重金属铜的单抗的制备及免疫学检测方法的建立

目的:制备针对重金属铜离子的单克隆抗体,建立Cu2+的间接和直接竞争ELISA检测法,实现对Cu2+的快速定量测定。方法:利用双功能螯合剂p-SCN-Bn-NOTA将Cu2+分别与载体蛋白BSA和OVA偶联,制备免疫原和检测原;用免疫原免疫Balb/c小鼠;细胞融合后,通过间接及间接竞争ELISA筛选稳定分泌抗重金属铜的单克隆抗体的杂交瘤细胞株;制备腹水型单抗并进行鉴定;建立间接竞争ELISA和直接竞争ELISA。结果:成功筛选出4株稳定分泌抗重金属铜的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中G8制备出腹水型单抗效价为5×105倍,抗体亚型为Ig G1型,轻链类型为κ型,特异性检测结果表明该单抗对NOTA及Mn2+、Pb2+、Cd2+、Zn2+等其金属离子交叉反应率远低于2%,与Mg2+交叉反应率小于8%,表明单克隆抗体G8对重金属Cu2+具有很强的特异性,不会干扰结果的准确性;建立间接竞争ELISA的检测灵敏度为29.8 ng/m L,检测限为2.4 ng/m L,线性范围为4.5~196.7 ng/m L;直接竞争ELISA检测法的检测灵敏度为12.89 ng/m L,检测限为0.88 ng/m L,检测范围为1.72~96.58 ng/m L。结论:成功制备出抗重金属铜离子的单克隆抗体,并建立了间接竞争ELISA和直接竞争ELISA。     

沙丁胺醇铕标记时间分辨荧光免疫分析方法的建立

基于抗沙丁胺醇(SAL)的单克隆抗体,初步建立了检测SAL的高灵敏度的时间分辨直接竞争免疫分析法(CDTRFIA)。采用辛酸-硫酸铵纯化抗SAL杂交瘤细胞株腹水单克隆抗体,用稀土离子Eu3+偶联物进行标记,制备铕标抗体;通过合成SAL-SUC半抗原并与卵清蛋白偶联获得SAL-OVA包被抗原:采用直接竞争的方式,游离SAL和固相SAL-OVA包被原共同竞争有限的铕标SAL单抗,初步建立SAL时间分辨免疫分析方法。研究发现,优化的TRFIA半抑制量IC_(50)为1.6 ng/mL,检测范围为0.39 ng/m L~12.77 ng/mL,最低检测限为0.136 ng/mL。通过对其他常用β-兴奋剂进行交叉反应分析,研究发现建立的TRFIA方法特异选择性高,与克伦特罗的交叉率较小(2.29%),而与莱克多巴胺没有交叉。     

SM_2单克隆抗体的初步应用研究

以磺胺二甲嘧啶(SM2)-人血清白蛋白(HSA)为免疫抗原和SM2-卵清白蛋白(OVA)为包被抗原。制备SM2单克隆抗体;利用杂交瘤技术和有限稀释法经亚克隆,得到三株特异性稳定分泌SM2抗体的杂交瘤细胞,与其他四种磺胺药和两种载体蛋白HSA、OVA均无交叉反应。利用本试验制备的单克隆抗体初步建立了动物组织中检测SM2的间接竞争ELISA方法。最低检出限为9.95 ng/mL,灵敏度为47.12 ng/mL。     

大豆Kunitz胰蛋白酶抑制因子单克隆抗体的制备与鉴定

为制备免疫学特性良好的大豆Kunitz胰蛋白酶抑制因子(Kunitz trypsin inhibitor,KTI)单克隆抗体,以50μg/只的免疫剂量将KTI免疫BALB/c小鼠,利用间接ELISA和间接竞争ELISA鉴定多抗血清效价和敏感性,选择血清效价和敏感性较优的小鼠进行细胞融合,多次筛选得到稳定分泌KTI单克隆抗体(Monoclonal antibody,mAb)的杂交瘤细胞株,采用体内诱生腹水法制备mAb并对其免疫学特性进行鉴定。结果表明,1号小鼠经免疫后效价最高且敏感性最好,半数抑制浓度(IC50)为157.33ng/mL,经细胞融合筛选得到4E6-E9阳性杂交瘤细胞株,所制备的抗体效价达到11 638 400,亚型为IgG1型,亲和常数为1.45×108 L/mol,IC50为28.39ng/mL,且特异性强。说明试验所制备的mAb免疫学特性良好,能够为建立灵敏、特异的KTI免疫学检测方法提供良好的抗体保障。     

