卵转铁蛋白体外免疫活性研究

研究卵转铁蛋白(OVT)的体外免疫活性。分别采用中性红吞噬法测定卵转铁蛋白对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响;MTT法测定卵转铁蛋白对小鼠腹腔巨噬和脾淋巴细胞增殖作用的影响;双抗体夹心ELISA法测定卵转铁蛋白对脾淋巴细胞IL-2分泌水平的影响。结果表明,OVT能显著增强小鼠腹腔巨噬细胞对中性红吞噬能力(P<0.01),协同LPS促进腹腔巨噬细胞的增殖(P<0.05),并显著改善由CsA引起的对小鼠腹腔巨噬细胞增殖活性的抑制作用(P<0.05);OVT能显著促进脾淋巴细胞的增殖(P<0.01),协同LPS和ConA促进小鼠脾淋巴细胞的增值(P<0.05),并能显著促进小鼠正常脾淋巴细胞IL-2的分泌(P<0.01)。在体外培养的条件下,卵转铁蛋白对正常小鼠免疫细胞的免疫能力有促进作用。     

蓝莓花色苷对小鼠淋巴细胞和腹腔巨噬细胞的免疫调节作用

为探讨蓝莓花色苷对淋巴细胞和腹腔巨噬细胞的免疫调节作用。无菌分离淋巴细胞和腹腔巨噬细胞,制备淋巴细胞和腹腔巨噬细胞悬液,以终浓度为4、8、16、32、64 mg/mL的蓝莓花色苷作用于体外培养的淋巴细胞(48 h)和腹腔巨噬细胞(24 h),采用MTT法检测蓝莓花色苷对淋巴细胞增殖率及中性红吞噬实验检测腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响,ELISA法检测蓝莓花色苷对淋巴细胞(IL-6白细胞介素-6)、(TNF-α肿瘤坏死因子-α)和腹腔巨噬细胞(IL-4白细胞介素-4)、(IL-12白细胞介素-12)分泌的影响。结果显示,蓝莓花色苷各浓度组淋巴细胞增殖率、腹腔巨噬细胞的吞噬活性、培养上清中淋巴细胞IL-6、TNF-α及腹腔巨噬细胞IL-12的分泌高于空白组(p<0.05),各浓度组与阳性组腹腔巨噬细胞IL-4分泌量均低于空白对照组(p<0.05)。蓝莓花色苷可能通过促进淋巴细胞增殖和提高腹腔巨噬细胞吞噬及分泌功能,提高机体免疫功能。     

鸡胚蛋提取物对体外培养的脾淋巴细胞和巨噬细胞的影响

目的:以体外细胞实验研究鸡胚蛋提取物对免疫力低下小鼠脾淋巴细胞和巨噬细胞的影响。方法:以水和石油醚为提取介质,检测鸡胚水溶物(CEAE)和脂溶物(CEPEE)在10～500μg/mL浓度范围内对脾淋巴细胞增殖、脾淋巴细胞分泌IL-2、巨噬细胞吞噬作用以及巨噬细胞产NO的影响。结果:鸡胚蛋提取物能恢复免疫低下小鼠的免疫功能,CEPEE显著地促进脾淋巴细胞增殖并分泌IL-2,而CEAE则对巨噬细胞的吞噬能力和分泌NO能力显示出更强的刺激作用,两种提取物均呈现出量效关系。结论:鸡胚蛋脂溶物和水溶物分别作用于淋巴细胞和巨噬细胞,发挥正向免疫调节作用。     

