%±3.53%；JSP-4:68.64%±0.67%）与鼠李糖半乳糖醛酸聚糖结构域（JSP-3:61.12%±3.37%；JSP-4:28.28%±0.46%），说明两者均为果胶型多糖。与对照组相比，JSP-3和JSP-4在12.5~100 μg/mL的浓度范围内无细胞毒性，在一定浓度下能够通过促进小鼠巨噬细胞的吞噬作用，显著增加ROS产生量以及NO、TNF-α和IL-6的分泌量（P<0.05）。在相同浓度下，JSP-4比JSP-3能够刺激细胞分泌更多的NO、TNF-α和IL-6，说明JSP-4具有更强的免疫调节作用，这可能与其更高的半乳糖醛酸结构域比例和相对重均分子量有关。上述研究成果初步证明了茉莉花渣果胶型多糖的免疫调节作用，为其在免疫调节剂方面的应用提供了初步依据。     

铁皮石斛多糖不同级分的制备、性质分析及免疫调节活性比较

目的:制备铁皮石斛多糖(DOP)的不同分级组分,比较其理化性质及体外免疫调节活性的差异,并对多糖结构特征与活性的关系进行初探。方法:采用分级醇沉的方法获得铁皮石斛多糖不同分级组分,并对各组分的糖、糖醛酸、蛋白质含量、单糖组成、分子量进行分析。以巨噬细胞RAW264.7为研究模型,比较DOP不同分级组分的体外免疫调节活性。结果:DOP和四个组分(F30、F40、F50和F50S)均为中性糖,各组分糖醛酸含量较DOP均有所降低,F50S蛋白质含量最高。DOP、F30、F40、F50和F50S的平均分子量分别为262.4、314.5、248.3、202.9和136.2 kDa。DOP、F30、F40、F50和F50S均主要由甘露糖和葡萄糖组成,其摩尔比分别为5.16:1、3.67:1、4.16:1、5.62:1和5.86:1。DOP和各分级组分均可显著(p<0.05)增强RAW264.7巨噬细胞的增殖能力、NO的释放以及TNF-α和IL-1β的分泌。结论:铁皮石斛多糖及其分级组分均有免疫调节活性,且分子量较小的免疫调节活性较强。     

正红菇多糖提取物的化学组成及细胞免疫活性

为比较正红菇子实体不同部位多糖提取物的化学组成及其细胞免疫活性差异,依次采用热水和碱液分别提取正红菇菌盖和菌柄多糖,得到4种多糖提取物。通过化学成分、分子质量和单糖组成分析,比较4种正红菇多糖提取物的化学组成差异;通过小鼠巨噬细胞RAW264.7模型评价4种正红菇多糖提取物的细胞免疫活性。结果表明,多糖水提物的得率和分子质量均高于碱提物;4种正红菇多糖提取物均以葡萄糖为主,含有少量半乳糖和甘露糖,且相同提取方式下菌盖与菌柄多糖提取物的化学组成无显著差异,但对应的水提物相较于碱提物,其半乳糖含量高、甘露糖含量低。体外细胞实验表明,相同提取方式下菌盖与菌柄多糖提取物的免疫活性无显著差异,但水提物相较于碱提物,能更显著地增强巨噬细胞的增殖率、吞噬能力以及NO、TNF-α和IL-1β的释放量,表现出更好的免疫活性,这可能与其分子质量和化学组成等有关。     

西洋参多糖的超滤分离及其免疫增强活性研究

采用超滤法分离西洋参多糖并研究其免疫增强活性。采用不同分子截留量的超滤膜将西洋参根水提物分为100ku(AGP1)、30~100ku(AGP2)、10~30ku(AGP3)和10ku(AGP4)四个多糖组分,测定了四个多糖组分的总糖含量、单糖组成及免疫增强活性。结果表明:西洋参多糖的得率为5.17%,其中,AGP1~AGP4分别约占46.61%、3.30%、12.11%和37.98%。四个多糖组分的总糖含量范围为42.87%~56.55%。单糖组成分析表明,各组分分别由6~8种单糖组成,且均含有阿拉伯糖、鼠李糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖和葡萄糖醛酸。免疫增强活性研究表明,AGP1与AGP2可显著促进巨噬细胞NO、TNF-α、IL-6及IL-10的生成,具有较强的免疫增强活性。     

