响应面法优化褶牡蛎多糖多肽联产工艺

利用响应面法优化褶牡蛎（Alectryonella plicatula Gmelin）多糖多肽联产工艺。单因素试验研究酶添加量、酶解时间、料液比对多肽质量分数、总糖质量分数、水解度及酸性糖质量分数的影响,在此基础上,应用Design-Expert 8.0.5.0建立数学模型,进行3因素3水平的响应面分析。结果表明,酶解法联产制备褶牡蛎多糖多肽的最佳工艺为：添加0.2%的胰蛋白酶（≥250 U/mg）,酶解80 min,料液比1∶3（g/mL）。此条件下进行重复实验,得到褶牡蛎酶解液中多肽质量分数为（85.14±1.67）%,总糖质量分数为（28.35±2.72）%,水解度为（11.12±0.61）%,酸性糖质量分数为（1.60±0.10）%。与回归方程预测值相近,说明褶牡蛎多糖多肽联产工艺可行。并按此工艺酶解褶牡蛎全脏器匀浆,粗多糖冻干品得率为（29.39±0.41）%;粗多肽冻干品得率为（36.81±0.47）%。研究为褶牡蛎活性多糖和多肽的联产制备提供了理论依据,可为企业创造更大的经济效益,以期实现褶牡蛎资源的综合利用。     

滇黄芩总黄酮酶解超声提取工艺及抗氧化活性研究

该文研究了滇黄芩总黄酮酶解超声提取的工艺条件及总黄酮的抗氧化活性。结果表明,纤维素酶解超声工艺对滇黄芩总黄酮的提取具有协同作用,提高总黄酮提取得率。在超声功率100 W条件下,通过单因素和正交试验,得出酶解超声最佳工艺条件为提取时间4 h、乙醇体积分数55%、加酶量50 U/g（干原料）、液料比30∶1（mL∶g）、提取温度50 ℃,在此条件下,平均提取得率为24.03%。抗氧化实验研究表明,滇黄芩总黄酮对超氧阴离子和羟自由基的清除率IC50分别为0.14 mg/mL、0.20 mg/mL。     

超声波辅助纤维素酶解法优化毛果鱼藤总黄酮的提取工艺及抗氧化活性

采用超声波辅助纤维素酶法优化毛果鱼藤总黄酮的提取工艺,并研究其抗氧化活性。在单因素实验基础上,通过Box-Behnken进行实验设计,获得最优提取条件,提高毛果鱼藤总黄酮提取率;采用羟基自由基、DPPH自由基清除法和总还原力测定抗氧化活性。结果表明:总黄酮最佳提取工艺为纤维素酶质量分数0.31%,乙醇体积分数85%,液料比为40:1 m L/g,超声时间为37min,酶解时间2 h,酶解温度49.2℃;在最优条件下,提取率为30.364 mg/g。毛果鱼藤总黄酮清除羟基自由基及DPPH自由基的IC50为1.17 mg/m L和0.18 mg/m L。超声波辅助纤维素酶法对毛果鱼藤总黄酮的提取率显著增加,且毛果鱼藤总黄酮具有良好的抗氧化活性。     

响应面法优化坛紫菜抗氧化肽酶法制备工艺

以坛紫菜为原料,通过酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶和纤维素酶酶解制备活性肽,以DPPH自由基清除率和多肽得率为评价指标,研究坛紫菜水解肽的抗氧化能力。结果表明:5种酶的酶解产物都具有抗氧化能力,中性蛋白酶酶解产物DPPH自由基清除率最高,选择它为最佳工具酶。通过单因素和响应面试验优化酶解工艺,得到最佳酶解工艺:酶解时间3.6 h、酶解温度47℃、酶用量16362 U/g、底物浓度3.0%、pH7.0。此条件下制备得到的水解肽具有较强抗氧化能力,DPPH自由基清除率可达(91.83±0.81)%。     

超声波结合酶法提取葡萄皮渣原花青素工艺优化及其抗氧化活性

以葡萄皮渣为试材,在单因素试验的基础上,通过L9（34）正交试验对超声波结合酶法提取酿酒葡萄皮渣原花青素的工艺条件进行优化,并对其抗氧化性进行研究。最佳工艺参数为纤维素酶（500 000 U/g）添加量0.30%、酶解温度55℃、酶解时间90 min、超声时间30 min、超声功率400 W。在最佳工艺参数下葡萄皮渣中原花青素的得率为14.22 mg/g。体外抗氧化试验结果显示,葡萄皮渣原花青素对DPPH自由基的半抑制质量浓度IC50为0.130 mg/mL,对羟基自由基的半抑制质量浓度IC50为0.228 mg/mL,与维生素C相比,其抗氧化能力更强。     

