可溶态和膜结合态双孢蘑菇多酚氧化酶的分离纯化及酶特性分析

为开发一种双孢蘑菇两种不同形态多酚氧化酶（polyphenol oxidase,PPO）的提取纯化方法，通过温度诱导相分配、分步硫酸铵沉淀盐析、DEAE阴离子交换层析，对双孢蘑菇中的可溶态PPO(soluble PPO,sPPO)和膜结合态PPO(membrane-bound PPO,mPPO)进行分离纯化，并通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳和Native-聚丙烯酰氨凝胶电泳及米氏方程对纯化后两种形态PPO的纯度、分子质量及酶促反应动力学进行探究。双孢蘑菇sPPO和mPPO经纯化后对邻苯二酚的比活力分别达到6 912.88 U/mg和19 092.94 U/mg，相比于粗酶液，酶的比活力分别提高到12.20倍和10.86倍，且纯化后mPPO的比活力显著高于sPPO。酶促反应动力学结果显示，sPPO和mPPO对不同底物的催化活性差异较大，对底物邻苯二酚的催化活性较高，且mPPO比sPPO对底物邻苯二酚的亲和力更强，酶促反应速度更高。sPPO和mPPO对邻苯二酚的最适反应温度均为30℃，最适pH值均为6.8。本研究为双孢蘑菇两种状态PPO的质谱鉴定、酶学特性以及抑制酶促褐变的发生等研...     

不同品种马铃薯多酚氧化酶酶学特性对比

以大西洋、费乌瑞它、红宝石和黑美人4个马铃薯品种为原料,提取可溶态(sPPO)和膜结合态(mPPO)多酚氧化酶,对比不同品种马铃薯sPPO和mPPO的酶学特性。结果表明,黑美人和红宝石的sPPO和mPPO粗酶液浓度均高于大西洋和费乌瑞它,黑美人和红宝石sPPO和mPPO的最适pH为6.0,略低于大西洋和费乌瑞它;大西洋sPPO的最适反应温度为35 ℃,其他3个品种马铃薯sPPO的最适反应温度均为30 ℃,大西洋和费乌瑞它mPPO的最适反应温度为30 ℃,黑美人和红宝石mPPO的最适反应温度为25 ℃;4个品种马铃薯sPPO和mPPO在邻苯二酚反应体系中最适底物浓度均为50 mmol/L;黑美人sPPO和mPPO的V_(max)/K_m比值分别为93.0和38.7,高于其他3个品种,黑美人sPPO和mPPO的酶促反应速度最快,大西洋的酶促反应速度最慢。不同品种马铃薯sPPO和mPPO酶学性质存在差异,对马铃薯制品加工的品种选择及加工过程中的酶促褐变控制技术具有指导意义。     

荔枝与荔枝酒褐变控制

以荔枝及荔枝酒为试料,研究荔枝多酚氧化酶(PPO)的酶学特性及荔枝酒发酵过程中的褐变机理及控制措施。结果表明：荔枝PPO存在同功酶,荔枝PPO最适底物为没食子酸;以没食子酸为底物,荔枝PPO最适反应pH值为8.0,最适反应温度50℃,荔枝PPO的动力学参数为：米氏参数(Km)为26.033mmol/L,最大反应速度(Vmax)为34.816g/(L·min);荔枝PPO对酸碱、对热稳定性较差;荔枝酒发酵过程中褐变的主要原因是其PPO引起的酶促褐变。因此,低温贮藏和高温热处理可有效抑制荔枝及荔枝酒在贮藏和加工中酶促褐变反应。     

香菇多酚氧化酶酶学特性的研究

以没食子酸为底物,以3-甲基-2-苯并噻唑腙盐酸盐(MBTH)与酶作用产物形成粉红色的复合物,通过分光光度法在505nm处测定该复合物的吸收来测定香菇多酚氧化酶(PPO)的活性.分别研究了温度、pH、底物浓度对酶活性的影响,得到了米氏常数Km和最大反应速度Vmax,并探讨了PPO提取液的稳定性.结果表明:香菇PPO活性在20～60℃内逐渐升高,其最适pH为4.6,温度对酶活的影响比pH的影响要大.三种底物与PPO亲和力高低的顺序为L-多巴-水没食子酸邻苯二酚,其米氏常数Km分别为0.98、1.45、3.07mmol/L,最大反应速度Vmax分别为29、49、80U.     