马齿苋多糖体外免疫调节活性研究

以小鼠巨噬细胞RAW264.7为模型研究马齿苋多糖对细胞吞噬能力的影响,刺激产生NO含量,释放IL-6、TNF-α来考察其对巨噬细胞免疫活性的影响。结果表明马齿苋多糖可通过增强巨噬细胞吞噬能力,释放免疫因子等方面增强巨噬细胞免疫活性。     

榆黄菇多糖提取工艺优化及其免疫调节活性评价

以榆黄菇为研究对象,对榆黄菇多糖（PCP）提取工艺进行优化、纯化、测定单糖组成和分子量,再对其体外免疫活性进行评价。在单因素基础上通过响应面法确定榆黄菇多糖最优提取工艺为：提取温度59.81 ℃,提取时间2.40 h,液料比29.91 mL/g,在此条件下,预测得率为18.82%,实际得率为18.60%。经DEAE-Sepharose Fast Flow柱层析从榆黄菇多糖中分离纯化出3个多糖组分（PCP-1、PCP-2、PCP-3）,采用离子色谱法和高效凝胶渗透色谱法分析多糖成分和分子量,得出PCP-1由半乳糖组成,分子量为 1.90×104 u;PCP-2由半乳糖和葡萄糖组成,摩尔比为4.36:5.64,分子量2.76×104 u;PCP-3由岩藻糖、盐酸氨基葡萄糖、半乳糖、葡萄糖和葡萄糖醛酸组成,其摩尔比为0.07:0.11:0.51:7.46:1.85,分子量为4.81×104 u。通过体外试验评估PCP对巨噬细胞RAW264.7免疫调节活性。结果表明,PCP-1、PCP-2和PCP-3多糖质量浓度在25~200 g/mL范围内对巨噬细胞RAW264.7无毒性并具有一定增殖作用、显著提高了NO释放量并增强了巨噬细胞RAW264.7的吞噬能力。当PCP-1、PCP-2和PCP-3多糖质量浓度为200 g/mL时,巨噬细胞RAW264.7 NO释放量达到最大值,分别为11.40、11.56、11.76 moL/L。该研究结果可为榆黄菇的精深加工综合利用提供理论依据。     

高压灭菌前后党参口服液中多糖的免疫活性研究

研究高压灭菌前后党参口服液中多糖的免疫活性变化。采用醇沉法、超滤膜分离法得到党参口服液中活性多糖部分,以RAW264.7巨噬细胞为模型,通过对细胞增殖指数、吞噬指数、NO释放量以及细胞因子(IL-6、IL-1β、TNF-α)的分泌量的测定,评价高压灭菌前后党参口服液中多糖的免疫活性。结果表明:超滤分离得到高压灭菌前以及高压灭菌后党参口服液中分子量小于30 k Da的多糖组分CPP-2和HCPP-2,其得率分别为22.41%和15.91%,纯度分别为69.03%和69.30%,且二者均能较好地促进巨噬细胞增殖(增殖指数=1.13~1.48),因此CPP-2和HCPP-2是党参口服液中主要的活性多糖部分。与CPP-2相比,HCPP-2在25~400μg/m L浓度范围内作用于巨噬细胞的吞噬能力、TNF-α和IL-1β生成显著性降低(p0.05);在100~400μg/m L浓度范围内,NO和IL-6生成显著性降低(p0.05)。说明高压灭菌会导致党参口服液中多糖的免疫活性降低。     