龙眼肉多糖LPII的体外免疫调节活性评价

LPII是龙眼肉多糖的主要级分之一,本文研究了其体外免疫调节活性及酶降解作用对活性的影响。采用尼龙毛柱分离脾淋巴T/B细胞,在25~400μg/mL剂量范围内体外评价LPII对脾淋巴细胞的刺激作用发现,LPII能刺激脾淋巴细胞及B细胞增殖,并促进B细胞抗体生成,但对T细胞激活作用不明显(P0.05)。此外,LPII还能有效刺激巨噬细胞增殖,并增强其吞噬功能和NO生成量。LPII的高分子量组分在木瓜蛋白酶、链酶蛋白酶和胰蛋白酶的作用下均发生明显降解,且200μg/mL剂量下对刀豆蛋白A诱导的脾淋巴细胞增殖的刺激作用显著降低(P0.05),但对脂多糖诱导的脾淋巴细胞增殖和巨噬细胞吞噬的刺激作用却显著增强(P0.05)。LPII具有显著的体外免疫调节活性,是龙眼肉"滋补"的重要功能成分,而适度降解有利于增强活性。     

大粒车前子多糖对脂多糖刺激RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用

采用脂多糖构建RAW264.7巨噬细胞炎症模型,研究大粒车前子多糖的抗炎作用。培养巨噬细胞RAW264.7,利用脂多糖构建细胞炎症模型,中性红吞噬实验检测细胞吞噬活性;酶联免疫吸附法检测车前子精制多糖（Plantago asiatica L. crude polysaccharide,PLCP）处理前后细胞上清液中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosisfactor-α,TNF-α）、白细胞介素-10（interleukin-10,IL-10）和IL-6的分泌量,Griess反应测定RAW264.7细胞释放NO水平。结果表明,PLCP可显著抑制RAW264.7炎症细胞的吞噬活性,降低炎症细胞因子TNF-α、IL-10和IL-6的分泌量及NO的释放量。     

诺丽酒增强免疫功能的实验研究

通过脾淋巴细胞转化实验、二硝基氟苯诱导的迟发性变态反应、抗体生成细胞检测、血清溶血素测定、碳廓清实验、腹腔巨噬细胞吞噬荧光微球实验、NK细胞活性以及IL-1、IL-6、IL-10、TNF-α测定,分别观察诺丽酒对小鼠细胞免疫功能、体液免疫功能和单核- 巨噬细胞功能的影响。结果表明,20 mL/kg·BW剂量诺丽酒能即可显著提高小鼠脾淋巴细胞转化、巨噬细胞廓清与吞噬活性及NK细胞活性,与酒基对照组相比,分别提高了42.14%、16.79%、66.23%、24.78%,并促进细胞因子IL-6、IL-10与TNF-α释放,表明诺丽酒具有增强机体免疫力的功效。     

大蒜素对脂多糖诱导腹腔巨噬细胞炎症反应的抑制作用及机制

目的:探讨大蒜素对脂多糖(LPS)诱导小鼠腹腔巨噬细胞炎症反应的抑制作用及机制。方法:建立LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞炎症反应细胞模型,并用地塞米松和不同浓度大蒜素处理,MTT法检测细胞活力,中性红吞噬实验检测吞噬能力,Griess法检测一氧化氮(NO)及ELISA法检测COX-2酶活性和IL-6的分泌,qPCR检测环氧合酶2(COX-2)、一氧化氮合酶(iNOS)和IL-6的mRNA表达水平,Western Blot检测COX-2、iNOS和IL-6的蛋白表达以及核转录因子NF-κB p65及其磷酸化产物的相对表达。结果:大蒜素浓度在40~160 μg/mL范围内对腹腔巨噬细胞均无细胞毒性;与LPS组比较,大蒜素处理组能促进腹腔巨噬细胞的吞噬能力,能显著(P<0.05)抑制炎症因子COX-2酶活性、NO和IL-6的分泌,能显著(P<0.05)抑制基因COX-2、iNOS和IL-6 mRNA和蛋白的相对表达,并极显著(P<0.01)抑制NF-κB p65信号通路的磷酸化。结论:大蒜素能显著抑制LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞的炎症反应,其机制可能与抑制NF-κB信号通路激活有关。     

