DNA条形码技术在肉品防欺诈鉴别中的应用

以DNA条形码技术鉴别进出口监督抽检的鱼肉等水产制品的种类来源,用以判别其与申报或产品标签是否相符.分别提取鱼肉等样品的基因组DNA,以目前国际上比较公认的动物线粒体细胞色素氧化酶COⅠ基因通用引物进行PCR扩增.PCR产物经测序分析后,将得到的扩增片段序列与Genbank数据库进行序列比对,同时提交Barcoding Life DNA条形码数据库(BOLD)进行鉴定分析.本批次监督抽检的16份鱼肉、鱼丸等水产制品中除1份样品未能成功获得鱼肉COⅠPCR扩增外,其余15份样品均顺利得到种类来源鉴定,鉴定结果约有31.25％的样品与产品标签标示不符.作为一种简单、快速、有效的分子鉴定技术,DNA条形码可以直接应用于鱼肉等动物源性食品的种类鉴定.     

DNA条形码技术鉴别市售鱼肉制品真伪

以COΙ基因和16S r RNA基因作为鱼类制品通用的DNA条形码,对超市中采集的91份冷冻鱼肉样品及经过深加工的预包装鱼肉样品进行物种鉴定。结果表明:COΙ基因和16S r RNA基因均可用于鱼类制品物种真伪的鉴别;冷冻鱼肉样品和预包装鱼肉样品与其商标的符合率分别为83.54%和58.33%;市场中存在鱼类制品商品标签标示错误、配料标注不明确等问题,为相关部门对鱼类制品的监管提供了有力的技术支持。     

鹿茸物种来源DNA条形码鉴定技术研究

目的 受经济利益驱动,鹿茸标签不符情况时有发生,损害消费者利益的同时,也给产业的发展带来了负面影响,探究鹿茸的鹿种鉴定方法为鹿茸市场监管提供技术支持。方法 本研究以线粒体细胞色素氧化酶I基因（Cytochrome oxidase I gene, COI）和线粒体细胞色素b基因（Cytochrome b gene , Cytb）为靶基因对鹿茸样品进行鉴定,并对两种基因的鉴别能力进行了比较。结果 发现COI存在无法鉴别梅花鹿和马鹿的情况,而Cytb可以将所有鹿茸鉴定至种水平。并将Cytb作为目标片段,建立了鹿茸中物种来源鉴定的DNA条形码方法。并利用该方法对市场上销售的53份鹿茸样品进行标签符合性鉴定。结论 进一步证实了使用Cytb的DNA条形码方法可以有效鉴定出市售鹿茸样品的物种来源。收集到的53份市售鹿茸样品中,仅有21份样品与标签标识物种相符;25份样品存在将低价鹿茸标为高价鹿茸的现象;7份样品缺少明确的物种信息。本研究结果可以为监管部门规范鹿茸产品标签标识提供技术支撑。     

基于DNA条形码技术的海参物种鉴定

DNA条形码技术(DNA barcoding)是一种新型高效的物种鉴别方法。本研究基于DNA条形码技术,以线粒体细胞色素氧化酶I基因(COI)和16S核糖体RNA(16S rRNA)基因作为靶基因对海参物种进行鉴别,结果表明COI基因或16S rRNA基因均能实现大部分海参的物种鉴定,部分样品需结合两个靶基因鉴定出来。将所建立的DNA条形码方法用于市售海参样品的物种鉴定,24份市售海参样品中10份市售海参样品的物种鉴定结果与标签名称相符,6份样品与标签名称不符,存在将低价海参品种标为高价海参的现象;其余8份样品的标签只有商品名但没有明确的物种信息,利用DNA条形码技术对其鉴定可得到明确的海参种名。本研究结果证实DNA条形码技术可应用于市售海参的物种鉴定,为海参的监管提供技术支撑。     

DNA条形码COI序列在常见肉类鉴别中的应用研究

为了对常见的4种肉类及相关肉制品进行掺假鉴定,判别与产品标签是否相符,本研究以COI基因为靶基因,建立了4种动物源性食品DNA条形码鉴别技术。分别提取牛、羊、猪、鸭四大物种的基因组DNA为模板,以其COI基因的保守序列区设计6对通用引物,结合文献报道及数据库提供的7对通用引物进行PCR扩增,并将测序结果提交Gen Bank数据库Blast比对,评价不同DNA条形码的检测鉴别能力。筛选出COI-A为最优序列,在4个物种中扩增效率100%。对抽检的20个批次的肉加工品样品进行检测,鉴定结果约有90%的样品与产品标签标示的成分相符。其中1个批次的牛丸制品因肉类成分含量低未扩增成功,1个批次的牛丸制品检出鸭源成分,判定掺假。DNA条形码技术快速有效,本研究筛选的COI-A序列可直接用于牛、羊、猪、鸭及其肉制品的鉴定,并为其它常见动物源性食品的种类鉴定提供一定参考依据。     

