菠萝酒酿造工艺研究

以菠萝为主要原料,研究菠萝酒的酿造工艺,测试活性干酵母D254 在菠萝酒发酵过程中酒精体积分数、总糖及密度的变化,并采用二次回归通用旋转组合设计进行发酵工艺的主要参数优化。优化结果表明,D254 的最佳发酵方案为：糖含量219.8g/L、pH3.5、温度19.8℃,感官评分为91.5。     

海带源降亚硝酸盐和胆固醇益生乳酸菌的筛选与鉴定

海带是天然的保健食品,本研究以淡干海带为原料,从中筛选出具有较强的降亚硝酸盐和胆固醇能力的优良菌株。采用盐酸萘乙二胺法测定菌株在MRS液体培养基中亚硝酸盐的含量,邻苯二甲醛法测定菌株在MRS液体培养基中胆固醇的含量,再对筛出的菌株进行鉴定。结果表明:从淡干海带中分离出的27株菌株中,有7株菌株具有很强的降解亚硝酸盐能力,降解率均达到97%以上。进一步对这7株菌株降解胆固醇的能力进行筛选,结果表明其中3个菌株降解胆固醇能力较强分别为:55.02%(La-3)、61.21%(La-10)、56.85%(La-15);经过形态特征观察、生理生化实验和16S r DNA基因序列相似性分析,结果显示这7株菌株均为植物乳杆菌。本文结果还表明了相同的植物乳杆菌其降解胆固醇的能力存在差异,显示了物种的多样性。     

Bar基因双元载体的快速构建及其在蛹虫草中的功能验证

为获得草铵膦完全抑制蛹虫草生长的最小浓度和一种快速构建Bar基因双元载体的方法,本文首先采用浓度梯度法研究草铵膦对蛹虫草的抑制效果,其次采用双接头PCR(DJ-PCR)构建Bar基因表达盒,然后分别采用T4 DNA连接酶法和同源重组法把Bar基因表达盒插入双元载体pAg1-H3的T-DNA区域,以构建Bar基因双元载体pAg-Bar,并比较T4DNA连接酶法和同源重组法的连接效果,最后通过农杆菌介导转化法来验证载体pAg-Bar的有效性及Bar基因在蛹虫草中的功能。结果表明:草铵膦完全抑制蛹虫草分生孢子生长的最小质量浓度为400μg/mL;采用DJ-PCR方法可快速构建Bar基因表达盒;采用T4 DNA连接酶法和同源重组法均可实现双元载体pAg-Bar的构建,而同源重组法更快速、高效;采用农杆菌介导转化法可把双元载体pAg-Bar中的Bar基因表达盒整合入蛹虫草的基因组,使蛹虫草转化子具有草铵膦抗性。本研究建立的载体构建方法具有快速、高效的特点,适用于抗性基因载体、敲除载体、超表达载体等载体的构建,为蛹虫草基因功能的鉴定提供技术支撑。     

蛹虫草中谷氨酰胺转氨酶基因的克隆及在毕赤酵母中的表达

谷氨酰胺转氨酶(TGase或TG)是一种可催化蛋白质间形成异肽键,使蛋白质改性的天然酶制剂。本文以蛹虫草基因组为模板,通过PCR扩增得到TGase相似蛋白的基因片段tgM,将其与大肠杆菌-毕赤酵母穿梭表达载体pPIC9K连接,构建重组表达载体pPIC9K-TG,在毕赤酵母中进行表达,实现目的蛋白的胞外分泌表达,结果发酵液中重组TGase的酶活力为100 U/L。本研究为TGase的异源表达及潜在的工业应用提供参考。     

强化鲁氏接合酵母对酱油品质的影响

为了研究强化鲁氏接合酵母（JL-02）对酱油品质的影响。通过测定JL-02菌株耐盐性、成曲pH和中性酶活力、不同酿造工艺两种酱油的理化指标以及挥发性风味物质并进行分析。结果表明,JL-02菌株耐盐性高达16%,成曲pH为6.85±0.08,中性蛋白酶活力为（2109.2±45.2）U/g;强化鲁氏接合酵母后的酱油总酸含量为（1.14±0.01）g/100 mL,较对照组有所增加,而还原糖含量为（1.06±0.01）g/100 mL,pH为5.09±0.03,均较对照组有所降低,氨基态氮含量并无明显差异,均达到特级酱油标准。同时成曲、对照组和实验组挥发性风味物质分别为15、52和57种,而后者新增呋喃类风味物质（2-正戊基呋喃、4-甲氧基-2,5-二甲基-3(2H)-呋喃酮和2,3-二氢苯并呋喃）,对三组样品挥发性风味物质进行主成分分析,聚类分析结果良好。本研究为今后酱油企业进行强化酵母菌株酿造酱油工艺提供一定的思路和技术方法。     

