油茶籽多糖Ⅰ的分离纯化、单糖组分及降脂作用

对油茶籽多糖Ⅰ(Camellia Oleifera Seed PolysaccharideⅠ,CPSI)的分离纯化、单糖组分分析及其降脂作用进行研究。从油茶籽中提取水溶性粗多糖,采用DE-52纤维素柱层析、Sephadex G-100柱层析和亲和层析纯化得油茶籽多糖Ⅰ(CPSI),毛细管电泳法研究CPSI的单糖组分。使用高血脂小鼠模型,测定CPSⅠ对总胆固醇(T-CHO)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMG-Co A)和粪固醇的影响,研究CPSI的潜在降脂机制。油茶籽多糖Ⅰ(CPSI)为具有多种磷酸基团的复合多糖。CPSⅠ由木糖、半乳糖组成,CPSⅠ水解液中半乳糖和木糖的摩尔比为4.6∶5.57。与高血脂组相比,CPSI处理组小鼠血清T-CHO和LDL-C显著下降,粪固醇摩尔质量浓度升高,但HDL-C和HMG-Co A还原酶活性没有变化,CPSI对预防小鼠高血脂有一定疗效,其可能在降低心血管疾病风险方面发挥一定的作用。     

从油茶饼粕中提取油茶籽多糖和茶皂素的工艺研究

研究从油茶籽饼粕中提取油茶籽多糖和茶皂素的最佳工艺。首先比较水提法、醇提法提取油茶籽多糖和茶皂素的得率和纯度,然后结合大孔吸附树脂层析法对茶皂素的纯化进行进一步研究,确定了油茶籽多糖、茶皂素的最佳提取工艺为:温度75℃,2次浸提,油茶饼粕和水的比例两次分别为1:9和1:5,浸提时间每次各1.5h,油茶籽多糖得率9.09%,质量分数20.67%;茶皂素得率18.19%,其质量分数为62.35%。采用大孔树脂纯化茶皂素,收集体积分数70%醇洗脱溶液,得到90%以上的高纯度茶皂素。     

超声辅助提取3种油茶籽粕多糖及抗氧化活性研究

以三种油茶籽为原料,油茶籽粕多糖提取率为考察指标,用单因素试验与正交试验优化提取工艺,并对三种多糖抗氧化活性进行分析。结果表明,油茶籽粕多糖提取最优工艺为：超声波功率90 W、提取温度65 ℃、提取时间55 min、料液比1:25,在此条件下油茶籽粕多糖提取率为长林14.08%±0.23%、红花14.03%±0.32%和白花13.11%±0.21%。抗氧化活性试验表明：对DPPH自由基、OH·自由基、O2-自由基的清除效果与油茶籽粕多糖质量浓度呈正相关。三种油茶籽粕多糖清除自由基效果由强至弱为长林,红花,白花。     

木瓜蛋白酶在亲和双水相系统中的分配行为及机制研究进展

本文查阅相关文献, 对木瓜蛋白酶传统提取方法(超滤法、盐析法、有机溶剂法、亲和层析法)及一些新兴的提取方法如双水相萃取法、亲和双水相法作了简要综述。利用金属螯合亲和双水相分配系统, 能有效获得高纯度木瓜蛋白酶, 但木瓜蛋白酶与亲和成相剂的相互作用及其分配行为与机制尚不清楚。研究木瓜蛋白酶与不同金属离子亲和成相剂之间的相互作用和吸附动力学模型;对酶的亲和结合物进行物理表征和分子模拟。阐明木瓜蛋白酶与不同金属离子亲和成相剂之间的亲和作用原理。将双水相萃取技术和亲和分配技术相融合, 提出基于木瓜蛋白酶的金属螯合亲和双水相分配技术, 该技术有望大力推动木瓜蛋白酶工业化高效制备的发展。     

茶皂素纯化方法的比较及其组分的鉴定

为了获得能用于茶皂素组分分析及鉴定的高纯度茶皂素,采用有机溶剂沉淀法、乙醇重结晶法、大孔树脂法和反相柱层析法4种方法对冷榨油茶籽饼中的茶皂素进行纯化,以茶皂素紫外吸收特征峰强度为指标,比较4种方法的纯化效果。结果表明:反相柱层析法能有效去除茶皂素粗品中大部分杂质,是获得高纯度茶皂素的有效方法,得到的茶皂素样品纯度为95%,可作为茶皂素的标准品。利用高效液相色谱和质谱对茶皂素反相柱层析纯化物进行组分分析,验证了其中5种组分为文献中已经报道的茶皂素单体。     

条斑紫菜中四个多糖组分的提纯及组成分析

利用离子交换柱层析和凝胶柱层析法对条斑紫菜热水提取物中的多糖进行了分离纯化,共获得四个不同的多糖组分．柱层析法测出它们的分子量分加别为2.2×105、2.0×104、1.8×105和1.5×104。采用气相色谱及化学分析等方法测出多糖各种组成成分的含量。     