应用DNA条形码技术对深圳市售花胶鱼种鉴定与分析

目的 采用基于DNA条形码技术对深圳市售花胶鱼种进行鉴定与分析.方法 以细胞色素C氧化酶Ⅰ(cytochrome c oxidase,COⅠ)基因为目标基因,应用DNA条形码技术鉴别深圳各药房和超市零售花胶的种类来源.结果 94份花胶样品均扩增出特异性条带.根据BOLD系统鉴定结果统计,深圳地区市售花胶94份样品中,按...     

市场零售水产品（鱼类）真实属性情况分析与监管建议

目的 对市场零售水产品（鱼类）进行物种鉴定,调查分析其真实属性。方法 以COⅠ基因为目标基因,应用DNA条形码技术鉴别深圳零售渠道水产品（鱼类）的品种来源。结果 根据BOLD系统鉴定结果统计,120份深圳地区市场零售水产品（鱼类）样品中,存在以异鳞蛇鲭冒充金枪鱼的现象,部分水产品类别范畴不清晰,虹鳟等钩吻鲑属鱼类是否明确归入“三文鱼”类存在争议。结论 目前深圳市场零售水产品（鱼类）存在鱼种替代或标签不合规现象,建议加强监管、持续规范市场秩序。     

应用DNA条形码技术鉴定烤鱼片、鱼干中河鲀鱼鱼种

应用DNA条形码技术对北京和厦门市市售烤鱼片、鱼干中河鲀鱼成分进行鉴定。方法 以烤鱼片、鱼干中提取基因组DNA为模板,利用针对河鲀鱼细胞色素氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因的特异性引物进行PCR扩增,将扩增产物克隆并测定线粒体COⅠ基因序列。将测序结果与GenBank中已有河鲀鱼的DNA序列进行BLAST比对,并且构建分子进化树。结果 本研究27份样品中有15份能扩增出特异性条带。通过BLAST比对和进化树分析,将15份样品归属到不同的河鲀鱼鱼种中。结论 北京和厦门市市售烤鱼片和鱼干中存在混入河鲀鱼的现象,应加强监管和规范产品的加工程序以避免中毒事件发生。     

DNA条形码技术对鱼子酱物种溯源及鉴定

为探讨DNA条形码技术在鱼子酱物种鉴定中的适用性，利用细胞色素b（Cytochrome b，Cyt b）和细胞色素氧化酶I亚单位I（Cytochrome Oxidase I，COI）作为DNA条形码对鱼子酱样品进行DNA提取、聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）、测序、利用NCBI网站和BOLD鉴定系统进行基因比较分析，构建系统发育树，鉴定鱼子酱物种，对我国鱼子酱产品物种标签符合性情况进行检查。购买的40份样品，一致性鲟鱼物种基因序列相似性均在99%以上，涉及5个鲟鱼种，其中杂交种占比75%、西伯利亚鲟、施氏鲟、欧鳇、俄罗斯鲟占25%。说明Cyt b、COI作为DNA条形码可以对鱼子酱进行物种鉴定，检测的鱼子酱产品均为鲟鱼子酱，无造假，但是45%产品标签物种替代或物种标识不清。加强对产品物种标识重视及鉴定技术的开发，有助于我国鱼子酱对外贸易发展，保障我国鲟鱼产业可持续性健康发展。     

基于DNA条形码技术对常见石首鱼科鱼胶的物种鉴定

摘　要：目的　运用DNA条形码技术对常见石首鱼鱼胶进行物种鉴定。方法　通过对26份鱼胶样品基因组DNA提取，PCR扩增COI基因、测序，用BOLD物种鉴定系统，与数据库中已有鱼类序列进行比对分析，鉴定出各鱼胶的物种；根据Kimura双参数模型计算样品序列遗传距离，并将所得序列构建NJ和MP系统发育树，进行聚类分析。结果　26份鱼胶样品通过鉴定引物“Fish-F”、“Fish-R”均可实现扩增，条带清晰单一，扩增和测序成功率均为100%；BOLD鉴定结果显示，26份鱼胶样品中23份能够确定物种来源（相似性达98%以上），包括石首鱼科12属15种鱼类，且多数为外来物种，另外3份鱼胶可推测其近缘物种。此外，系统发育树聚类分析结果与物种鉴定结果一致。结论　目前石首鱼类鱼胶来源物种较多，且多为外来基原鱼种。DNA条形码技术与BOLD鉴定系统相结合，可对大部分鱼胶进行准确的物种鉴定。     

