酶水解对大豆异黄酮粗提物中苷元含量的影响

采用β-葡萄糖苷酶水解的方法将大豆异黄酮糖苷转化为苷元,以染料木素和大豆苷元含量为指标,通过单因素试验对水解过程中的不同影响因素进行了考察。以染料木素含量为指标,运用正交试验优化了β-葡萄糖苷酶水解大豆异黄酮的工艺条件为反应温度40℃、水解时间1.5h、水解介质pH4.5、水解底物浓度10mg/mL,在此条件下,水解得到的大豆异黄酮苷元中染料木素的含量可达到22.91%。     

"Amano"β-糖苷酶水解大豆异黄酮技术的研究

研究了"Amano"β-糖苷酶水解大豆异黄酮技术工艺.通过单因素试验对水解过程中的不同影响因素进行了考察.运用正交试验优化了"Amano"β-糖苷酶水解大豆异黄酮的反应条件.该酶水解黄豆苷的最佳条件为:水解时间140min,加酶液浓度33μg/ml,pH4.5,温度50℃;水解染料木苷的最佳条件为:水解时间140min,加酶液浓度33μg/ml,pH4.5,温度60℃.验证实验证实用最佳反应条件水解大豆异黄酮可使黄豆苷的水解率达到 98.2%,染料木苷的水解率达到94.2%.     

高活性大豆异黄酮糖苷酶的分离原料筛选、纯化及性质研究

通过对32种植物β-葡萄糖苷酶水解染料木苷的活性比较,发现鹰嘴豆β-葡萄糖苷酶具有4.19U/mg的大豆异黄酮糖苷水解酶活性.该酶经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Cellulose-52离子交换、Sephadex G-100凝胶层析纯化,纯化了10.1倍,收率为7.2%;SDS-PAGE和Sephadex G-100凝胶层析结果表明,该酶的分子量为73.2kD,含两个亚基;该酶的最适反应温度为45℃;最适pH6.0;当以染料木苷和大豆苷为底物时该酶的米氏常数分别为11.0和19.0μg/ml.温度在30～45℃、pH值在4.5～6.5范围内该酶较稳定;Ag+、Hg2+和D-葡萄糖酸内酯对该酶有强烈抑制作用.该酶能水解染料木苷和大豆苷,但不能水解纤维二糖和α-乳糖.     

乳酸菌β-葡萄糖苷酶水解大豆异黄酮的研究

利用乳酸菌液态发酵得到一种高活性的大豆异黄酮水解酶--乳酸菌β-葡萄糖苷酶,通过单因素试验及正交试验优化了乳酸菌β-葡萄糖苷酶水解大豆异黄酮的条件.正交试验结果显示,当加酶量为25 μg/mL,水解温度50℃,水解时间2.0 h,pH 6.0时,黄豆苷水解率可达96.51%;在加酶量为25 μg/mL,水解温度40℃,水解时间2.0 h,pH 5.5时,染料木苷水解率为92.36%.     

丹贝异黄酮生物活性增强的机理研究

以少孢根霉RT-3孢子接种在含高浓度的大豆异黄酮提取物制成的发酵基质中，发酵36h后大豆异黄酮被部分水解成相应的苷元．用从丹贝中分离的β-葡萄糖苷酶与标准品染料木素糖苷和大豆苷元的糖苷作用10min，染料木素糖苷和大豆苷元的糖苷被水解成相应的苷元．结果表明：丹贝异黄酮生物活性增强是发酵剂RT-3孢子分泌的β-葡萄糖苷酶将异黄酮由糖苷水解成苷元，而苷元比糖苷有更强的活性．     

大豆β-葡萄糖苷酶水解大豆异黄酮糖苷的研究

本文研究了大豆β-葡萄糖苷酶的提取、酶学性质以及其水解大豆异黄酮糖苷能力.该酶反应的最佳温度为45℃,最佳pH为5.00;在pH值为5.00～7.00时和低于40℃较稳定;70℃时酶活性基本全部丧失.初步纯化的大豆β-葡萄糖苷酶具有较高的水解大豆异黄酮糖苷能力.     

