植物精油对柑橘的保鲜效果

为开发研制新型植物源柑橘保鲜剂,测定了13种植物精油对柑橘主要致腐菌意大利青霉和指状青霉的抑菌作用,确定最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration, MIC）和最低杀菌浓度（minimum bactericidal concentration, MBC）,并进行了菌丝生长的抑制试验和柑橘损伤接种试验。结果显示,13种植物精油中抑菌效果最佳的是丁香、牛至以及桂皮,对意大利青霉的抑菌圈分别为35.81、39.32、43.11 mm,指状青霉的抑菌圈分别为21.5、27.89、39.03 mm。这3种植物精油对意大利青霉菌的MIC分别为0.05%、0.05%、0.012 5%,MBC分别为0.1%、0.05%、0.012 5%,对指状青霉菌的MIC分别为0.1%、0.1%、0.012 5%,MBC分别是0.2%、0.1%、0.012 5%。0.1%的丁香、牛至和桂皮对菌丝生长的抑制率为100%。在损伤接种试验中发现指状青霉的致病力大于意大利青霉菌,对照在第4天贮藏中腐烂面积为10.19 cm²,约为意大利青霉的8倍。0.1%牛至、丁香...     

柑橘绿霉病中草药高效抑菌剂的筛选及抑菌机理研究

利用牛津杯法筛选出对柑橘绿霉病菌(指状青霉)有最佳抑制作用的中草药提取物,并通过测定培养液电导率变化等对其抑菌机理作进一步研究。结果表明:桂枝、桂皮、香薷等乙醇提取物对指状青霉均有较好的抑制效果,抑制圈均在20 mm以上,其中以桂枝的抑菌活性最佳,对指状青霉的抑制圈大小达31.56±0.66 mm,最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MFC)分别为6.25mg/mL、12.5 mg/mL,且其抑菌效果显著优于化学杀菌剂百可得。同时桂枝提取物对指状青霉菌的孢子萌发及菌丝生长发育也有较强的抑制作用,在提取液处理浓度为50 mg/mL时,孢子萌发抑制率高达99.007%,菌丝体细胞膜通透性增强,菌丝体可溶性蛋白及总糖含量分别只有1187.18μg/g及0.307%,菌丝形态呈现畸形甚至断裂,因而桂枝提取物对柑橘绿霉病菌有明显的抑菌活性,其抑菌作用主要是通过破坏细胞膜结构,扰乱菌丝物质代谢活动来实现的。     

砂糖橘精油化学组成及对指状青霉的抑菌活

采用水蒸气蒸馏法提取砂糖橘(Citrus reticulate Blanco)果皮精油,并用GC-MS对其成分进行分析,共鉴定出17种成分,主要包括柠檬烯(77.99%)、β-月桂烯(3.74%)、β-水芹烯(2.78%)、罗勒烯(2.64%)、β-芳樟醇(2.35%)、α-蒎烯(1.60%)、正辛醇(1.54%)、癸醛(1.24%)、4-松油醇(1.10%)和4-十一烯(1.04%)等。测定不同添加量(0.16、0.31、0.63、1.25、2.50、5.00、10.00μL/mL)砂糖橘精油对指状青霉孢子萌发和菌丝体生长的作用。结果表明：低添加量(＜2.5μL/mL)砂糖橘精油对指状青霉孢子萌发无影响甚至有促进作用,对指状青霉菌丝体生长有轻微的抑制;而高添加量(10μL/mL)则显著抑制孢子萌发和菌丝体生长(P＜0.05)。本实验表明砂糖橘精油在防治指状青霉具有一定作用。     