大蒜多糖的体外抗凝血作用及结构分析

采用碱提法和DEAE-52纤维素柱层析法,从大蒜中分离纯化出3种多糖组分(GPⅠ、GPⅡ和GPⅢ);采用体外抗凝血活性试验分析了大蒜粗多糖及其分离组分GPⅠ的抗凝血作用;采用SephadexG-100凝胶层析法和冻融分析法鉴定GPⅠ的纯度,采用气相色谱分析了GPⅠ的单糖组成,首次采用凝胶渗透色谱与多角度光散射仪及示差检测器连用系统测定了GPⅠ的分子结构。结果表明:GPⅠ、GPⅡ和GPⅢ分别为大蒜多糖总量的75.2%、15.5%、9.3%;大蒜粗多糖及其分离组分GPⅠ能显著延长人体血浆的APTT值,通过影响内源性凝血系统发挥抗凝血作用;GPⅠ由鼠李糖、果糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖及1种未知单糖组成,构成比例为1.5∶1.1∶3.3∶1∶5.1∶3.5,分子质量为5.2×104～5.6×104u,分子旋转半径为31.5～32.9nm,分布宽度指数为1.039和1.084,分子呈球形。     

碱溶性油茶籽饼粕多糖的提取工艺研究

采用油茶籽饼粕为原料,先用热水浸提,再进一步用减法提取碱溶性油茶籽饼粕多糖,应用正交试验优化碱溶性油茶籽饼粕多糖的提取工艺。在单因素分析的基础上,研究不同料液比、温度、碱浓度、时间对多糖得率的影响。结果表明：碱溶性油茶籽饼粕多糖提取的最佳工艺条件是料液比为1：30,提取温度为90℃,碱浓度为0.4mol.L-1,提取时间为2h。在此条件下多糖得率达到8.25%。     

条斑紫菜中四个多糖组分的提取及组成分析

利用离子交换柱层析和凝胶柱层析法对条斑紫菜热水提取物中的多糖进行了分离纯化,共获得四个不同的多糖组分,柱层析法测定它们的分子量分别为２．２＊１０＾５、２．０＊１０＾４、１．８＊１０＾５和１．５＊１０＾４。采用气相色谱及化学分析等方法测出多糖各种组成成分的含量。     

油茶籽多糖降血糖作用的初步研究

研究了油茶籽多糖对糖尿病小鼠的降血糖作用。对正常小鼠和四氧嘧啶造模的高血糖小鼠分别给予油茶籽多糖腹腔注射,GOD-POD法测定小鼠血糖值,研究不同组别油茶籽多糖的降血糖效果,并用DPPH法研究油茶籽多糖清除自由基能力,探讨油茶籽多糖降血糖作用的机理。结果表明:油茶籽多糖具有一定的降血糖作用,其中,CPS精品降血糖效果最好;油茶籽多糖可不同程度的提高自由基清除力。     

氯霉素高特异抗体的制备与纯化

目的自制免疫亲和层析柱,采用亲和层析法获取高纯度的抗氯霉素抗体并对其进行活性分析。方法采用硫酸铵分级沉淀法对抗体进行初步提取。然后选用3,3′-二氨丙基亚胺(DADPA)作为亲和凝胶与配基氯霉素之间的间隔臂,制备分离纯化抗氯霉素特异性IgG的亲和层析柱,对IgG粗品进行亲和层析纯化,并用ELISA法检测其活性。结果经饱和硫酸铵分级沉淀,可除去大部分的杂蛋白,较好实现对目标蛋白的初步分离;采用自制的免疫亲和层析柱,可获得高纯度的兔抗氯霉素抗体,检测其活性比纯化前提高了4倍,交叉反应结果显示抗体对CAP有高的特异性,对其他类似药物无反应活性。结论应用本试验所建立的方法可得到高纯度的抗氯霉素抗体,为氯霉素的免疫检测奠定了基础。     

松茸多糖的提取纯化工艺研究

对松茸多糖提取工艺及纯化工艺进行了研究,通过正交试验得出当料水比1:12,温度95℃,提取时间3.5h时松茸多糖提取率最高,平均为3.05%.对Sevag试剂脱蛋白进行考察,以Sevag试剂脱蛋白6次能除去核酸和蛋白质.对粗多糖采用DEAE-SephadexG-25柱层析法进行了精制,得到单一洗脱峰,占总加样多糖(69μg)的41.71%,对该成份进行了红外扫描,显示有多糖吸收峰.     

7种肉类线粒体DNA的提取及鸭源性成分检测

探讨肉类线粒体DNA(mitochondrial DNA,mt DNA)提取方法,对7种生肉中的鸭肉成分进行鉴别。应用改良盐析法和柱层析法提取肉类mt DNA,紫外分光光度计检测mt DNA的浓度和纯度,设计鸭肉cyt b特异性引物,采用PCR对7种生肉中的鸭肉成分进行鉴别。结果:两种提取肉类mt DNA的方法均能保证DNA的浓度及纯度达到PCR的要求,柱层析法成本略高于改良盐析法;鸭引物可以从7种生肉中鉴别出鸭源性成分,经过多次重复试验证明了鸭肉引物的特异性,为肉制品质量监控的应用提供了实验基础。     