阿魏侧耳胞外多糖对小鼠巨噬细胞的激活作用

利用巨噬细胞体外培养体系,研究阿魏侧耳胞外多糖对小鼠巨噬细胞的激活作用。无菌获得小鼠腹腔巨噬细胞,中性红吞噬实验检测细胞吞噬活性;荧光探针标记和Griess反应分别检测细胞内外NO的含量,酶联免疫吸附法检测细胞内一氧化氮合成酶(NOS)、培养上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1)和白细胞介素12(IL-12)的含量。结果表明,与空白组相比,25~200 mg/L阿魏侧耳胞外多糖可显著增强巨噬细胞的吞噬活性(p0.05),增加细胞因子IL-1(p0.05)和IL-12(p0.05)的分泌量;50~200 mg/L阿魏侧耳胞外多糖可显著提高细胞NOS(p0.05)和NO(p0.05)的含量以及TNF-α的分泌量(p0.05)。因此,一定浓度阿魏侧耳胞外多糖对体外培养的小鼠巨噬细胞具有激活作用。     

高核苷酸酵母水解物对脂多糖诱导RAW264.7细胞免疫调节的影响

为探讨高核苷酸酵母水解物对RAW264.7小鼠巨噬细胞免疫活性调节及其相关作用机制,采用脂多糖(1μg/mL)刺激RAW264.7细胞来建立体外细胞炎症模型,以不同质量浓度的高核苷酸酵母水解物干预来明确其抗炎效果。ELISA法检测细胞培养上清中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)的含量,RT-PCR法检测相关mRNA表达水平,Western blot法检测细胞iNOS及胞核内核转录因子NF-κBp65蛋白水平。结果表明:高核苷酸酵母水解物作用RAW264.7细胞的安全范围≤150μg/mL。与LPS模型组相比,质量浓度60～150μg/mL的高核苷酸酵母水解物能显著增强RAW264.7吞噬能力,高核苷酸酵母水解物(60～150μg/mL)能有效抑制脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导RAW264.7细胞释放NO、TNF-α、IL-1β和IL-6炎症因子及相关mRNA表达,降低iNOS及NF-κB蛋白水平。研究结果证实了高核苷酸酵母水解物对LPS刺激RAW264.7细胞炎症的保护作用,作用机制与NF-κB通路有关,为食疗干预慢性病提供一定的理论依据。     

姬松茸多糖组分对小鼠巨噬细胞作用研究

为研究姬松茸多糖组分对小鼠巨噬细胞的激活作用,用姬松茸多糖组分(ABMB3)刺激体外培养的小鼠骨髓来源巨噬细胞,检测刺激后巨噬细胞分泌至培养基中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、NO 含量以及小鼠巨噬细胞对乳胶颗粒吞噬率的变化,并检测ABMB3刺激的巨噬细胞对肿瘤细胞的抑制作用,结果显示：经姬松茸多糖组分ABMB3刺激后能显著刺激巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1β,并产生大量的NO,小鼠巨噬细胞对乳胶颗粒的吞噬功能也明显增强。而且可以通过激活巨噬细胞,增强其吞噬能力而达到抑制肿瘤细胞增殖的功效。     