柠檬皮中的柠檬苦素对青霉的抑菌活性和机理研究

通过测定最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)和最小杀菌浓度(minimum fungicidal concentration,MFC)、孢子萌发抑制率、菌丝生长抑制率确定柠檬皮中柠檬苦素对青霉的抑菌活性;结合总糖含量和蛋白质含量、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, AKP)活力等的变化,以及扫描电镜观察对抑菌机理进行研究。结果表明:柠檬皮中柠檬苦素对青霉有很强的抑菌活性,对青霉的MIC和MFC分别为625和2 500μg/mL,对青霉菌丝生长和孢子萌发抑制的EC_(50)值分别为85.618和246.755μg/mL。柠檬苦素能在短时间内对青霉的细胞壁和细胞膜造成破坏,使胞内物质大量渗出;且柠檬苦素浓度越高,胞内物质渗出越多。扫描电镜观察也发现经柠檬苦素处理的青霉外附着渗出物;产孢数量变少,孢子变形;小梗破损、凹裂;菌丝变细,变形。     

冠醚交联壳聚糖载纳米银对四种霉菌的防霉性能评价

通过最低抑菌浓度MIC值和抑菌圈法,评价了二苯并-18-冠-6冠醚交联壳聚糖载纳米银(ACTSG)对常现青霉、绳状青霉、产黄青霉、土曲霉的防霉性能。结果表明:ACTSG对四种霉菌的MIC值分别为20 mg/L,5 mg/L,10 mg/L,10 mg/L;培养5 d后,质量浓度为350 mg/L的ACTSG溶液对四种霉菌的抑菌圈直径分别为32.56mm,-(未长霉),◎(抑菌圈未形成),33.86 mm。对绳状青霉的抑制效果最强。以加脂革为试样,培养5 d后,质量浓度为300 mg/L与350 mg/L的ACTSG溶液对混合霉菌的抑菌圈直径分别为25.55 mm和31.27 mm。     

2-苯乙醇及其生物复配保鲜剂对柑橘致腐菌的抑菌作用

为研究2-苯乙醇(2-phenylethanol,2-PE)、纳他霉素、壳聚糖与壳寡糖对意大利青霉(Penicillium italicum)、指状青霉(Penicillium digitatum)、柑橘链格孢霉(Alternaria citri)和芽枝状枝孢霉(Cladosporium cladosporioides)4种主要柑橘致腐菌的抑菌活性,分别通过单一及复合生物保鲜剂的抑菌率与最低抑菌浓度测定,判断其抑菌效果。结果表明,2-PE与纳他霉素在较低的质量浓度下对4种致腐真菌的抑菌效果明显,在质量浓度分别为2.4、0.3 g/L时可完全抑制致腐菌的生长,而壳聚糖和壳寡糖的抑菌效果较弱,在质量浓度分別为7.5和12.0 g/L时亦不能完全抑制致腐菌的生长。由主效应与交互效应的方差分析得出,影响意大利青霉与芽枝状枝孢霉抑菌率的主要因子为2-苯乙醇和纳他霉素,且二者交互作用显著(0.005 < P < 0.05),2-苯乙醇与壳聚糖的交互作用不显著(P>0.05)。2-苯乙醇和纳他霉素复合使用抑菌显著(P<0.05)增效,与同一浓度的2-苯乙醇相比,复配后的抑菌效能提升60%以上。     

江香薷活性成分香芹酚对指状青霉的抑菌作用

以指状青霉菌(Penicillium digitatum)为供试菌,研究江香薷活性成分香芹酚的抑菌活性及其抑菌机理。本文采用二倍稀释法测定其最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MFC),以此评价香芹酚对指状青霉菌的抑菌效果;并通过研究香芹酚对指状青霉的菌丝形态变化、孢子萌发率、细胞膜渗透性和菌体内可溶性糖含量,阐述香芹酚对指状青霉菌的抑菌机理。结果表明:香芹酚对指状青霉菌的MIC、MFC分别为0.125 mg/mL和0.25 mg/mL;经不同浓度香芹酚处理后的指状青霉,菌丝形态发生明显改变,孢子萌发率显著降低,细胞膜渗透性增强,菌体内可溶性糖含量降低。说明香芹酚能有效抑制指状青霉菌的孢子萌发,破坏细胞膜结构完整性,内含物外渗,降低营养物质含量,影响病原菌正常生长发育,从而发挥抑菌效果。     