大蒜多酚氧化酶的酶学性质及其在热加工中的变化

采用丙酮粉法提取大蒜中的多酚氧化酶(PPO),并对其酶学特性进行研究。结果表明,大蒜多酚氧化酶最适反应温度为40℃、最适反应pH值为4.0和7.0。邻苯二酚是大蒜PPO的最适底物。动力学实验表明大蒜PPO的米氏常数K_m 470 mmol/L、最大反应速率V_(max) 666.67 U/min。在10 mmol/L时,Cu~(2+)对PPO活性有明显抑制作用,Ca~(2+)和Mg~(2+)对PPO活性有轻微促进作用;Mn~(2+)对PPO活性有明显促进作用。在低浓度时,草酸对大蒜PPO的抑制效果大于L-半胱氨酸和柠檬酸亚锡二钠,高浓度时与后两者相当。热加工结果表明,在75℃、85%湿度条件下,大蒜PPO酶活保留时间较长。     

砀山酥梨膜结合态与可溶态多酚氧化酶性质比较

为探究砀山酥梨膜结合态多酚氧化酶（mPPO）性质,本文以砀山酥梨为原料,研究其mPPO催化特性及热失活动力学,并与可溶态多酚氧化酶（sPPO）性质进行比较。结果表明:以邻苯二酚为底物时,mPPO与sPPO催化特性及热失活动力学性质不同。mPPO比活力及对底物亲和力高于sPPO。mPPO在pH4.50时酶活最高,而sPPO最适pH为5.00。mPPO酸碱稳定性高于sPPO,mPPO在pH3.50～4.50环境中保持24 h后酶活大于原始酶活。砀山酥梨mPPO在35～45 ℃温度区间内活性最高,且mPPO在55～75 ℃区间热稳定性高于sPPO。热失活动力学分析结果表明,热处理对sPPO及mPPO的钝化均符合一级反应动力学,动力学参数E_a值及Z_T值分析表明mPPO比sPPO催化反应对温度的依赖性更小,热耐受性更高。     

金银花叶多酚氧化酶的酶学特性

对金银花叶多酚氧化酶(PPO)的酶学特性进行研究。以新鲜金银花叶片为原料,采用溶剂法从中提取多酚氧化酶粗液,研究不同的温度、pH值、底物浓度、抑制剂等因素对PPO活性的影响,建立酶促褐变动力学方程。研究结果表明,金银花叶PPO的最适温度45℃,最适pH6.5,安全、经济的褐变抑制剂柠檬酸;当以邻苯二酚为底物时,金银花叶PPO活性与底物浓度关系符合米氏方程的酶促反应动力学规律,最大反应速度Vmax=313U/min,Km=0.0197mol/L。     

圆蘑菇多酚氧化酶的特性研究

采用0.2 mol/L磷酸盐缓冲溶液匀浆法从圆蘑菇中提取多酚氧化酶(PPO),并对该多酚氧化酶的酶学特性进行研究.实验结果表明,以邻苯二酚为底物,该酶的最适pH为6.4,最适温度为30℃,Km值为0.032 3 mol/L,Vmax值为0.0164 U/min,100 ℃热处理1.5 min可完全钝化PPO的活力,10 mmol/L的EDTA、L-半胱氨酸或柠檬酸亚锡二钠能有效抑制PPO活力.     

抑制剂对杏多酚氧化酶抑制作用

使用冷丙酮分别从黄金杏和晚红杏中提取多酚氧化酶(PPO),以邻苯二酚为底物,利用分光光度计法研究几种抑制剂在不同浓度下对2种杏PPO的抑制作用及酶促反应动力学曲线。结果表明, 2种杏最适波长均为410nm。以邻苯二酚为底物, 2种杏多酚氧化酶的酶促褐变反应均符合米氏方程,晚红杏、黄金杏PPO的动力学参数米氏常数分别为0.042 mol/L和0.114 mol/L。V_(max)分别为100 U/min和167 U/min。抑制剂对2种杏多酚氧化酶的抑制作用存在一定差异。对黄金杏PPO抑制作用:抗坏血酸(40 mmol/L)柠檬酸(10 mmol/L)L-半胱氨酸(10mmol/L)亚硫酸氢钠(10 mmol/L)。对晚红杏PPO抑制作用:亚硫酸氢钠(10 mmol/L)柠檬酸(10 mmol/L)抗坏血酸(40 mmol/L)L-半胱氨酸(10 mmol/L), EDTA-2Na对2种杏PPO抑制作用均较差。     