酶解制备贻贝抗氧化肽与功能性鱼糕的研制

开发具有抗氧化活性的功能性鱼糜制品。采用酶解法并筛选中性蛋白酶为最适蛋白酶制备贻贝抗氧化肽。利用正交设计优化酶解工艺条件,确定酶解温度45℃、酶解时间1 h、酶添加量1 500 U/g、料液比(g/mL)1∶5为较优酶解工艺条件,在此条件下酶解产物多肽得率达到(73.62±0.86)mg/g。添加质量分数大于2%的经冷冻干燥的贻贝酶解产物到鱼糕中,检测其在鱼糕中对猪油的抗氧化作用,经方差分析得知其有显著的抗氧化作用。以此说明鱼糕是具有抗氧化性的功能性食品。     

豆粕源抗氧化肽的制备、鉴定与活性表征

豆粕作为豆油加工的主要副产物,含有大豆中几乎全部蛋白质,具有广阔的应用前景。本研究中以大豆粕为原料,利用超声辅助酶解制备豆粕抗氧化肽,通过单因素和响应面实验,确定出最佳工艺参数为:酶解pH 8.0、底物质量分数9%、加酶量6 665.39 U/g、酶解温度50℃、酶解时间4.0 h、超声时间9 min、超声功率300 W。经超滤处理获得相对分子质量1 000的组分,并将该组分通过液相色谱串联二级质谱(LC-MS/MS)鉴定,获得豆粕源抗氧化五肽,氨基酸序列为Ile-Trp-Asn-Leu-Asn (IWNLN),其ABTS自由基清除能力的IC50值为(0.060±0.003) mg/mL,ORAC值为(7.614±0.138) mg TE/mg,羟自由基清除能力的IC50值为(0.008±0.001) mg/mL。本研究为豆粕抗氧化肽生产工艺优化和功能因子序列确证提供了实验基础,为豆粕蛋白肽功能产品开发提供新的思路。     

响应面法优化复合酶酶解制备可口革囊星虫胶原蛋白抗氧化肽工艺研究

以可口革囊星虫为原料提取胶原蛋白,以总抗氧化能力和超氧阴离子清除率为考察指标,通过单因素实验和响应面法优化复合酶酶解制备可口革囊星虫胶原蛋白抗氧化肽工艺条件。结果表明,选用酶筛选试验中多肽抗氧化活性较高的木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶和酸性蛋白酶进行单酶和复合酶试验,最佳方案确定为木瓜蛋白酶与中性蛋白酶复合酶解。在单因素实验基础上确定复合酶添加量（U/g）、酶解温度（℃）、酶解pH、酶解时间（h）为自变量,通过响应面法优化并参考实际因素,确定复合酶酶解的最优条件是:复合酶添加量8135 U/g、酶解温度51.6 ℃、酶解pH6.4、酶解时间4.2 h,在此条件下酶解制备的胶原肽总抗氧化能力为(1.333±0.021）μmol/mL,超氧阴离子清除率为78.75%±0.94%。     

变性脱脂豆粕酶解物的特性研究

为探讨变性脱脂豆粕在胰蛋白酶作用下的水解特性及酶解物的特性,选用国产胰蛋白酶为水解酶对变性豆粕进行水解。研究了变性豆粕中多肽溶出率随温度、pH值、时间、底物浓度及酶用量的变化规律。用正交实验法找出水解变性豆粕的最佳实验条件,并对脱脂豆粕酶解物的性质进行初步研究。结果表明:胰蛋白酶水解变性豆粕的最佳条件为:温度50℃、时间6h、底物质量分数5%、用酶量10000U/g、pH值8.0。在最佳酶解条件下的多肽溶出率为69.34%。脱脂豆粕蛋白酶解物的溶解度比大豆分离蛋白有很大提高,粘度明显低于大豆分离蛋白。此外脱脂豆粕蛋白酶解物有一定的乳化性和乳化稳定性。     