管花肉苁蓉苯乙醇苷的巨噬细胞激活作用及其与当归、黄芪在调节免疫方面的协同作用

目的:研究管花肉苁蓉苯乙醇苷对巨噬细胞的激活作用,并筛选获得一个复方,研究其对正常小鼠的增强免疫力作用。方法:通过巨噬细胞激活实验,考察管花肉苁蓉苯乙醇苷提取物对巨噬细胞RAW264.7吞噬活性和TNF-α、IL-6等分泌的影响;研究当归、黄芪提取物的配伍对苯乙醇苷提取物的巨噬细胞激活作用的影响;据此制备复方片剂,通过ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验、迟发型变态反应试验、抗体生成细胞检测、小鼠碳廓清试验和小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验,评价其对正常小鼠的免疫调节作用。结果:75、100、125 g/L苯乙醇苷提取物均能提高RAW264.7细胞吞噬活性,以及NO、iNOS、TNF-α、IL-6水平,其中以100 g/L苯乙醇苷提取物效果最佳(P<0.01);并且,当归、黄芪提取物对苯乙醇苷提取物的巨噬细胞激活功能具有极显著的促进作用(P<0.01);以此为依据制备的复方片剂,0.4、1.2 g/kg·bw/d组可显著促进淋巴细胞增殖(P<0.05)、1.2 g/kg·bw/d组可显著促进细胞免疫反应(P<0.05),0.4 g/kg·bw/d组可显著促进抗体生成(P<0.05),1.2 g/kg·bw/d组可显著提高小鼠碳廓清能力和巨噬细胞吞噬能力(P<0.05)。结论:苯乙醇苷提取物可通过诱导iNOS表达,刺激巨噬细胞合成NO,同时刺激巨噬细胞释放TNF-α和IL-6,激活巨噬细胞的免疫调节功能;以其与当归、黄芪提取物制备的复方片剂,可通过调节细胞免疫、单核-巨噬细胞功能而发挥对正常小鼠的增强免疫力作用,并对体液免疫有积极影响。     

基于巨噬细胞模型的竹荪多糖的免疫功能

为探索竹荪多糖(DI)对巨噬细胞RAW264.7免疫功能的影响,分别采用四唑氮蓝(MTT)法、中性红法、Griess法、ELISA法,检测DI对巨噬细胞增殖、吞噬活性、一氧化氮(NO)和白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素6(IL-6)、α肿瘤坏死因子(TNF-α)分泌量的影响;运用反转录PCR(RT-PCR)检测i NOS和IL-1、IL-6、TNF-α的m RNA表达量的变化。结果表明,在25~200μg/m L质量浓度范围内,DI能够明显促进巨噬细胞增殖,增强其吞噬活性。同时,DI能够增强巨噬细胞分泌NO、IL-1、IL-6、TNF-α的能力,且明显提高i NOS、IL-1、IL-6、TNF-αm RNA的表达水平。因此,竹荪多糖对巨噬细胞RAW264.7具有免疫刺激作用。     

体外评估乳杆菌对巨噬细胞RAW264.7免疫调节作用的影响

该研究以商业菌株鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）LGG为阳性对照菌,体外评估实验室保藏的5株乳杆菌对巨噬细胞RAW264.7细胞活性、吞噬活性及免疫活性分子NO、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）与白细胞介素-10（IL-10）分泌水平的影响,以期从中筛选出具良好免疫调节作用的菌株。结果表明,鼠李糖乳杆菌260具有更优的免疫调节作用,在特定乳杆菌活菌浓度时,能显著提高巨噬细胞RAW264.7的细胞活性、吞噬活性及NO、TNF-α和IL-10的分泌水平（P＜0.05）。最高细胞增殖率为196.62%;最低乳酸脱氢酶（LDH）释放量为554.36 U/100 mL;最高吞噬活性为136.86%;最高NO分泌量为5.70 μmol/L;最高IL-10分泌量为15.56 pg/mL,最高TNF-α分泌量为50.98 pg/mL。     

枸杞发酵液抗氧化和免疫调节作用研究

对枸杞发酵液以抗氧化和免疫调节功能为指标进行细胞水平评价研究。应用偶氮二异丁脒盐酸盐[2,2'-azobis(2-methylpropionamidine)dihydrochloride,AAPH]损伤HepG2细胞检测清除活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)的能力,研究其抗氧化能力;应用刀豆蛋白A(concanavalin A,Con A)和脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导小鼠T/B淋巴细胞检测其增殖能力,应用脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞,检测其中性红吞噬能力和一氧化氮(nitric oxide,NO)释放量,研究免疫调节能力。结果表明:枸杞发酵液能够清除细胞内ROS的含量、提高脾细胞的增殖能力、腹腔巨噬细胞的吞噬能力和NO释放量。枸杞发酵液具有较好的抗氧化能力和增强免疫的功能。     