小麦球蛋白单克隆和多克隆抗体制备及建立酶联免疫吸附法快速检测技术

目的建立小麦球蛋白的ELISA检测技术,用于蛋白质掺假以及过敏原成分的快速检测。方法从麦胚粉中提取球蛋白,抗原免疫Balb/c小鼠进行4次免疫后,通过脾脏细胞杂交瘤技术及间接ELISA筛选制备单克隆抗体,同时制备兔抗小麦球蛋白的多克隆抗体。通过棋盘滴定法,初步确定单克隆抗体和多克隆抗体的最佳工作浓度,建立双抗夹心ELISA。结果通过免疫和杂交瘤技术获得了抗小麦球蛋白的单克隆抗体,纯化后抗体的效价均达到1:107,通过免疫兔制备的多克隆抗体经纯化后效价在1:2.4×105左右,所建立的双抗体夹心ELISA方法最低检测限为10 ng/m L,与其他物种的蛋白不发生交叉反应。结论本文建立的双抗体夹心ELISA方法具有良好的特异性和灵敏度,为建立乳品中小麦成分掺假及过敏原成分快速检测提供理论依据。     

特布他林残留的酶联免疫检测方法的建立

采用自主制备的特布他林特异性抗体建立特布他林残留的间接竞争酶联免疫(ELISA)检测方法,对该检测体系的灵敏度、准确度、精密度、特异性进行测定,并将该检测方法与高效液相色谱(HPLC)法进行对比分析。结果表明：特布他林残留检测体系的检测范围为1～100ng/mL,灵敏度为0.47ng/mL,检测限为1ng/mL,回收率80%～99%,与盐酸克伦特罗、硫酸沙丁胺醇的交叉反应率分别为94.9%、93.9%,与盐酸莱克多巴胺及肾上腺素的交叉反应率小于0.01%。采用HPLC 法进行沙丁胺醇残留的检测时,其检测范围为10～200μg/mL,检测限为1μg/mL,回收率为79.2%～94.8%。ELISA 法与HPLC 法相比,灵敏度较高、特异性强、检测结果准确度相近,但在检测结果稳定性方面逊于HPLC 法。     

间接竞争ELISA检测核桃制品中核桃蛋白含量

通过核桃蛋白组分分析,确定核桃丰度蛋白。以其作为抗原免疫小鼠,制备可特异性识别核桃蛋白的单克隆抗体,建立间接竞争ELISA检测方法。筛选出一株能稳定分泌抗核桃蛋白的杂交瘤细胞株HT-1,对间接竞争ELISA方法的反应条件进行优化后,建立了检测核桃蛋白的间接竞争ELISA方法,核桃蛋白的检测线性范围在4.6~64.2μg/mL,IC_(50)为17.2μg/mL,最低检测限为0.67μg/mL。抗体特异性较好,与其他的植物蛋白没有交叉反应。该方法适用于检测核桃制品中的核桃蛋白含量。     

莱克多巴胺抗体的制备与评价

本文以RAC-linker-BSA为免疫抗原获得了莱克多巴胺的多克隆抗体,用混合酸酐法合成包被抗原,建立了莱克多巴胺的间接竞争酶联免疫检测方法(ELISA),并对抗体性质进行了评价.结果表明,制备出的莱克多巴胺抗体具有较高的灵敏度,IC50为0.9 ng/mL,检出限(IC15)为0.1 ng/mL,低于同类文献的报道结果;除了与多巴酚丁胺的交叉反应为7.5 %外,与克伦特罗、沙丁胺醇、特步他林、异丙肾上腺素和异奎胍均无交叉现象,说明抗体特异性较高;此外,抗体具有很好的稳定性,可在4 ℃冰箱中储存半年以上.为建立酶联免疫快速检测方法,实现对莱克多巴胺的有效监控奠定了良好的基础.     

克伦特罗和沙丁胺醇多残留(二合一)单抗体的制备及初步鉴定

用克伦特罗人工免疫原免疫Balb/c小鼠,利用细胞融合技术筛选抗克伦特罗单克隆抗体杂交瘤细胞,体内诱生腹水法制备单克隆抗体,并鉴定其免疫学特性.鉴定结果表明,筛选出3株杂交瘤细胞。与沙丁胺醇的交叉反应率很高,而与其他10种β-受体激动剂药的交叉反应性均低于50%,这为克伦特罗和沙丁胺醇多残留(二合一)试剂盒的研制奠定了基础。     