两种技术联用优化刺玫果多酚提取工艺及体外抗氧化活性研究

目的优化刺玫果多酚的提取工艺并探讨其体外抗氧化活性。方法采用超声波辅助酶解法,通过正交试验考察纤维素酶用量、乙醇体积分数、酶解温度、超声时间对刺玫果多酚提取得率的影响;通过测定刺玫果多酚对DPPH、ABTS自由基的清除能力及总抗氧化活性来评价刺玫果多酚的体外抗氧化活性。结果影响刺玫果多酚提取率的因素顺序是超声时间>纤维素酶用量>酶解温度>乙醇体积分数,提取刺玫果多酚最佳的工艺条件为纤维素酶用量1.5%,乙醇体积分数为55%,酶解温度为50℃,超声时间为25min。3次重复实验,刺玫果多酚提取率为183.15mg/g;刺玫果多酚质量浓度为8.67mg/mL时,对DPPH自由基的清除率为89.70%,对ABTS自由基的清除率为90.85%,总抗氧化活性能力强。结论刺玫果多酚具有较好的抗氧化活性,在天然的抗氧化活性剂与自由基清除剂方面可以进一步开发与应用。     

双酶法制备银杏抗氧化肽工艺研究

为获得制备银杏抗氧化肽的最佳工艺,采用2709碱性蛋白酶和胃蛋白酶分步水解银杏种仁蛋白,以总还原能力为指标,考察酶用量、酶解温度、pH值和酶解时间这4个因素对银杏种仁蛋白酶解效果的影响。通过响应面试验得出2709碱性蛋白酶的最佳酶解工艺为：酶用量为6976U/g、酶解温度为55℃、pH值为8.9、酶解时间为5h,此时银杏种仁蛋白酶解液的总还原能力(A700nm)为1.278;通过正交试验,得到胃蛋白酶的最佳酶解工艺为：酶用量为9000U/g、pH值为3.0、酶解温度为50℃、酶解时间为2h,此时银杏种仁蛋白酶解液的A700nm为1.636。     

响应面优化冰岛刺参内脏团抗氧化肽制备工艺及其组成分析

以冰岛刺参内脏团蛋白为原料,利用复合蛋白酶酶解制备抗氧化肽。在单因素实验基础上,通过响应面法优化酶解工艺条件,并分析其抗氧化活性、分子量分布和氨基酸组成。结果表明,最佳工艺条件为底物质量分数4.4%,加酶量4887 U/g,pH7.0,酶解温度56 ℃,酶解时间4.2 h,在该条件下,2 mg/mL酶解产物的DPPH自由基清除率可达89.18%±0.11%,0.5 mg/mL酶解产物的ABTS自由基清除率和Fe2+螯合率分别为68.11%±0.12%、72.59%±0.08%,1.5 mg/mL酶解产物的羟基自由基清除率和还原力分别为71.86%±0.09%、0.7473±0.0105;分子量分布和氨基酸分析表明,冰岛刺参内脏团抗氧化肽中分子量低于1000 Da的肽占94.26%,富含酸性氨基酸和疏水性氨基酸,具有较高的抗氧化活性和营养价值。该研究为冰岛刺参深加工产业的发展提供了技术参考。     

酶法水解牦牛皮蛋白制备抗氧化肽工艺的优化

以牦牛皮为原料,用碱性蛋白酶水解牦牛皮蛋白制备抗氧化肽。以水解度和牦牛皮蛋白水解物对DPPH自由基清除率的IC₅₀值为评价指标,在单因素实验的基础上,结合响应面（Box-Behnken）试验设计筛选出牦牛皮抗氧化肽的最佳制备工艺。结果表明,最佳制备工艺为:水解温度51 ℃,酶用量10890 U/g,水解时间10.6 h,pH8.5,底物浓度5%,此时水解度为41.39%±0.69%,牦牛皮抗氧化肽清除DPPH·、ABTS+·、·OH的IC₅₀值分别为2.884、2.110、2.523 mg/mL。综上,该制备工艺下的牦牛皮抗氧化肽对自由基有良好的清除能力,且有较强的还原能力,说明牦牛皮抗氧化肽有望作为天然抗氧化剂得到开发利用。     

一种新型抗氧化五肽的纯化、鉴定与表征

以黑鲨鱼皮为原料,利用蛋白酶酶解制备和分离纯化抗氧化多肽,并探究其抗氧化机理。以1,1-二苯基-2-苦肼基（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除率为主要指标,以水解度为辅助指标,优化酶解工艺条件。通过反相高效液相色谱和电喷雾四极杆飞行时间质谱分离纯化和鉴定氨基酸序列并探究其体外抗氧化活性。结果显示,最佳水解蛋白酶为碱性蛋白酶,最优酶解工艺为pH 8.0、酶添加量311 U/mL、底物质量分数3%、酶解温度45 ℃、酶解时间4.9 h,所得的酶解液DPPH自由基清除率为77.61%,水解度为14.21%。经反相高效液相色谱分离,得到组分F19的DPPH自由基清除能力最强。经鉴定,选择抗氧化活性高的总离子流色谱峰（保留时间为10.02 min左右）进行一级质谱和二级质谱分析,获得纯化的新型抗氧化五肽,其分子质量为461 Da,氨基酸序列结构为Pro-Gly-Gly-Thr-Met,其DPPH自由基清除率为75.01%（1.0 mg/mL）,氧自由基吸收能力（以Trolox当量计）为2490.01 μmol/g。新型五肽的Pro和Met在抗氧化中起到关键性作用。本研究为黑鲨鱼皮抗氧化五肽的抗氧化机理及其构效关系提供了一定理论依据。     