β-葡萄糖苷酶对豆奶及豆奶粉中大豆异黄酮糖苷化合物的转化作用研究

对利用β-葡萄糖苷酶将豆奶及豆奶粉中生物有效性较低的异黄酮糖苷化合物转化为高活性的异黄酮糖苷配基化合物进行了试验研究。研究了不同浓度β-葡萄糖苷酶对豆奶及豆奶粉中大豆苷、乙酰大豆苷和丙二酰大豆苷的降解转化作用。结果表明,在β-葡萄糖苷酶浓度1.5U/mL、pH5.5、45℃保温1h的条件下,豆奶及豆奶粉中大豆苷、乙酰大豆苷和丙二酰大豆苷的总量分别降低了89.1%和89.5%,大豆黄素的含量分别增加了57.2和78.7倍;黄豆苷、乙酰黄豆苷和丙二酰黄豆苷的总量分别降低了93.2%和87.7%,黄豆黄素的含量分别增加了4.2和11.7倍;染料木苷、乙酰染料木苷和丙二酰染料木苷的总量分别降低了93.8%和82.4%,染料木黄酮的含量分别增加了5.2和23.0倍。试验结论:利用β-葡萄糖苷酶能够将豆奶及豆奶粉中生物有效性较低的异黄酮糖苷化合物高效转化为高活性的异黄酮糖苷配基化合物。     

酶解制备苷元型大豆异黄酮

以大豆异黄酮糖苷为原料,酶解制备苷元型大豆异黄酮。以水解率和苷元得率为指标对几种来源的β-葡萄糖苷酶、β-半乳糖苷酶、纤维素酶进行筛选,确定最适酶解用酶。通过单因素实验对酶添加量、底物质量浓度、酶解温度、pH、酶解时间进行优化。结果表明,最佳酶解工艺条件为：采用β-葡萄糖苷酶（300 U/g）,酶添加量7%,底物质量浓度1.6 mg/mL,酶解温度56 ℃,pH 4.8,酶解时间6 h。在最佳工艺条件下,大豆异黄酮糖苷的水解率及苷元得率分别达到96.84%和99.74%。     

裂褶菌发酵转化大豆异黄酮的条件优化

利用裂褶菌发酵β–葡萄糖苷酶将大豆异黄酮糖苷转化为苷元,研究底物浓度、pH、温度和时间对糖苷转化率的影响,采用正交试验优化转化条件。结果显示:最佳条件为底物浓度15g/100mL、温度50℃、转化时间20h,此时测得大豆苷和染料木苷的转化率分别为99.14%和98.57%。     

响应面法优化酶法水解大豆异黄酮的条件

在单因素试验基础上,利用响应面分析(response surface analysis,RSA)法中Plackett-Burman和Box-Behnken进行设计,得出β-葡萄糖苷酶水解大豆异黄酮物质的最佳条件为:水解时间55 min,水解温度57℃,pH3.5.在最佳条件下,用β-葡萄糖苷酶水解大豆异黄酮得到大豆苷元,其得率达到39.05%.     

酶法提高豆浆中大豆异黄酮苷元浓度的工艺研究

试验利用黑曲霉β-葡萄糖苷酶处对豆浆进行水解处理,将结合型大豆异黄酮糖苷转化为游离型苷元。选大豆为原料,以单因素实验为基础,考察加酶量、反应时间、反应温度三个因素对豆浆中大豆异黄酮糖苷水解的影响;根据Box-Behnken实验设计原理,选取不同加酶量、反应时间、反应温度3因素3水平进行中心组合实验,建立豆浆中大豆异黄酮苷元含量的多项式回归预测模型,确定了最佳工艺参数。结果表明,最佳水解工艺条件为:加酶量0.028 U/5 mL,反应时间1.64 h,反应温度53.82℃,在此条件下制得豆浆大豆异黄酮苷元含量明显提高。测得大豆苷元(De)、黄豆黄素(Gle)、染料木素(Ge)的浓度分别为39.434±1.410μg/m L、4.626±0.462μg/m L、45.851±2.098μg/m L。而大豆苷元(De、)黄豆黄素(Gle)、染料木素(Ge)浓度的响应面预测值分别为40.905μg/m L、4.263μg/m L、48.441μg/m L,测定值与模拟值接近。优化后的工艺条件合理、可行,能明显提高豆浆中大豆异黄酮苷元的含量。     