特布他林残留酶联免疫检测方法的建立

采用自主制备的特布他林特异性抗体建立特布他林残留的间接竞争酶联免疫(ELISA)检测方法,对该检测体系的灵敏度、准确度、精密度、特异性进行测定,并将该检测方法与高效液相色谱(HPLC)法进行对比分析。结果表明:特布他林残留检测体系的检测范围为1～100ng/mL,灵敏度为0.47ng/mL,检测限为1ng/mL,回收率80%～99%,与盐酸克伦特罗、硫酸沙丁胺醇的交叉反应率分别为94.9%、93.9%,与盐酸莱克多巴胺及肾上腺素的交叉反应率小于0.01%。采用HPLC法进行沙丁胺醇残留的检测时,其检测范围为10～200μg/mL,检测限为1μg/mL,回收率为79.2%～94.8%。ELISA法与HPLC法相比,灵敏度较高、特异性强、检测结果准确度相近,但在检测结果稳定性方面逊于HPLC法。     

曲虫治理效果分析

通过对曲虫治理应用研究效果的分析 ,结果表明 :质量效果提高 7% ,糖化力效果提高 80 % ,综合效果提高 92 7%。     

The basis streamlines of activities of Department of Preventive Medicine of RAMS

The article gives a brief account of the main streamlines and scope of scientific activities of Department of Preventive Medicine of RAMS for the recent 10 years.     

葵花籽油中酸价测量结果的不确定度评价

目的 分析食用油中酸价测定的不确定度来源并建立不确定度评定方法, 为检验数据的可靠性和准确性提供参考。方法 依据GB 5009.229-2016《食品安全国家标准 食品中酸价的测定》和JJF 1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》建立数学模型, 计算各变量的不确定度, 最终计算扩展不确定度。结果 结果显示, 样品中酸价的扩展不确定度为U=1.764×10?3 mg/g, 样品中酸价含量为(0.16±0.002) mg/g(置信水平95%, 包含因子k=2)。结论 在测定过程中, 测量重复性对总的不确定度影响最大, 其次是滴定管的体积。     

两种脂肪酸聚甘油酯(PGE)的性质比较

脂肪酸聚甘油酯(Polyglycerol esters of fatty acids,简写为PGE)在常温下有半固态和固态两种存在状态,本文通过对分别添加这两种PGE的软冰淇淋基料进行粘度、pH、粒径分析和垂直扫描分散稳定性分析(Turbiscan),发现半固态PGE的添加量为0.2%时,乳状液的粘度最低,粒径最小,稳定性最好;固态PGE的添加量为0.4%时.乳状液的粘度最低,粒径最小.通过比较发现,两种PGE对基料的影响有很大差别:半固态PGE能使乳状液的粒子更小,并能有效延长乳状液的稳定性;而固态PGE由于其熔点较高,可以促进脂肪结晶.     

有梭织机稀密路织疵成因分析

从有梭织机打纬过程中织机构件的位置和状况对纬纱之间距离的影响出发,推导出纬向密度计算公式,直观分析了影响纬向密度的各种因素,提出了为减少稀密路织疵在国产老织机上采取的几项改进措施：采用弹簧回综、机外送经、电子驱动、导布辊加压等装置。     

啤酒小麦木聚糖酶酶学性质的研究

通过DNS法测定小麦木聚糖酶酶促反应的最适条件。结果表明:小麦木聚糖酶酶促反应的最适温度是50℃,最适pH是5.5~6.0,最适底物浓度是1.0000%,最适底物与酶液用量比例为9/1,最适反应时间为5-9min。     

酶水解猪皮胶原的色谱分离研究

比较详细地描述了用现代色谱分离的试验方法.用本实验室自制的弱阳离子交换树脂将猪皮胶原的酶水解产物成功地分离为5个组分,并详细讨论了影响分离效果的各种因素,确定了最佳分离条件.     

分离高温盐的工艺条件研究

文章利用不同温度下Na ,K ∥Cl-,SO2 -4 —H2 O四元体系相图 ,对通过物理方法分离高温盐中一水硫酸镁和氯化钠的工艺条件进行了分析。得出当循环母液和高温盐配成的浆料温度超过 5 5℃ ,浆料液体中氯化镁达到一定浓度时 ,才能分离出纯净的一水硫酸镁和氯化钠。     

核苷酸磷酸基团保护的研究

将谷氨酸钠、5′－磷酸鸟苷按1：1混合后，添加柠檬酸，然后用硬脂酸包覆，能够有效地保护核苷酸5′－位上的磷酸基团。其中，（5′－磷酸鸟苷＋谷氨酸钠）：柠檬酸：硬脂酸＝30.3:9.1:60.6时，5′－磷酸鸟苷的残存率可达93％。