响应面法优化草菇抗氧化肽的酶法制备工艺

以草菇为原料提取蛋白质,蛋白酶酶解蛋白制备抗氧化肽。以DPPH自由基清除率为指标,在单因素实验基础上,结合响应面法优化草菇抗氧化肽的提取工艺。通过超滤分离纯化获得不同分子量的肽段,采用DPPH自由基清除率、Fe2+螯合率和还原力法测定超滤组分的抗氧化活性。结果表明:中性蛋白酶为最优酶解蛋白酶,最佳酶解工艺条件为酶解时间3.70 h,加酶量3.81%,底物质量浓度3.11 g/100 mL,在此条件下,酶解产物的DPPH自由基清除率为69.85%±2.52%。通过超滤分级制备所得分子量最小的肽段F1（<3 kDa）具有最高的抗氧化活性,其DPPH自由基清除率、Fe2+螯合率和还原力分别为78.81%±1.56%、91.05%±1.65%、0.47±0.02。草菇抗氧化肽可作为潜在的天然抗氧化剂来源得到开发利用。     

酶法水解麦胚蛋白及其产物的抗氧化活性研究

选择碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胰酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶5种蛋白酶对麦胚蛋白进行水解,并考察其水解产物的抗氧化活性。结果表明,中性蛋白酶为制备麦胚抗氧化肽的最适蛋白酶,其最佳水解条件为:底物质量分数4%,酶添加量6 000U/g,酶解温度50℃,pH值7.5,水解至270min时抗氧化活性最大。     

酶解法制备鲟鱼皮活性肽条件优化及抗氧化能力

为提高从鲟鱼皮中提取的生物活性肽含量,以鲟鱼皮胶原蛋白为主要材料,以蛋白酶酶解后的肽得率为 主要考察指标,在单因素试验基础上利用正交试验分析加酶量、酶解温度、酶解时间对鲟鱼皮活性肽得率的影 响,并优化酶解条件。在此基础上以新鲜猪肉为模型,考察鲟鱼皮活性肽溶液处理对猪肉组织抗氧化酶（总超氧 化物歧化酶（total-superoxide dismutase,T-SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）、 谷胱甘肽S转移酶（glutathione S-transferase,GST））活力的影响。结果表明：酶解鲟鱼皮胶原蛋白的最适 酶为碱性蛋白酶,最佳工艺条件为加酶量12 000 U/g、酶解温度60 ℃、酶解时间4 h,在此条件下,肽得率为 （12.59±0.98）%;鲟鱼皮活性肽可以提高猪肉组织T-SOD、GSH-Px和GST活性,具有抗氧化功效。     

多宝鱼不同水解物肽段组成及体外抗氧化活性比较

为研究熟化、模拟消化和酶解对多宝鱼肉水解物抗氧化活性的影响,本研究分别采用碱性蛋白酶和胃蛋白酶-胰蛋白酶水解多宝鱼生肉和熟肉,制备生肉碱性蛋白酶水解物、熟肉碱性蛋白酶水解物、生肉体外模拟消化产物和熟肉模拟消化产物,并评价其水解度、相对分子质量分布、氨基酸组成、肽段组成和体外抗氧化活性的差异。结果表明:生肉碱性蛋白酶水解物的水解度最高,为20.18%;4种水解物的分子质量分布差异明显,共有肽段仅有1条,但氨基酸组成没有显著性差异;碱性蛋白酶水解物以肽段小于1000 Da的组分为主,2～4肽的含量达64.57%～51.73%,而模拟消化产物中1000～3000 Da的组分占比超过50%,以多肽(>10)为主,熟化过程会减少小肽(<6)的比例;体外抗氧化活性分析显示,碱性蛋白酶水解物的抗氧化活性均高于模拟消化样品,熟化会降低生肉碱性蛋白酶水解物的抗氧化能力,生肉碱性蛋白酶水解物具有最高的超氧阴离子和羟基自由基清除能力,以及最佳的铁离子还原能力。因此,碱性蛋白酶是优于模拟消化的多宝鱼蛋白水解方式,鱼肉的熟化总体上会降低水解物的抗氧化能力。