Nα-月桂酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐对5种果蔬腐败菌的抑菌活性

通过体外抑菌试验评价N~α-月桂酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐(Nα-lauroyl-L-arginate ethylester,LAE)的抑菌活性。以果蔬腐败菌中具有代表性的指状青霉、意大利青霉、灰葡萄孢、链格孢、胡萝卜软腐病坚固杆菌为模式菌,测定LAE对5种腐败菌的最低抑制浓度(Minimum Inhibitory Concentration,MIC),并测定LAE对霉菌的菌丝生长抑制率以及对细菌的杀菌效果。同时探究LAE和其他几种果蔬防腐剂的联合抑菌效果。结果表明:LAE对4种真菌性腐败菌灰葡萄孢、链格孢、意大利青霉、指状青霉的MIC分别为400,200,400,400μg/mL,当LAE浓度达到对各菌的MIC后,能对各霉菌保持较高的菌丝抑制率,分别为100%(16h),78.2%(48h),81.8%(48h),79.1%(48h);LAE对细菌性腐败菌胡萝卜软腐病坚固杆菌的MIC为25μg/mL,且50μg/mL的LAE能在90min内完全杀灭受试菌;LAE与尼泊金甲酯钠共同使用时对模式菌有最佳的联合抑制效果。     

柠檬醛对指状青霉菌丝体膜脂过氧化的影响

探讨柠檬醛对指状青霉菌丝体膜脂过氧化的影响。研究发现,经最小抑菌浓度（minimal inhibitoryconcentration,MIC,2.0 μL/mL）和最小杀菌浓度（minimal fungicidal concentration,MFC,4.0 μL/mL）柠檬醛处理后,指状青霉菌丝体发生扭曲变形且表面出现明显褶皱,表明细胞完整性遭到破坏。不同质量浓度柠檬醛处理指状青霉后,其胞外电导率及K＋泄漏量均显著增加,而总脂质含量降低,说明柠檬醛处理能增加指状青霉细胞膜通透性,导致细胞膜结构遭受破坏。进一步研究发现,MIC、MFC柠檬醛处理促使指状青霉总丙二醛含量、过氧化氢含量和脂氧合酶、过氧化物酶活性升高。本研究结果表明：柠檬醛处理可诱导指状青霉菌丝体发生严重的膜脂过氧化损伤,损伤细胞膜结构,从而抑制指状青霉菌丝体生长。     

侧柏叶挥发油抑制真菌实验研究

应用水蒸汽蒸馏法提取侧柏叶挥发油,通过体外抑制真菌实验比较挥发油和常用食品防腐剂山梨酸钾对3种常见真菌的抑菌活性,同时考察两者对这3种真菌的最低抑菌浓度(MIC)。结果显示,侧柏叶挥发油对上述3种常见真菌表现出明显的抑制活性,侧柏叶挥发油的抑菌作用强于山梨酸钾。侧柏叶挥发油对黑曲霉和青霉的最低抑菌浓度均为25.00 mg/mL;对根霉的最低抑制浓度为12.50 mg/mL。山梨酸钾对黑曲霉和青霉的最低抑菌浓度均大于50.00 mg/mL;对根霉的最低抑制浓度为40.00 mg/mL。由此可见,侧柏叶挥发油在天然防腐剂开发方面将有良好的应用前景。     

α-松油醇对指状青霉抑霉唑抗性菌株Pdw03的抑制作用

本研究探讨了α-松油醇对指状青霉抑霉唑抗性菌株Pdw03的抑制作用及其抑菌机理。体外实验结果表明α-松油醇抑制Pdw03生长的最小抑菌浓度（minimal inhibitory concentration,MIC）和最小杀菌浓度（minimal fungicidal concentration,MFC）均为4.00 μL/mL;体内实验研究发现MFC和5 MFC α-松油醇可明显降低接种Pdw03椪柑果实的绿霉病发病率和发病直径;碘化丙啶（propidium iodide,PI）染色实验发现,经1/2 MIC α-松油醇处理后,Pdw03的细胞膜完整性降低,麦角固醇含量显著降低（P＜0.05）,麦角固醇合成相关基因ERG9表达量显著下调（P＜0.05）。综上,α-松油醇通过抑制ERG9基因的表达影响菌株Pdw03的生长,可作为采后柑橘病害防治的有效替代品。     