Detection and identification of marine fish mislabeling in Guangzhou's supermarkets and sushi restaurants using DNA barcoding

In this study, DNA barcoding was applied to identify the distinct species of fish products in Guangzhou supermarkets and sushi restaurants in order to confirm whether products were correctly labeled. Samples were analyzed using mitochondrial cytochrome C oxidase subunit I (CO I) gene as the target. Our results showed that the CO I gene of all 139 samples examined was successfully amplified by PCR. When sequenced, 30 samples (21.58%) were mislabeled as the wrong species, 11 samples had insufficient information provided on the label to determine if the labeling was correct (7.91%), and four samples failed sequencing (2.88%). We also found that the use of proper labels for fish products in sushi restaurants was higher than that in supermarkets. As a simple, rapid, and efficient technology, DNA barcoding can be widely used for species identification of fish products. Our work shows that regulation of the labeling of fish products, as we evaluated in Guangzhou and other markets in China, is needed on a global scale.     

高通量二代测序基因条码技术在油料作物种类鉴别中的应用

对高通量二代测序基因条码技术在油料作物种类鉴别中的应用进行探索。采用Ion Torrent PGMTM测序技术,分别对橄榄、花生、大豆、油葵、玉米等14 种油料作物和小麦、大米的叶绿体核酮糖二磷酸羧化酶/氧化酶大亚基（ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase large subunit,rbcL）基因246 bp聚合酶链式反应（polymerasechain reaction,PCR）产物混合物,及上述作物DNA混合液扩增得到的rbcL基因片段进行测序。结果表明,除小麦外,所有其他作物成分均获得了鉴定。其中,PCR产物混合物中每种作物成分的测序读数数量比例和该成分PCR产物在总产物中的比例接近,说明该技术可以用于定量分析。实验结果初步证实了该技术对混合样品中各作物种类鉴别的准确性,并具有检测效率、流程简便的特点,有望在未来成为食用油标识符合性查验的有力工具。     

河豚鱼16S rRNA基因部分DNA序列分析及应用

应用16S rRNA基因聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）扩增通用引物,对3 属13 种福建省搜集的河豚鱼样品与9 个未知物种的河豚鱼样品的16S rRNA基因序列中的部分片段进行PCR扩增与脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid,DNA）碱基序列测定,各物种序列长度在611～614 bp之间。应用DNAMAN V6软件进行样品间DNA序列同源性比对分析,建立样品间系统关系同源树。供试13 个样品被划分为4 个类群组,群间的同源率为87%,群内同源率为94%～100%。根据序列同源性分析结果,9 个未知种名的样品被归类到3 个类群组中,推测9 个未知种名的样品为东方鲀属或腹刺鲀属。探讨了16S rRNA基因部分DNA序列测试及同源性分析技术在河豚鱼种属鉴别中应用的可能性。     

DNA条形码技术在食品鉴定中的应用

近年来,国内外不断出现有关食品掺假造假等食品安全问题的报道。产品与标签不符,肉类掺假,以次充好等商业欺诈问题影响着人们的利益与健康。食品掺假造假问题越来越受到重视,而传统的检测方法已不能满足食品鉴定的需要。DNA条形码技术是从分子水平上对食品进行鉴定,弥补了传统鉴定方法的不足,其准确、高效、简单的特点为食品鉴定领域带来了新的革命。本文在简要介绍DNA条形码研究现状的基础上,主要总结目前国内外关于DNA条形码技术在食品鉴定中的应用情况,包括在渔类产品、肉类产品、可食用植物、加工食品鉴定中的应用,最后讨论DNA条形码技术在食品鉴定中的优缺点以及发展趋势。     

线粒体细胞色素b基因在鱼唇制品物种鉴定中适用性的研究

目的 探讨线粒体细胞色素b基因(Cytochrome b, Cyt b)在鱼唇物种鉴定的适用性,为鲨鱼类物种鉴定增加新的DNA条形码。方法 利用Cyt b作为DNA条形码对从全国31个城市购买252份鱼唇样品进行PCR扩增,测序、利用BLAST功能进行近源种同源基因比较分析,鉴定鱼唇制品鱼种,对鲨鱼物种进行濒危评价分析。结果 成功扩增出250个样品,找到的一致性鲨鱼物种基因序列相似性均在99%以上。涉及8个鲨鱼种,最多样品为大青鲨,占样品65.5%,其余还有镰形真鲨、路氏双髻鲨、锤头双髻鲨、灰鲭鲨、远洋白鳍鲨、沙拉真鲨和黑边鳍真鲨。结论 应用Cyt b作为DNA条形码对鲨鱼种鉴定结果与COI DNA条形码结果一致,在鲨鱼种鉴定时可以使用Cyt b 基因及COI基因联合鉴定条形码,为深加工海产品物种鉴定提供更多的技术支撑。     

