茯砖茶发花过程中冠突散囊菌的变化及 差异性初报

目的 探讨不同季节、地区茯砖茶发花过程中冠突散囊菌类型的变化。方法 样品取自武义、长沙不同发花季节, 通过稀释平板法对样品中微生物进行培养与初筛, 并于光镜下观察初筛菌株的结构。对照《中国真菌志》对菌株进行鉴定。结果 在武义四季发花过程样中共分离得到两株冠突散囊菌, 长沙三季发花过程样中有五株冠突散囊菌、一株阿姆斯特丹散囊菌及一株肋状散囊菌。武义各季节发花过程中散囊菌无类型差异, 长沙夏季发花过程中散囊菌与其他两季有明显类型差异; 所有样品中的优势散囊菌均相同。结论 在发花过程中微生物的类型存在地域性和季节性的差异。     

冠突散囊菌在发酵茶中应用的研究进展

冠突散囊菌是茯砖茶在特定环境下通过"发花"工艺长成的自然益生菌体,具有改良茶品质,增强产品降血压,减肥等功效。主要介绍冠突散囊菌的功能特性、"发花"条件与茶品质关系,存在问题与发展方向,以期为冠突散囊菌深入研究和应用提供帮助。     

茯砖茶中冠突散囊菌的分离鉴定及其在液态发酵中的应用

研究冠突散囊菌生长特性及其在液态发酵中的应用。以湖南益阳手筑茯砖茶为研究对象,对其中的微生物进行分离纯化,特异性区段ITS序列进行扩增、测序,从而构建系统发育树,分析菌株的系统发育学地位。通过与GenBank数据库中的同源序列比对,其中有9 株与数据库中的冠突散囊菌（Eurotium cristatum）的序列相似度在99%及以上。选取相似度为100%的菌株HNYYWX.13进行菌落形态、显微形态及电镜形态观察,并探究其生长曲线。接种冠突散囊菌的孢子悬浮液于平利山茶浸提液中进行液态发酵,对发酵过程中茶多酚总量及氨基酸总量做动态监测,以此评价添加碳源、灭菌处理对冠突散囊菌在液态发酵应用中的优劣。结果表明：添加碳源、不进行灭菌处理有利于冠突散囊菌在液态发酵中的应用。     

六堡茶真菌分布浅析及金花菌筛选鉴定

选取多家梧州六堡茶龙头企业生产的六堡茶产品进行真菌分析,并对其中的冠突散囊菌("金花菌")进行分离选育和鉴定。结果显示:各厂家生产的六堡茶,真菌总数在(10~2~10~3)cfu/g干茶数量级之间,但真菌种类存在明显差异。各厂家生产的六堡茶产品中都有不同含量的金花菌,通过菌株分型结果显示六堡茶产品冠突散囊菌与安化黑茶冠突散囊菌亲缘性相近。进一步通过耐热性和生长速度试验筛选出2株适宜六堡茶发酵,表现优良的冠突散囊菌菌株,为六堡茶工艺升级和产品创新奠定基础。     

泾阳茯茶中冠突散囊菌的鉴定及降脂作用研究

目的 探究陕西泾阳茯砖茶中冠突散囊菌的鉴定标志, 鉴定泾阳茯茶中的冠突散囊菌, 并研究其降脂作用。方法 从泾阳茯茶中分离筛选真菌, 观察其在3种不同培养基的生长特征, 结合形态学观察和真菌内源转录间隔区(internally transcribed spacer, ITS)基因序列同源性比对; 人工接种菌种至不同产区茶类中, 对接种至茶叶中菌种的形态学、扫描电镜(scan electron microscope, SEM)鉴定和接种后茶叶进行感官审评; 最后建立小鼠肥胖模型, 探讨回接冠突散囊菌后黑茶水浸提物对肥胖模型鼠的作用。结果 筛选分离得到的菌株(JY1)为冠突散囊菌(Eurotium cristatum, E.C.); 该菌在几种试验茶类均可以良好“发花”; 除红茶外, 其余茶样闭囊壳较饱满且子囊孢子的“赤道”周围存在较多小孔, 而红茶表现出以分生孢子为主; 接种后的散茶, 在香气, 汤色和滋味上均有不同程度变化; 与肥胖模型组相比较, 发花茶能显著抑制鼠体质量增长和Lee`s指数, 使血清总胆固醇(total cholesterol, TC)下降, 皮下脂肪细胞直径明显变小。结论 陕西泾阳茯茶中冠突散囊菌“赤道”周围存在较多小孔的电镜结果有可能作为陕西茯茶的特异性鉴定标志, 该菌可在黑茶, 红茶, 白茶, 绿茶上优势生长, 不同程度改变接种后的茶叶香气、汤色、滋味。回接冠突散囊菌后黑茶可降低血清总胆固醇水平, 同时有抑制脂肪细胞体积增大的作用, 且作用有一定时效性。     