青蛤酶解多肽对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用

研究酶解法制备的青蛤多肽（Cyclina sinensis peptides,CSP）对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用。以RAW264.7巨噬细胞相对增殖率为指标,选用胃蛋白酶对青蛤肉进行酶解,酶解液经超滤、冷冻干燥后,采用噻唑蓝（methyl thiazolyltetrazolium,MTT）法筛选出增殖活性最高的组分进行免疫调节作用研究。采用MTT细胞增殖实验、倒置显微镜观察、中性红吞噬实验、硝酸根还原酶法及酶联免疫吸附检测法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）测定CSP-5对RAW264.7巨噬细胞的生长与增殖、细胞形态、吞噬能力、一氧化氮（nitric oxide,NO）分泌能力及细胞因子白介素（interleukin,IL）-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）分泌能力的影响;同时还研究了CSP-5对巨噬细胞各周期分布的影响。结果表明,分子质量小于3 kDa的CSP-5对RAW264.7细胞的生长与增殖具有明显的促进作用,且主要作用于G0/G1期,对细胞吞噬能力、NO分泌能力和细胞因子分泌能力的提高具有显著的促进效果;形态学观察结果显示经CSP-5作用后巨噬细胞体积变大且长出较多伪足。由此可知,CSP-5具有激活巨噬细胞增强机体免疫力的潜在作用。     

白果清蛋白的免疫调节活性研究

目的:探讨白果清蛋白(GAP)对正常小鼠的免疫调节作用。方法:体内分别进行了对正常小鼠免疫器官的影响实验,非特异性的碳粒廓清作用实验,体液免疫的血清半数溶血值(HC50)实验以及细胞免疫的二硝基氟苯诱导小鼠迟发性变态反应(DTH)实验;采用MTT法测定体外T、B淋巴细胞增殖作用,乳酸脱氢酶法(LDH)测定NK细胞对肿瘤靶细胞杀伤作用,胸腺细胞增殖法测定GAP对细胞因子白细胞介素-2(IL-2)活性的影响。流式细胞术测定GAP对T淋巴细胞亚群的影响。结果:GAP能增加正常小鼠免疫器官的胸腺指数和脾脏指数,能显著的增强正常小鼠的巨噬细胞吞噬能力和DTH反应,促进血清溶血素的形成;GAP能促进活化和未活化的T、B淋巴细胞增殖,增强NK细胞的细胞毒作用及刺激脾淋巴细胞IL-2的分泌;提高L3T4+细胞百分率(%)、Lyt2+细胞百分率(%)及L3T4+/Lyt2+细胞比值。结论:白果清蛋白能显著增强小鼠的免疫调节作用。     

玉米蛋白粉中叶黄素和玉米黄素对小鼠巨噬细胞免疫调节活性的研究

采用体外细胞培养方法,研究小鼠腹腔巨噬细胞在LPS刺激的情况下,从玉米蛋白粉中提取的叶黄素和玉米黄素对其生成NO的影响作用.噻唑蓝（MTT）法检测淋巴细胞及巨噬细胞增殖,比色分析检测巨噬细胞吞噬中性红的能力,生物法测定肿瘤坏死因子α（TNF-α）活性,Griess法测定NO含量.结果表明：叶黄素和玉米黄素对小鼠腹腔巨噬细胞的生长有一定的促进作用,当叶黄素、玉米黄素分别为5μmol/L和2.5μmol/L时对小鼠腹腔巨噬细胞产生NO表现为抑制作用,而当叶黄素的浓度在10～40μmol/L、玉米黄素的浓度在5～30μmol/L时巨噬细胞NO的生成水平表现为能显著提高正常小鼠腹腔巨噬细胞产生NO,且呈现剂量效应关系.叶黄素在20～50μ mol/L,玉米黄素在10～40 μ mol/L的浓度范围内,能够促进巨噬细胞吞噬中性红的能力,并能诱导其分泌TNF-α.     