脱氢乙酸钠抑制指状青霉的作用机制

脱氢乙酸钠（sodium dehydroacetate,SD）可有效抑制指状青霉（Penicillium digitatum）的生长,但其作用机制尚不清楚。本实验通过分析不同质量浓度SD（0（对照）、1/2最小抑菌质量浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）、MIC）对P. digitatum菌丝体细胞结构和功能（细胞壁、细胞膜和线粒体）的影响,研究SD的抑菌机制。结果表明,SD处理菌丝体30 min时已通过主动运输进入细胞内,且在整个处理期间能维持胞内较高的SD质量浓度;SD处理的菌丝体细胞壁荧光强度和胞外碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,AKP）活力与对照无明显差异;而碘化丙啶染色实验结果表明,SD引起菌丝体荧光强度显著增加（P＜0.05）;此外,SD处理能够降低菌丝体总脂质含量,并提升胞外pH值,表明SD处理对菌丝体细胞膜造成损伤而未对细胞壁造成损伤。此外,SD处理降低了菌丝体线粒体膜电位和能荷水平,增加了Na＋/K＋-ATPase活力,干扰了细胞能量代谢。SD对金柑果实绿霉病干预实验结果表明,SD处理有效抑制了金柑果实绿霉病的发生,且呈质量浓度依赖效应。综上,SD可通过破坏P. digitatum菌丝体细胞膜和线粒体的结构和功能发挥其抑菌活性,从而降低金柑采后绿霉病的发生。研究结果可为SD应用于金柑采后病害绿色防控提供理论依据。     

香叶醇对柑橘酸腐病菌的抑菌机制

为研究香叶醇对柑橘酸腐病菌（Geotrichum citri-aurantii）的抑菌机制,用不同质量浓度的香叶醇处理柑橘酸腐病菌,通过生理生化分析及微观结构观察研究其对酸腐病菌孢子和菌丝体的影响。结果表明,香叶醇对柑橘酸腐病菌的最小抑菌质量浓度（minimal inhibitory concentration,MIC）和最小杀菌质量浓度（minimal fungicidal concentration,MFC）均为0.500 g/L;MIC香叶醇处理酸腐病菌12 h后其孢子萌发率仅为（3.28±1.28）%,显著低于对照组的（92.17±1.88）%(P<0.05)。透射电子显微镜观察发现,香叶醇处理破坏了酸腐病菌细胞的完整性,细胞壁与细胞膜发生质壁分离,细胞器无法分辨,呈现空泡化。细胞通透性发生改变,碱性磷酸酶和核酸发生外泄,相对电导率升高,膜脂质过氧化反应增强,活性氧积累。综上所述,香叶醇通过抑制柑橘酸腐病菌孢子萌发和菌丝生长、破坏细胞结构、促进脂质过氧化和活性氧积累从而影响其正常生理功能,本实验可为有效防治柑橘酸腐病提供新思路。     

指状青霉V-ATP酶H亚基蛋白的功能

目的:通过基因干扰和过表达技术,研究V-ATP酶H亚基(V-ATPase membrane subunit H,VMAH)蛋白在柑橘绿霉病菌指状青霉生长中的生理功能,及其作为抗柑橘绿霉病药物作用靶点的可行性.方法:采用菌丝生长法和孢子萌发法,研究沉默和过表达VMAH基因对正常和胁迫条件下指状青霉细胞生长特性的影响.结果...     