油茶籽多糖分离纯化和结构分析

以120min、50℃、1:3的料液比提取多糖粗品,并采用Sevage法对得到的油茶籽多糖粗品进行脱蛋白,再通过DEAE-纤维素、SephadexG-100柱层析进一步纯化,得到三种类型(CPSⅠ、CPSⅡ、CPSⅢ)的油茶籽多糖。油茶籽多糖样品的水溶液在紫外-可见光260nm(核酸)和280nm(蛋白质)处无明显吸收,但在190nm到210nm之间有多糖特征吸收峰。通过柱层析标准样品分析,可以得出CPSⅠ的分子量大约为256035Da,CPSⅡ的分子量大约为10290.3Da,CPSⅢ的分子量大约为3590Da。薄层色谱分析初步推断CPSⅠ由半乳糖和木糖组成;CPSⅡ由果糖和木糖,以及另一种不明的单糖组成;CPSⅢ由半乳糖组成。通过红外光谱分析推测CPSI可能是含有磷酸基团的多糖;CPSII和CPSIII都含有纯的醇基团,且CPSII中的一元醇、二元醇的含量比CPSIII高,CPSII和CPSIII都含有α糖苷键和β糖苷键。     

仙人掌多糖中单糖组成的气相色谱分析

从仙人掌茎中提取多糖,并采用SuperdexTM200、SaphacrylS-100HR、Sephadex G-100凝胶柱层析法分离得到2个多糖组分(OPS Ⅰ和OPSⅡ),它们均为化学均一物质;用气相色谱法分析仙人掌多糖OPS Ⅰ和OPSⅡ的单糖组成,结果表明OPSⅠ主要由鼠李糖、葡萄糖和半乳糖组成;OPSⅡ主要由岩藻糖、木糖和葡萄糖组成.     

五味子多糖的提取及分离

五味子是一种具有广阔开发前景的传统中药材。实验中,以五味子为原料,利用水提醇沉法得到了五味子粗多糖。在料液质量体积比为1 g∶32 mL,浸提温度99℃,提取时间4 h的适宜的提取工艺条件下,粗多糖的提取率达5.61%。采用酶法与Sevag法联用脱除粗多糖中蛋白质效果较好。利用凝胶色谱柱层析法对多糖半纯品进行分级分离,得到了两种多糖Ⅰ和Ⅱ。经薄层色谱分析,初步确定了两种多糖的单糖组成,又通过红外光谱分析,证明多糖Ⅰ可能为α-呋喃糖,多糖Ⅱ可能为β-吡喃糖。     

灵芝多糖的分离与纯化

对灵芝多糖的提取工艺进行研究，采用冷、热水、冷、热碱液分别从灵芝菌丝体和子实体中提取灵芝多糖，使多糖获得初步分级。还比较了浸提温度、加水比、浸提次数、提取时间等因素对粗提的影响，选定了适宜的提取工艺，并选用层析法纯化了多糖，使多糖纯度达到９６％以上。     

油茶籽热处理对油茶饼中多糖含量及其抗氧化性影响的研究

考察了热风、红外辐射和微波辐射3种油茶籽热处理方式对油茶饼中多糖含量及其抗氧化性的影响。结果表明:油茶籽仁饼和油茶籽饼中多糖含量分别为44. 34、19. 27 mg/g,说明多糖主要集中在油茶籽仁中;适度加热可以提高油茶饼中的多糖含量,高温(150℃)或高火力微波(700 W)加热可能会导致油茶饼中多糖含量下降;油茶籽(仁)中的多糖具有较高的抗氧化活性(ABTS+自由基清除率 92%);尽管高温加热后油茶饼中的多糖含量有所下降,但是单位多糖的抗氧化性相对提高,这可能由于加热导致油茶籽多糖组成或结构发生了变化。     

一种用于葡萄酒多糖组分鉴定的薄层层析法

本研究通过比较几种展层剂对常见单糖的分离效果,初步建立了鉴别葡萄酒中多糖组分的薄层层析法.结果表明,利用乙醇沉淀法提取葡萄酒中的粗多糖,用Sevage法除去蛋白,透析法除去小分子物质,展层剂乙酸乙酯-正丁醇-异丙醇-嘧啶-醋酸-水(34-12-21-10-12-10)展层,即可获得很好的鉴别效果.应用该试验体系分析了澄清、浑浊和沉淀葡萄酒中的多糖组成主要以葡萄糖、阿拉伯糖、少量的鼠李糖和半乳糖为主.     

曲霉胞内多糖的研究

研究获得产胞内多糖的最佳时间为84h，胞内粗多糖的最佳提取条件为：浸提温度90℃，浸提时间3h，浸提次数为2次，破壁时间12min。采用sevage和三氯三氟乙烷（CFC—113）法结合去蛋白的效果很好。采用Sephadex G75分离纯化曲霉多糖，获得2种胞内多糖（IPSⅠ和IPSⅡ）。纸层析和凝胶柱层析结果显示IPSⅠ和IPSⅡ均为纯物质。采用薄层层析法，分析这2种多糖组分均可能有甘露糖、葡萄糖和鼠李糖，采用红外光谱对这2种多糖进行了初步的结构鉴定，发现这2种多糖在结构上略有差异。