西洋参花多糖的提取和体外免疫调节作用的研究

提取西洋参花多糖,测定西洋参花多糖含量和蛋白含量。以小鼠巨噬细胞RAW264.7为模型研究西洋参花多糖对细胞吞噬能力的影响,刺激产生NO含量,释放IL-6、TNF-α来考察其对巨噬细胞免疫活性的影响。结果表明,西洋参花多糖可通过增强巨噬细胞吞噬能力,释放免疫因子等方面增强巨噬细胞免疫活性。     

香加皮多糖的分离纯化、单糖组成及其抗氧化活性研究

目的：分离纯化香加皮多糖(Cortex Periplocae Polysaccharides,CPP)，并对其进行单糖组成和抗氧化活性研究，以期为香加皮多糖在食品领域的开发和应用提供参考。方法：通过水提醇沉和Sevag法除蛋白得到香加皮粗多糖，经DEAE-52纤维素柱分离纯化得到4种多糖组分CPP0、CPP1、CPP2和CPP3，并对其进行化学成分检测、分子量测定、单糖组成分析、红外光谱和抗氧化活性分析。结果：4种多糖的糖含量分别为82.20%、77.13%、75.23%和72.85%，且都含有糖醛酸；相对分子量分别为685、477、411和572 kDa。4种多糖均为甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖按照不同摩尔比组成的杂多糖。红外光谱表明4种多糖含有β-糖苷键且具有呋喃环。抗氧化实验结果显示4种多糖均具有一定的抗氧化性，总体抗氧化能力顺序为：CPP0>CPP3>CPP1>CPP2。结论：从香加皮中提取得到的4种酸性多糖，糖含量高、相对分子量大且均具有抗氧化活性，其中CPP0组分抗氧化活性最好。     

不同分子量段巢脾多糖理化性质及其抗氧化活性分析

采用超滤法对巢脾多糖进行分级分离,获得分子量为4 kDa~10 kDa(HCP-1)、10 kDa~50 kDa(HCP-2)、50 kDa~100 kDa(HCP-3),大于100 kDa(HCP-4)4个不同分子量段的巢脾多糖,对4个分子量段巢脾多糖的理化性质和抗氧化活性进行分析。结果显示巢脾多糖中蛋白质含量随着分子量的增大而增高,还原糖含量则随着分子量的增大而减小;各分子量段巢脾多糖紫外及红外光谱特征相似,而单糖组成及含量差异较大,HCP-3及HCP-4中单糖种类及含量相比于HCP-1及HCP-2都较为丰富。体外抗氧化活性分析结果显示,在一定浓度范围内,各分子量段多糖对超氧自由基、羟自由基清除能力及总抗氧化能力与多糖浓度呈明显的量效关系,其中HCP-4的抗氧化活性最强。     

桑黄菌丝体多糖的分离纯化及抗氧化、抗肿瘤活性分析

采用水提醇沉法制备桑黄菌丝体粗多糖，分别用终浓度为30%、45%和60%的硫酸铵溶液对桑黄菌丝体中粗多糖进行粗分离，并比较所得各多糖组分的抗氧化、抗肿瘤活性。对其中活性强的组分采用离子交换树脂柱色谱纯化，采用高效排阻色谱-折光示差检测器-多角度光散射仪对纯化多糖进行均一性分析和分子量测定。结果显示，45%硫酸铵分离多糖IPS45显示最强的抗肿瘤活性及较好的清除超氧阴离子活性，IPS45经DEAE-52纤维素离子交换柱纯化得到四个级分，经高效排阻色谱分析，其中蒸馏水洗脱级分（IPS45-W）为均一多糖，重均分子量为79.1 kDa；气相色谱分析其单糖组成为甘露糖:葡萄糖:半乳糖:未知单糖，摩尔比为1.57:8.38:1.09:1.00。IPS45-W可抑制HepG2细胞生长，当浓度为50μg/mL时，对HepG2细胞的抑制率为56.74%，高于前期研究的乙醇沉淀分离所得桑黄菌丝体均一多糖同浓度下11%～35%的抑制率。该结果为不同组成的桑黄多糖的分离和应用提供依据。     