茯砖茶生产过程中微生物动态变化及优势菌鉴定

从益阳茶厂有限公司茯砖茶生产线上取得不同工艺流程的茶叶样本,通过稀释平板培养跟踪其微生物种群动态变化过程,同时分离纯化样品中优势微生物"金花菌",并对其进行有性型和无性型的诱导培养,通过光学显微镜、电子显微镜观察其形态特征及18S rDNA序列分析,对该菌株进行分类鉴定。结果表明:渥堆期间主要的微生物为酵母、黑曲霉、青霉与根霉,"金花菌"数量较少,但压砖后进入到发花阶段逐渐成为茯砖茶内的主导微生物;通过对"金花菌"的形态学与分子鉴定最终将其确认为冠突散囊菌(Eurotiμm cristatμm)。     

冠突散囊菌及其发酵应用研究进展

茯砖茶在加工过程中会“发花”,产生金黄色颗粒,而冠突散囊菌是茯砖茶“发花”的关键微生物,对茶的品质起关键作用。冠突散囊菌发酵可促进茶叶内含成分转化,改善产品香气滋味,且产生多种活性代谢物,具有抑菌、降血糖、调节肠道菌群、抗氧化等功效,已经成为重要的资源微生物得到广泛应用。本文综述了冠突散囊菌的基本生物学特性,丰富的酶系,多样的活性代谢物,安全性,以及在茶叶、谷豆类及中药材深加工等领域发酵应用的物质和生物活性变化等内容,并对存在的问题和未来的研究方向进行了分析和展望,以期为其深入研究和开发提供帮助。     

冠突散囊菌在不同培养环境下生长特性的研究

探究冠突散囊菌（Eurotium cristatum,E.C.）在不同加工工艺、生长基质和生长地域的生长特性;采用不同加工工艺（改变压制密度、茶梗含量和入烘水分）、不同生长基质（不同产区的6大茶类基质和25种不同的非茶类基质）、7个不同地域茯砖茶为研究对象,使用茯茶加工工艺对上述材料进行冠突散囊菌发酵,结合茯茶理化指标对发酵后材料进行评判,观察冠突散囊菌菌体形态学,生长特征,显微特征,最终利用形态学,分子生物学等指标对不同地域茯茶内优势菌株鉴定和同源性比较;茯砖茶的加工过程中,不同的茶梗含量,压制密度和入烘水分,冠突散囊菌的数量、闭囊壳大小及茶水浸出物均可发生显著变化,其中调控入烘茶砖的水分对于产品质量优劣是比较有效的控制方法。同时,冠突散囊菌在各种茶类和非茶类基质上均可以生长,7个产区茯茶样品中分离获得的冠突散囊菌形态学特征,超微结构接近,同源性大于97.5%;冠突散囊菌生长具有普遍性,可控性和非地域性。     

冠突散囊菌对茯砖茶品质形成的影响

以同批黑毛茶为原料,通过人工接种发酵试验追踪检测优势菌和主要功效成分的含量,研究冠突散囊菌对茯砖茶品质的影响。结果显示,随着冠突散囊菌的生长,接种发酵剂1、2及对照组(ck)茶样中茶多酚、EGCG、游离氨基酸、咖啡碱、茶黄素、茶红素含量出现有不同程度下降,茶多糖、水浸出物和茶褐素含量上升,其中水浸出物含量分别上升1.49%、2.88%、3.22%。感官评定结果显示"发花"对茯砖茶的品质形成有促进作用。     

冠突散囊菌DNA提取方法的比较

为寻找一种良好的提取冠突散囊菌基因组DNA的方法。实验以冠突散囊菌(CGMCC 3.0462)标准菌株为研究材料,比较不同方法提取冠突散囊菌的基因组DNA的效果差异,再利用DNA浓度测试、琼脂糖凝胶电泳及PCR扩增3种手段比较DNA提取的效果。结果显示:600W超声破壁和液氮研磨破壁提取的冠突散囊菌基因组DNA杂质含量高。而200W的超声功率无法破碎冠突散囊菌细胞壁,无法提取DNA。400W超声破壁提取的DNA的浓度较大、纯度高、效果好,适用于冠突散囊菌基因组DNA的提取。但400W超声破壁、600W超声破壁和液氮研磨破壁3种方法提取的基因组DNA均达到PCR实验的要求。     