PCR-DGGE法分析西藏传统发酵乳制品中乳酸菌的多样性

目的：运用聚合酶链式反应和变性梯度凝胶电泳（polymerase chain reaction- denatured gradient gelelectrophoresis,PCR-DGGE）技术分析西藏传统发酵乳制品中乳酸菌的生物多样性。方法：从西藏8个牧区采集19份样品,提取样品总DNA,用巢式和降落PCR扩增16S rRNA的V3区段,对扩增产物做变性梯度凝胶电泳,用NTsys 2.10e软件分析条带的相似性,切胶回收条带并测序,鉴定菌种并构建系统进化树、分析优势菌种。结果：19份样品中的乳酸菌菌群组成包括Lactobacillus paracasei、Lactobacillus helveticus、Lactobacillus fermentum、Lactobacillus crispatus、Lactobacillus delbrueckii、Lactobacillus buchneri、Lactococcus raffinolactis、Leuconostocmesenteroide、Lactobacillus plantarum、Pediococcus pentosaceus、Lactococcus lactis、Streptococcus thermophilus。综合样品和牧区的乳酸菌分布情况,确定Lactobacillus delbrueckii为优势菌种。结论：PCR-DGGE技术能够有效分析西藏地区发酵乳制品中乳酸菌的多样性。     

DNA barcoding reveals high substitution rate and mislabeling in croaker fillets (Sciaenidae) marketed in Brazil: The case of “pescada branca” (Cynoscion leiarchus and Plagioscion squamosissimus)

The removal of morphological features during fish processing hinders identification to the species level, increasing the chances of species substitution and the mislabeling of marketed products. We used DNA barcoding to assess whether species substitutions occur in croaker (Sciaenidae) fillets labeled as “pescada branca” sold in the Brazilian Amazon, where two species are known under this vernacular name (Cynoscion leiarchus and Plagioscion squamosissimus). A 577-bp cytochrome C oxidase subunit I (COI) sequence was obtained from 137 fillets and compared with the sequences of whole Sciaenidae fish that were identified based on their morphology and the reference sequences of the BOLD and GenBank public databases. DNA barcoding was able to identify 90% of the samples analyzed to the species level, and the results showed a high rate of species substitution in the fillets labeled as “pescada branca”. The substitution rate was 100% if using the criterion that the fillets should be C. leiarchus and 76.6% if using the criterion that they should be P. squamosissimus. Additionally, the results show that “pescada branca” was replaced in most cases by species of lower commercial value, which clearly demonstrates economic fraud aimed at increased profits. Our data confirm that DNA barcoding is a sensitive and reliable tool that can be applied to authenticate processed fish.     

多基因DNA条形码鉴定6 个鳗鱼物种

建立6?种鳗鱼的物种多基因DNA条形码精准鉴定方法。以鳗鱼DNA为模板,采用3?对通用引物对6?种鳗鱼的3?个基因（16S rRNA、Cyt b、COⅠ）部分DNA片段进行聚合酶链式反应扩增、测序,结果6?种鳗鱼各获得3?条16S rDNA（638～643?bp）、Cyt?b（464～466?bp）、COⅠ（705～707?bp）基因部分DNA序列,从中选取各物种序列同源的片段设计3 对新引物对6 种鳗鱼的16S rRNA、Cyt b、COⅠ基因部分DNA片段进行PCR扩增,其产物大小分别为504～507、400、609?bp,再从各片段中筛选出具有6?种鳗鱼物种特异性强的、碱基数分别为262、280、300?bp的3?条DNA片段序列,作为6?种鳗鱼物种的3?个基因的标准DNA条形码,应用DNAMAN?V6软件进行同源性分析,并通过GenBank数据库的比对验证,制定了供检测实践用的同源率判别指标,建立鳗鱼物种的多基因条形码检测方法。应用该方法对30?个待检鳗鱼样品进行检测,结果表明,各样品基于3?个基因DNA条形码的比对,符合同源率指标,物种判别结果互相吻合,从而精准判别样品的所属物种。该方法稳定、精准、易于操作,可应用于6?种鳗鱼的物种鉴定,值得推广。