液相等电聚焦电泳纯化燕窝蛋白质

以市售燕窝为材料,采用MicroRotofor系统进行液相等电聚焦电泳(liquid-phase isoelectric focusing,LIEF)纯化燕窝蛋白质,等电聚焦电泳后对收集到10个小室的样品进行SDS凝胶电泳分析。结果显示,燕窝蛋白质提取液中的一些胶状物聚集在聚焦槽酸端第1～4样品室,第9、10样品室杂质也较多,合并第5～8样品室的样品,即得纯化后的燕窝蛋白用于后续双向电泳分析。液相等电聚焦电泳预分离纯化技术结合双向电泳技术,对4个燕窝蛋白质进行较好的分离,在2-DE胶上检测到约30～60个蛋白质点。由此可见,液相等电聚焦电泳预分离技术是燕窝蛋白质进行2-DE分离前的重要纯化手段。     

基于GC-MS分析不同酿造周期酱油产品的挥发性风味物质

为研究不同酿造周期酱油产品对酱油挥发性风味的影响,文章在对成曲pH和中性蛋白酶酶活力指标测定的基础上,通过气质联用技术对3组不同酿造周期的酱油挥发性风味物质进行鉴定并分析。结果表明,成曲的pH为6.78±0.04,中性蛋白酶酶活力为(2 102.77±60.30) U/g,制曲效果良好;3组酱油样品挥发性风味物质种类较为接近,JY1(90 d)、JY2(180 d)和JY3(270 d)挥发性风味物质种类分别为55,53,50种;3组酱油的挥发性风味物质相对含量随着酿造周期的增加发生了一定转变,尤其是在酿造270 d的酱油样品(JY3),其醇类风味物质明显减少,而酯类和酚类风味物质明显增多;对3组酱油样品挥发性风味物质数据进行主成分分析,聚类分析效果良好。该研究为酱油企业对酿造酱油的生产周期调整及酱油产品的后期调配提供了新的思路和技术方法借鉴。     

纤维素酶活力测定研究进展

纤维素酶是一种多酶复合体系,其作用的底物比较复杂,活力测定方法也存在差异.如何准确测定纤维素酶活力的大小,对于研究该酶的特性及应用具有重要的意义.本文对纤维素酶测定的常用方法进行了综述和评价.     

平菇高丝氨酸乙酰基转移酶基因的克隆及异源表达优化

目的:为进一步提高酶法合成蛋氨酸的产量,从平菇中克隆获得蛋氨酸酶法合成的备选基因。方法:提取平菇菌丝球总RNA作为模板,通过反转录PCR获得高丝氨酸乙酰基转移酶基因(homoserine acetyltransferase gene,hta),利用酶切连接法构建含hta基因的表达载体pET32a-hta,转化至大肠杆菌BL21诱导表达并对诱导条件进行优化,同时,将表达载体pET32a-hta和pET22b-hta分别转入大肠杆菌工程菌Rosetta、Origami B和Rosetta gami plysS,探究该酶在不同载体及宿主组合中的表达情况。结果:经ExPAS-ProtParam tool、PSIPRED、SWISS-MODEL等软件分析表明,hta基因编码的多肽由445个氨基酸组成,等电点为5.93,二级结构主要有螺旋、无规则卷曲和延伸链。SDS-PAGE分析表明,IPTG终浓度为0.2 mmol/L,诱导温度为25℃,诱导时间为16 h时,工程菌BL21/pET32a-hta的可溶性高丝氨酸乙酰基转移酶(HTA)表达量最高。HPLC结果表明,当表达载体为pET32a-hta,表达宿主为Rosetta时,工程菌Rosetta/pET32a-hta诱导表达的HTA比活力最高为2.2 mU/mg。结论:经诱导条件和表达系统优化后,HTA的表达量提高且比活力增强,为进一步大规模生产蛋氨酸打下基础。     

基于蛹虫草单核芽生孢子的原生质体制备条件的优化

为了获得单细胞核的蛹虫草材料和制备原生质体的最适酶解条件,以蛹虫草芽生孢子为试验材料,通过荧光染色观察其细胞核数,以溶壁酶质量分数、酶解温度、酶解时间为试验因子,原生质体得率为响应值,采用单因素和Box-Behnken试验设计进行优化。荧光显微镜观察结果表明蛹虫草芽生孢子为单个细胞核。响应面优化试验结果表明蛹虫草原生质体最适制备条件为:溶壁酶质量分数2.06%,酶解温度26.1℃,酶解时间2.57 h。在此条件下,原生质体得率的预测值为8.97×106个/mL,验证试验所得原生质体得率为(9.17±0.29)×106个/mL,预测值和试验值差异不显著,回归模型拟合良好。在优化条件下制备的原生质体在含有0.8 mol/L甘露醇的再生培养基上的再生率达43.33%±2.08%。