冠突散囊菌发酵桑叶茶品质研究

为探究冠突散囊菌在制作发酵桑叶茶中的应用,从茯砖茶"金花"中筛选冠突散囊菌,并进行菌落形态特征观察、光学显微镜及电镜观察、18S rDNA测序、同源比对,鉴定得到一株冠突散囊菌,命名为GTSNJ001。利用该菌株,以桑叶为原料,制作冠突散囊菌发酵桑叶茶和桑叶绿茶,以多糖、黄酮、多酚、水浸出率、1-脱氧野尻霉素(DNJ)和感官品评为主要评价指标,研究冠突散囊菌发酵桑叶茶和桑叶绿茶品质。结果表明:与桑叶绿茶相比,冠突散囊菌发酵桑叶茶的多糖、黄酮、多酚含量均下降,降幅分别为76.1%、12%、7.1%,而DNJ和水浸出率含量大幅增加,增加量为未发酵桑叶茶的3倍左右,冠突散囊菌发酵桑叶茶感官品评综合得分也优于桑叶绿茶。     

高产阿魏酸酯酶菌株的筛选及其产酶条件优化

通过初筛、复筛从茯砖茶中筛选到了1株产阿魏酸酯酶活力较高的菌株,经个体形态和菌落特征初步鉴定其为冠突散囊菌;以阿魏酸酯酶酶活为衡量指标,选取黑毛茶含水量、接种量、培养温度、培养时间为因子,研究确定筛选出来的冠突散囊菌进行固态发酵黑毛茶的产酶条件。结果表明:黑毛茶固态发酵实验中,黑毛茶含水量26%,接种量1‰,温度30℃条件下培养4d,其酶活力最高可以达到142m U/g。     

冠突散囊菌对植物酚类物质的生物转化及生物活性的影响

冠突散囊菌（Eurotium cristatum）,俗称“金花”菌,是茯砖茶后发酵过程中的优势微生物,其对茯砖茶特殊品质和功能活性的形成具有重要作用。在发酵过程中冠突散囊菌能分泌丰富的胞外酶,如多酚氧化酶、淀粉酶、β-葡萄糖苷酶等,对茶叶中的酚类物质如儿茶素等具有代谢及转化作用。近年来,大量研究表明冠突散囊菌能作用于其他植物基质,如中草药、豆类、谷物等,对其中的酚类物质进行生物转化并引起结构改变,从而使其功能活性发生显著变化。该文就近年来国内外关于冠突散囊菌对植物酚类成分的转化及生物活性的影响进行综述,为冠突散囊菌在食品及健康保健行业中的应用提供理论依据和指导。     

黑茶优势菌对绿茶浸提液发酵过程多酚类化合物的影响

利用从普洱茶中分离出的黑曲霉、根霉和从茯砖茶中分离出的冠突散囊菌接种云南大叶种晒青毛茶茶汤,进行单一菌株发酵,对发酵过程茶多酚类化合物的含量变化进行分析。结果表明：随着发酵时间的延长,茶多酚含量显著降低,黄酮类化合物总量在黑曲霉、冠突散囊菌作用下分别减少72%、31.76%,在根霉作用下增加了94.92%;儿茶素各组分的含量变化较大,其中表没食子儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯、表儿茶素、表儿茶素没食子酸酯均呈现显著的下降趋势,而儿茶素、没食子酸在不同菌株作用下表现出不同的变化规律;茶黄素在黑曲霉、根霉作用下先增加后减少,冠突散囊菌则相反;茶红素总体呈下降趋向,茶褐素在根霉、冠突散囊菌作用下显著增加。     

茯砖茶人工接种发酵过程主要功效成分的变化

以黑毛茶为原料,在茯砖茶常规加工工艺的第二次汽蒸后接种冠突散囊菌纯菌种发酵剂,进行发花试验,分析主要功效成分的变化。结果表明,与对照相比,人工接种的茶砖发花提前4~6 d。发花第4天至成品,人工接种茶砖的茶氨酸、咖啡碱、茶多酚、茶红素和茶黄素含量分别下降了43.79%、14.11%、32.32%、57.03%和27.70%,茶褐素含量增加了32.88%,茶多糖和茶色素含量与冠突散囊菌的增长呈正相关变化,冠突散囊菌发花越多,功效成分变化越大,砖茶品质越好。     

冠突散囊菌对发花黑毛茶品质呈味成分的影响

目的探索湖南农业大学长安教学基地湘妃翠、碧香早和茗丰3个品种制成的黑毛茶经冠突散囊菌发花后其呈味品质成分的差异变化,对黑毛茶进行冠突散囊菌发花优化实验。方法采用国标检测方法对发花前黑毛茶及发花后成品茶其水浸出物、茶多酚、游离氨基酸、可溶性糖等呈味成分进行分析,对所测数据进行组间和组内方差分析。结果湘妃翠经发花后其水浸出物、茶多酚、游离氨基酸和生物碱在发花成品茶中下降幅度最大;碧香早经发花后其成品茶中茶多酚、游离氨基酸与其原料茶相比显著下降;茗丰经发花后其茶多酚、氨基酸和生物碱与其原料茶相比显著下降,而可溶性多糖显著增加。结论在三个发花成品茶中,以湘妃翠化学品质表现最为突出,湘妃翠较碧香早、茗丰更适制发花黑茶,其次为茗丰。     