西藏梨果仙人掌茎粗多糖组分分析及抗炎效果评价

为评价西藏梨果仙人掌茎粗多糖的抗炎效果,本文通过对水提醇沉得到的梨果仙人掌茎粗多糖进行红外光谱分析、总糖分子量及含量、单糖组成及含量的测定,研究粗多糖含量对角叉菜胶致小鼠足肿胀及小鼠血浆中炎症因子含量的影响。结果显示西藏梨果仙人掌茎粗多糖的特征基团主要集中在伸缩振动和弯曲振动两个方面,伸缩振动表现为伯胺和仲胺的-NH伸缩振动、-C=C-和C-O伸缩振动,弯曲振动表现为-OH弯曲振动、C-O不对称收缩振动和C-CO-C面内弯曲振动。总糖含量为405.724 mg/g,总糖Mp峰位分子量为24915 Da,单糖组成以D-葡萄糖（Glc）为主。西藏梨果仙人掌茎粗多糖在浓度100~400 mg/kg范围内,随着茎粗多糖剂量的不断增加,小鼠足肿胀度不断降低,足肿胀抑制率不断增加,对小鼠足肿胀抑制率较好,呈剂量依赖趋势。在细胞因子实验里,IL-1β、IFN-γ、TNF-α炎症因子表达水平与茎粗多糖浓度呈剂量依赖性。茎粗多糖高剂量组的IL-1β、IFN-γ、TNF-α炎症因子表达水平与阳性对照醋酸地塞米松组表达水平最为接近,IL-1β、IFN-γ、TNF-α炎症因子的表达水平随着茎粗多糖浓度的升高而降低,说明西藏梨果仙人掌茎粗多糖具有良好的抗炎作用。     

麻叶荨麻不同部位多糖的提取及定量测定

对麻叶荨麻不同部位多糖的提取及含量进行了分析测定,结果表明,超声波辅助提取多糖的较适宜的条件为提取时间20min、提取温度70℃、料液比1∶60、提取功率40Hz。麻叶荨麻不同部位多糖含量分别为根1.25%、茎1.71%、叶3.48%、籽5.76%。     

板栗种仁多糖的提取纯化及体外抗肿瘤活性筛选

以燕山地区板栗为原料,利用加压溶剂萃取法提取板栗种仁粗多糖,以多糖得率为指标,通过单因素结合响应面法优化提取工艺条件。将最优提取条件下得到的粗多糖经除蛋白、脱色素、透析后得到纯化多糖,继而借助制备型高效体积排阻色谱得到板栗多糖的高分子量组分(YCP-H),分析了其形貌特点、结构特征和单糖组成,并针对8种人体肿瘤细胞模型进行了体外抗肿瘤活性筛选。结果表明,高压溶剂萃取法提取板栗种仁粗多糖的最佳提取条件为:当投料量为10 g,静态提取次数为3次时,设定温度60 ℃、时间9 min、压力6 MPa,多糖得率可达19.78%±0.27%。组分YCP-H是具有β-吡喃构型的酸性多糖,重均分子量范围为217~5900 kDa,在扫描电镜下呈现纤维状的微观形貌,单糖组成包含阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖和岩藻糖。YCP-H对人肝癌细胞HepG2的增殖具有显著(P<0.05)的抑制作用,其半数抑制浓度可达0.08 μg/mL。此外,YCP-H对人结肠癌细胞HCT-116和肺癌细胞A-549的增殖也有较强的抑制作用。     