响应面优化可溶态和膜结合态马铃薯多酚氧化酶提取工艺

以大西洋马铃薯为原料,分别用柠檬酸-磷酸盐缓冲液浸提和超声波辅助Tris-HCl缓冲液浸提法提取马铃薯中可溶态(sPPO)和膜结合态(mPPO)多酚氧化酶,以酶比活力为评价指标,在单因素实验基础上,通过响应面对sPPO和mPPO的提取工艺进行优化。结果显示:sPPO最优提取工艺为料液比1:3.2、浸提时间12 h、缓冲液pH7.1,在该条件下测定sPPO比活力平均值为(130.5±2.4) U/mg,三个因素对sPPO提取的影响大小依次为:浸提时间>料液比>缓冲液pH。mPPO最优提取工艺为料液比1:5.2、浸提时间7 h、缓冲液pH6.7,在该条件下测定mPPO比活力平均值为(686.4±7.9) U/mg,三个因素对mPPO提取的影响大小依次为:超声时间>料液比>缓冲液pH。所得响应面模型可以很好地预测和分析sPPO和mPPO提取工艺条件。     

小麦主产区小麦粉多酚氧化酶特性分析

将收集我国10个小麦主产区省(区)200多份小麦样品磨成粉,对这些小麦粉多酚氧化酶活性进行测定,评估各主产区小麦粉多酚氧化酶活性含量分布情况。实验结果表明,在10个主产区省(区)中,以陕西省小麦粉多酚氧化酶活性最高,宁夏小麦粉多酚氧化酶活性最低;小麦粉多酚氧化酶活性在7~11min-1g-1范围内分布较集中,占样品总数70.3%。另外,小麦粉多酚氧化酶活性越小,鲜湿面片L*值变化越小。     

Influence of Steeping Solution and Storage Temperature on the Color Change of Garlic

ABSTRACT:  The objective of this study was to investigate the browning of garlic under different steeping conditions and storage temperatures. The brown indices of steeped garlics showed lowest values (7.3 and 7) in 25% and 50% EtOH at 7 d of storage. The degree of browning of steeped garlics was lowest (10.2 in 25% EtOH and 10.4 in 50% EtOH) in the samples soaked for 8 h at 13 d of storage. As the storage temperature was increased from 10 to 40 °C, the brown indices of garlics revealed an increasing trend relative to storage time regardless of steeping treatment. Overall, the kinetic parameters showed relatively low  R ² and irregular reaction constants, but the  k_o  values showed an increasing trend with temperature under a zero-order model. The highest polyphenol content within the garlic bulbs was seen in controls (without steeping treatment, 588.9 μg/g), than 0% EtOH (water, 392.5 μg/g), than 25% EtOH (211.3 μg/g), and finally 50% EtOH (155.6 μg/g). The polyphenol oxidase activity of garlic showed a similar trend to that of polyphenol content. However, the texture properties of garlics steeped with 25% and 50% did not change.
Practical Application: The garlic color preferred by consumers is a creamy-white, but this is susceptible to enzymatic browning when pre-peeled and chopped. When garlic was steeped in the 25% and 50% alcohol, the browning of garlic was prevented during storage.     

UV-B辐射对烟草(Nicotiana tobacum)叶片总多酚含量和PPO活性的影响

采用盆栽试验,以烤烟品种K326为供试材料,选择空间范围不大的云南玉溪大营街和通海2个不同海拔高度的植烟区为试验点,并选择玉溪烟区种植烤烟海拔最高的通海县(1806.0米),作为同一种植地分别减弱0%、25%、50%和65%UV-B辐射强度条件的控制试验区,探讨了烤烟生长过程中PPO活性和总多酚含量与UV-B辐射强度的时空动态变化之间的关系。结果表明:由于受两地不同降雨日数及云层覆盖的影响,UV-B辐射强度并不随海拔高度的升高而升高;PPO活性对UV-B辐射强度变化非常敏感,过高或过低的UV-B辐射强度将降低PPO活性,其中过高的UV-B辐射强度影响更大;在一定的UV-B辐射强度范围内,降低强度可提高PPO活性;与PPO活性相反,高的UV-B辐射强度可提高烟叶总多酚含量,但在一定辐射强度范围内,对其变化趋势影响不大;过低的UV-B辐射强度不仅降低总多酚含量,而且影响整个生长过程中总多酚含量的变化。     

板栗仁中多酚氧化酶活性的研究

采用分光光度法对板栗仁中多酚氧化酶的活性进行了研究.结果表明,酶液加入量与吸光度值成正比关系,多酚氧化酶的最适反应温度为30～40 ℃,最适反应pH值为5.4,板栗仁表层多酚氧化酶的活性显著高于心部的活性.同时,对酶的热稳定性以及抑制剂亚硫酸钠、抗坏血酸对酶活力的影响进行了探讨.     