黑茶菌添加量对包包曲培菌过程品质的影响

以偏高温包包曲制作工艺为基础,在传统小麦制曲原料中,分别按小麦重量的0%,5%,10%,15%,20%添加含冠突散囊菌的黑茶培养物制曲坯,研究培菌管理过程中主要微生物类群、酶活力和常规理化指标的变化。结果表明：在培菌管理的28 d内,与传统大曲对照组相比,各黑茶菌添加组的微生物类群数量（霉菌、酵母、细菌和冠突散囊菌）、常规理化指标（培菌温度、酒曲水分、酸度和淀粉含量）和酶活力（发酵力、液化酶活力和糖化酶活力）均有不同程度的变化,且各黑茶菌添加组之间也呈不同程度的变化。在传统偏高温包包曲中,采用含冠突散囊菌的黑茶菌培养物进行强化,在培菌管理结束的第28天入库时,15%和20%的黑茶菌添加组的霉菌、细菌和酵母数量均与传统大曲对照组之间差异显著（P<0.05）,说明添加黑茶菌能显著促进大曲中霉菌的生长繁殖、抑制大曲中细菌和酵母菌的生长繁殖;同时,15%和20%的黑茶菌添加组的液化酶活力和糖化酶活力均与传统大曲对照组之间差异显著（P<0.05）,说明添加黑茶菌能显著提高大曲的液化酶活力和糖化酶活力。     

冠突散囊菌发酵杜仲茶的工艺优化

以杜仲叶为主要材料,探索冠突散囊菌发酵杜仲茶的最佳工艺条件。以发酵天数、接种量、含水量、渥堆温度、渥堆时间为单因素进行试验,并选取主要因素进行正交试验,并以孢子数、绿原酸含量及发花情况为评价指标,确定冠突散囊菌发酵杜仲茶的最佳工艺。研究表明:其最佳工艺条件为接种量20%、含水量35%、渥堆温度45 ℃、渥堆时间3 h、发酵时间为8 d,在此条件下,所制得的冠突散囊菌发酵杜仲茶金花茂盛,颗粒饱满,孢子数为1.13×106 CFU/g干茶,绿原酸含量为0.478 mg/g,有金花独特香气且气味浓郁。     

茯砖茶中霉菌含量和散囊菌鉴定及利弊分析

在17份茯砖茶样品中,霉菌最高含量是1．7X10~6CFU/g,平均含量是4．2×10~4CFU/g地,散囊菌是优势霉菌,共分离到7种散囊菌:冠突散囊菌、间型散囊菌、匍匐散囊菌、谢瓦散囊菌、阿姆斯特丹散囊菌、赤散囊菌和一种散囊菌。对这些菌的分类特点及在茯砖茶中的利弊关系作了讨论。茯砖茶是我国特有的一种大量生产的边销茶,在我国的“茶文化”历史上还是一种较新的品种,创制才一百多年,原由湖南黑毛茶在陕西径阳筑制成砖茶,于本世纪40年代在四川试制成功,50年代在湖南开始压制生产。品质历来均以生“黄霉菌”愈多为佳、许多学者对其做过鉴定。近年来的教科书上多以灰绿曲霉群表示。仓道平对两份茯砖茶的优势灰绿曲霉菌株作了鉴定．认为是谢瓦曲霉(?)齐祖同对各地分离的茯砖茶中的5个优势菌株进行了鉴定,认为是冠突散囊菌(无性型．针刺曲霉)。散囊菌在茯砖茶中的存在及作用很少有研究报道。本研究对17份茯砖茶做霉菌含量检验,对分离的散囊菌属的种类作了讨论,以期达到在这方面研究抛砖引玉的作用。     

冠突散囊菌菌落计数方法的优化

茯砖茶中冠突散囊菌(Eurotiumcristatum)的数量是评判其产品质量的重要因素,目前大多数检测机构均使用传统的国标法来检测冠突散囊菌的菌落数量。冠突散囊菌有闭囊壳构造,传统国标法中计数方法存在缺陷,不能检测出茯砖茶中冠突散囊菌的真实数量。通过对传统方法的优化和改进,对样品充分粉碎并过60目筛,利用200颗玻璃珠增加振摇强度,延长振摇时间至60min,从而打破冠突散囊菌闭囊壳,释放其中的子囊孢子,能获得茯砖茶中所含冠突散囊菌的真实数量。结果表明:该方法优化效果明显,操作简单、经济实用性好。