新疆芜菁果胶多糖组成分析及免疫活性评价

为分离纯化新疆芜菁果胶多糖,并对其进行组成分析及免疫活性评价。本论文采用水提醇沉法结合不同凝胶柱色谱制备新疆芜菁果胶多糖,理化分析表明:该果胶多糖纯品的总糖含量为78.86%±1.01%、糖醛酸的含量为15.82%±1.05%、硫酸基的含量为0.14%±0.05%,但不含有蛋白质和总酚;经傅立叶红外光谱分析,新疆芜菁果胶多糖纯品为同时含有α-及β-构型糖苷键的吡喃糖;HPGPC测得分子量为838 kDa;PMP衍生化分析发现由鼠李糖与半乳糖醛酸两种单糖组成,其摩尔比为1.94:98.06;通过RAW264.7细胞模型,发现当新疆芜菁果胶多糖浓度在12.5~100 μg/mL时,能显著提高细胞增殖活性与吞噬能力,有效刺激细胞释放NO、TNF-α、IL-1β和IFN-γ细胞因子,且呈现明显的剂量效应,说明新疆芜菁果胶多糖具有较强的免疫调节活性,可以作为天然免疫调节剂应用于功能食品或者制药工业。     

不同提取方法对小麦麸皮多糖化学组分及免疫调节活性的影响

目的:以小麦麸皮超微粉为实验材料,分别用酸法、碱法、水提和酶法提取获得多糖,研究不同提取方法对小麦麸皮多糖得率、提取后麸皮残渣微观形态、糖醛酸含量、硫酸根含量、蛋白质含量、单糖组成及免疫调节活性的影响。方法:采用苯酚-硫酸法测定多糖含量,硫酸-间羟基苯酚法测定糖醛酸含量,BaCl₂-明胶法测定硫酸根含量,气相色谱法测定单糖组分;采用MTT检测细胞毒性,Griess法测定细胞上清液中NO含量,Western Blot法检测细胞诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)和环氧合酶-2(COX-2)蛋白表达。结果:碱提法获得的粗多糖得率最高,为31.73%,测定提取的粗多糖中多糖含量为57.79%;小麦麸皮多糖中糖醛酸和硫酸根的含量依次为:碱提法>酶提法>酸提法>水提法;不同提取方法的小麦麸皮多糖组分中所含单糖的种类为阿拉伯糖、木聚糖及葡萄糖;MTT法检测四种小麦麸皮多糖对细胞均无毒性,其中水提多糖能促进RAW264.7细胞分泌NO因子并能促进细胞诱导型一氧化氮合成酶和环氧合酶-2蛋白的表达。结论:四种不同提取方法所得到的小麦麸皮多糖的得率、化学组成成分及生物活性各不相同,采用传统水提法工艺提取多糖更利于维持多糖的免疫调节活性。     

杏鲍菇多糖的超滤分离及其理化特性和生物活性分析

采用超滤法将杏鲍菇下脚料水提物分为不同相对分子质量范围3个部分,并对各部分样品的得率、总糖和β-葡聚糖质量分数、相对分子质量分布、单糖组成及其对巨噬细胞释放NO的影响进行了考察。结果表明,PU1得率远高于PU10和PU100,为14.6%,其总糖质量分数最高,达到62.75%。PU10和PU100中的β-葡聚糖质量分数较高,分别为18.38%和19.91%,在总糖中所占比例超过50%。相对分子质量分析结果表明,粗多糖可以按照超滤膜的截留范围实现较好的分离,且PU100和PU10均含有多个组分,其中PU100中重均相对分子质量100 000组分约占73%,PU10中两个组分的相对分子质量均超过10 000;而PU1主要含有一个组分,其重均相对分子质量为1 110×10~3。超滤各部分样品中的多糖分别由4~7种单糖组成,但种类及摩尔分数具有较大差异。活性测试结果显示,超滤所得各样品均具有体外刺激巨噬细胞释放NO的活性,在低质量浓度(50μg/m L)时PU100活性最高。