乳酸菌产苯乳酸对指状青霉的抑菌活性及作用机理

为探究乳酸菌Lactobacillus plantarum CKXP13和L. plantarum CWXP24产苯乳酸的能力以及苯乳酸对柑橘绿霉病的控制效果及其抑菌机理,本实验使用高效液相色谱法测定这两株乳酸菌的苯乳酸产量,并通过研究苯乳酸处理后指状青霉的孢子存活率、菌落直径、菌丝形态、胞外电导率来探究其抑菌机理,最后以柑橘果实绿霉病干预实验探究苯乳酸对绿霉病的控制效果。结果表明,L. plantarum CKXP13、L. plantarum CWXP24均能产生苯乳酸,产量分别为42.4 mg/L和91.9 mg/L,苯乳酸质量浓度为2.5、5.0、10.0 mg/mL条件下,指状青霉的孢子存活率、菌落直径随苯乳酸质量浓度上升而显著降低（P＜0.05）,菌丝也随苯乳酸质量浓度升高出现表面粗糙、相互缠绕、形成塌陷或树瘤状凸起的情况,同时乳酸菌还能增强病原菌细胞膜的通透性,促进细胞内容物泄漏,导致病原菌死亡。果实绿霉病干预实验证明,10、20 mg/mL苯乳酸都能有效控制柑橘果实绿霉病。综上所述,苯乳酸作为天然杀菌剂在控制柑橘采后绿霉病方面具有良好的应用潜力和开发前景。     

抗菌肽Jelleine-I对采后柑橘果实绿霉病的控制作用

研究抗菌肽Jelleine-I对指状青霉（Penicillium digitatum）生长的影响及可能的作用机理,并采用损伤接种的方法评价Jelleine-I对柑橘果实采后绿霉病的控制效果。结果表明,Jelleine-I能明显抑制P. digitatum的生长,其最小抑菌浓度和最小杀菌浓度分别为6.25 mmol/L和12.5 mmol/L;同时,其能有效控制柑橘果实采后绿霉病的发生。经Jelleine-I处理后的P. digitatum菌丝体细胞膜通透性增加,细胞间隔膜损坏,细胞内绿色SYTOX Green荧光强度增加,细胞间蓝色Calcofluor White荧光减少。此外,经Jelleine-I处理后的P. digitatum菌丝体胞外电导率以及胞内核酸物质泄漏量均显著增加（P＜0.05）。综上,Jelleine-I通过破坏P. digitatum细胞膜结构完整性,引起胞内物质泄漏,加速P. digitatum死亡,从而有效控制柑橘果实采后绿霉病的发生。     

In vitro inhibition of postharvest pathogens of fruit and control of gray mold of strawberry and green mold of citrus by aureobasidin A

Aureobasidin A (AbA), an antifungal cyclic depsipeptide antibiotic produced by Aureobasidium pullulans R106, has previously been shown to be effective against a wide range of fungi and protozoa. Here we report the inhibitory effects of AbA on spore germination, germ tuber elongation and hyphal growth of five pathogenic fungi including Penicillium digitatum, P. italicum, P. expansum, Botrytis cinerea and Monilinia fructicola, which are major pathogens causing postharvest diseases of a variety of fruits. AbA inhibited five pathogenic fungi by reducing conidial germination rates, delaying conidial germination initiation, restricting elongation of germ tuber and mycelium, as well as inducing abnormal alternations of morphology of germ tubes and hyphae of these fungi. The sensitivity of these fungi to AbA was pathogen species-dependent. P. digitatum was the most sensitive and M. fructicola the least. Importantly, AbA at 50 microg/ml was effective in controlling the citrus green mold and in reducing the strawberry gray mold incidence and severity, caused by P. digitatum and B. cinerea, respectively, after artificial inoculation. AbA and/or its analogs, therefore, hold promise as relatively safe and promising fungicide candidates to control postharvest decays of fruits, because AbA targets the inositol phosphorylceramide (IPC) synthase, an enzyme essential for fungi but absent from mammals.