λ-卡拉胶降解组分的体外免疫活性

目的：研究微波法降解得到的不同分子量角叉菜λ- 卡拉胶的免疫活性。方法：以离子交换纤维素色谱DE52 柱对微波降解所得λ- 卡拉胶PC2(product of carrageenan 2)进行分级;从实验动物体内获取免疫细胞,采取体外与多糖共同培养的方式,通过淋巴细胞、巨噬细胞增殖实验,中性红吞噬实验以及NO 释放实验评价其免疫活性。结果：纯化得到三个硫酸基含量和分子量依次增大的均一多糖分级组分CF1(carrageenan fraction 1)、CF2(carrageenan fraction 2)、CF3 (carrageenan fraction 3)。实验结果表明,CF1、CF2、CF3 组分均能显著的促进巨噬细胞和ConA 诱导的脾细胞增殖,并能增强巨噬细胞吞噬能力和NO 的释放。结论：在体外培养研究条件下,λ-卡拉胶降解组分对正常小鼠的免疫能力有促进作用。     

大豆分离蛋白-杏鲍菇多糖共价结合物对RAW264.7细胞的免疫调节作用

目的：研究大豆分离蛋白-杏鲍菇多糖共价结合物对小鼠巨噬细胞系RAW264.7的免疫调节作用。方法：将小鼠RAW264.7细胞分为空白组、脂多糖组和样品组（大豆分离蛋白、杏鲍菇多糖、大豆分离蛋白-杏鲍菇多糖混合物及共价结合物）,分别测定并比较各组细胞的巨噬细胞活力、中性红吞噬活性、一氧化氮释放量、细胞因子分泌及其mRNA表达水平。结果：当质量浓度在0～50?μg/mL范围时,大豆分离蛋白、杏鲍菇多糖、大豆分离蛋白-杏鲍菇多糖混合物和大豆分离蛋白-杏鲍菇多糖共价结合物组4?种样品对细胞活力没有显著影响（P＞0.05）。当大豆分离蛋白-杏鲍菇多糖共价结合物的质量浓度达到100?μg/mL时,能够显著提高细胞的中性红吞噬活性、一氧化氮释放量以及肿瘤坏死因子-α、白细胞介素1β（interleukin 1β,IL-1β）和IL-6的含量及这3 种细胞因子的mRNA表达水平（P＜0.05）,表明大豆分离蛋白-杏鲍菇多糖共价结合物能显著提升小鼠巨噬细胞系RAW264.7的免疫调节能力,且存在剂量依赖效应。结论：本研究可对大豆分离蛋白进行糖基化改性,为谷物蛋白的深加工和开发利用提供一定的理论依据。     

杏鲍菇菌丝体多肽的免疫活性及抗肿瘤作用

为研究杏鲍菇菌丝体多肽的免疫活性及抗肿瘤作用,以杏鲍菇菌丝体多肽为原料,通过对小鼠巨噬细胞Ana-1细胞存活率、细胞因子TNF-α和IL-6分泌量、膜表面蛋白TLR2和TLR4表达量、吞噬中性红活性以及刺激巨噬细胞产生NO和H_2O_2的能力测定来研究杏鲍菇菌丝体多肽的免疫活性;通过对人体乳腺癌细胞BT-549细胞、宫颈癌细胞Hela-229和胃癌细胞HGC-27细胞增殖的抑制来研究杏鲍菇菌丝体多肽的抗肿瘤作用。实验显示,多肽浓度在0.05~2 mg/mL范围时,在一定程度上能够促进巨噬细胞的增殖,提高膜表面蛋白TLR2、TLR4表达量,提高细胞因子TNF-α和IL-6分泌量,增强巨噬细胞吞噬中性红活性能力,并且促进巨噬细胞分泌NO和H_2O_2;对人体乳腺癌细胞、宫颈癌细胞和胃癌细胞这三种癌细胞具有较强的抑制作用,表明杏鲍菇菌丝体多肽具有较好的免疫活性和抗肿瘤活性,且活性与浓度呈现量效关系。