抑制多酚氧化酶提高甘薯淀粉白度的研究

甘薯加工过程中容易产生褐变。不同的抑制剂能降低多酚氧化酶的活力,在甘薯破碎的同时加入抑制剂能提高淀粉的白度。     

涩柿贮藏过程中PPO及褐变控制

实验以新鲜的柿子为主要原料,采用测定吸光值的变化,研究了柿果中多酚氧化酶(PPO)活性的最适条件和抑制剂、烫漂温度和时间对柿果中多酚氧化酶(PPO)活性及褐变的影响。结果表明:柿子中的多酚氧化酶的最适温度是19℃,最适pH为6．5,最适底物浓度为12mmol/L。用0．1%亚硫酸钠+0．3%植酸和100℃+120s处理能有效的抑制柿果中PPO的活性,褐变速度明显减慢。     

Characterization of polyphenol oxidase and peroxidase from peach mesocarp (Prunus persica L. cv. Babygold)

The two enzymes involved in enzymatic browning reactions—polyphenol oxidase (PPO) and peroxidase (POD)—were extracted from peach fruit mesocarp. PPO was mainly located in the membrane fraction and was in its latent state. However, POD activity was found in the soluble fraction. The kinetic characterization of PPO and POD was carried out with a natural substrate (chlorogenic acid) and with a non‐physiological substrate. Under native isoelectric focusing (IEF), several PPO isoenzymes were present in the pH range 5.4–5.8. A partially denaturing sodium dodecyl sulfate–polyacrylamide gel electrophoresis (SDS‐PAGE) showed the presence of two active bands with apparent molecular masses of 49 and 50 kDa. A totally denaturing SDS‐PAGE indicated the presence of a single polypeptide with a molecular mass of 60 kDa, as revealed by western blot. POD was also analyzed by IEF, showing the presence of two strongly basic isoenzymes, which were resolved by cationic native PAGE into two different bands. Copyright © 2007 Society of Chemical Industry     

吉林晒烟多酚类物质及其相关酶活性的变化动态

选取吉林当地3个主栽晒烟品种研究了不同晒烟品种叶片发育过程中多酚类物质及其相关酶活性的动态变化以及两者之间的关系。结果表明,不同晒烟品种中总酚含量表现为青黄叶＞大叶黄＞大白花,总酚在整个生育期的含量为0.16%~1.2%。不同晒烟品种中总酚含量随着叶龄的增加而提高,在成熟期稍有降低;青黄叶和大叶黄中绿原酸、芸香苷和莨菪亭在叶片发育过程中整体上表现出上升趋势,而大白花中绿原酸、芸香苷和莨菪亭含量呈单峰曲线。各品种中苯丙氨酸解氨酶活性与绿原酸和芸香苷的变化规律相同,多酚氧化酶活性和过氧化物酶活性呈单峰趋势。在烟叶生长过程中,各晒烟品种中苯丙氨酸解氨酶活性与绿原酸、芸香苷、莨菪亭和总酚的变化呈正相关,且与绿原酸和芸香苷达到显著水平;多酚氧化酶活性变化与绿原酸、芸香苷、莨菪葶和总酚的相关性表现为负相关,但未达到显著水平;过氧化物酶活性与绿原酸、芸香苷、莨菪葶和总酚呈正相关,且与总酚达显著水平。由此可见,苯丙氨酸解氨酶和过氧化物酶与多酚类物质之间有显著的相关性,可以通过调节这两种酶的活性来控制多酚的含量,从而改善烟叶质量。     

Amino acid composition and anti‐polyphenol oxidase of peptide fractions from sericin hydrolysate

Sericin hydrolysate (SH), prepared from enzymatic hydrolysis of sericin, was investigated for its antipolyphenol oxidase (PPO) properties. SH decreased PPO activity from both purified mushroom PPO and extracts from apple and eggplant, and retarded browning in fresh‐cut apple and eggplant. SH was a competitive inhibitor using catechol as a substrate. SH exhibited copper ion‐chelating power and reducing power abilities. Fractionation of SH using size exclusion chromatography resulted in four fractions, designated as F1, F2, F3 and F4, with PPO inhibition of 35.75%, 3.89%, 24.52% and 14.75%, respectively. Ser and Asp were major amino acids found in F1. Amino acid sequences in F1, as investigated by LC‐MS/MS using de novo sequencing, contained a high ratio of amino acids with chelating ability. Moreover, amino acids with reducing power ability and with antityrosinase ability were also identified in the sequences.     

菊芋多酚氧化酶特性研究

对新鲜菊芋中提取的多酚氧化酶的特性进行了研究。结果表明：菊芋PPO其最适温度为40.60℃，最适PH为4-4～5．2；菊芋PP0在70℃以下稳定性好．而在85℃以上随温度升高和处理时间延长PPO活性迅速降低甚至失活：NaHSO3对菊芋PPO的有较强的抑制作用。