交联β-葡萄糖苷酶聚集体的制备及其性质

交联酶聚集体法是一种新型的无载体酶固定化方法。本实验用该法固定化黑曲霉β-葡萄糖苷酶,对其制备条件、结构特征、酶学性质进行了研究。结果表明,β-葡萄糖苷酶酶液在冰水浴中经90%的硫酸铵沉淀30min后,以5%戊二醛水溶液进行酶聚集体交联反应,可获得较高活性的交联酶聚集体,酶活回收率达75%,对对-硝基苯基-β-D-葡萄糖苷作用的最适温度、最适pH值和Km值分别为60℃、pH4.0和4.61×10-3mol/L,与游离酶相比,表现更高的底物亲和力。将其用于大豆异黄酮活性苷元染料木素的合成,40min内对染料木苷转化率达到66%。     

大豆异黄酮水解物制备及放大实验

用发酵黑曲霉得到的β-葡萄糖苷酶水解40%的大豆异黄酮粉,通过正交实验确定最佳水解条件为:加酶量100u,底物浓度20mg/mL,50℃,水解1h。将水解液降温至4℃,4000r/min离心分离30min,离心后沉淀物在-18℃下预冻,于-40℃冷冻干燥,得到固态大豆异黄酮苷元,经检测苷元转化率90.12%、大豆皂苷3.87%、大豆异黄酮94.36%、大豆苷元43.45%、染料木素46.26%。放大实验结果:苷元转化率78.56%、大豆皂苷4.93%、大豆异黄酮88.97%、大豆苷元36.47%、染料木素38.81%。     

大豆异黄酮水解物的制备

利用黑曲霉产酶发酵培养基制备β-葡萄糖苷酶,再利用β-葡萄糖苷酶水解大豆异黄酮粉制备异黄酮苷元。研究结果表明,较优产酶发酵培养基的C/N为6∶4,加水量1.4倍,培养基中不添加诱导物。水解500 mg40%大豆异黄酮粉的最佳条件为:加酶量100 U,水解温度50℃,水解时间1 h。     

大豆异黄酮糖苷水解工艺的研究

通过正交试验得到了大豆异黄酮糖苷水解为大豆异黄酮苷元的最佳工艺条件。最佳酸法水解工艺条件为:盐酸浓度3 mol/L,水解温度80℃,水解时间180 min,酸法水解率为81.31%;最佳酶法水解工艺条件为:pH 6.0,酶解温度38℃,酶解时间90 min,加酶量为0.9 mg(50 mg糖苷型大豆异黄酮提取物),酶法水解率为82.54%。酶法水解的效果优于酸法水解的效果。     

酶法水解大豆异黄酮

利用Absidiasp R菌株 ,通过液体发酵 ,得到了一种高活性的大豆异黄酮糖苷水解酶 ,该酶水解糖苷型大豆异黄酮的最适底物浓度为 7 5mg/mL ;最适反应时间为 1 5h ;该酶在温度为 2 0～5 0℃、pH为 4 0～ 7 0范围内相对稳定 ,最适酶解反应温度为 40℃ ,最适pH值为 5 0 ;金属离子对该酶活力的影响不显著 ,其中Co2 +、Zn2 +对该酶有激活作用 ,Ag+、Cu2 +对该酶有抑制作用 ,Fe3+浓度<5 0mmol/L时 ,对该酶有促进作用 ,当离子浓度 >5 0mmol/L时 ,则有抑制作用。利用实验获得的最适酶解条件反应 ,可使染料木苷生成染料木素的转化率达到 1 0 0 %。     

自筛β-葡萄糖苷酶高产菌-N_1制备大豆异黄酮苷元的研究

目的:探索一种用自筛的β-葡萄糖苷酶高产菌-N1制备大豆异黄酮苷元的方法。方法:应用酶学研究常规方法在实验室条件下,用自筛的β-葡萄糖苷酶高产菌-N1获得β-葡萄糖苷酶液,探索制备大豆异黄酮苷元的工艺。结果:实验室制备的大豆异黄酮苷元样品纯度为91.33%,收率为11.44%。大豆异黄酮粗品经处理后,苷的数量减少,大豆苷和黄豆黄苷从28.21%降低到22.93%,染料木苷从8.24%降低到5.67%。苷元的数量明显的增加,大豆苷元从0.04%增加至0.05%,黄豆黄素从的0.003%增加至0.09%,染料木素从0.006%增加至0.07%。结论:研究表明以自筛菌-N1作为酶促反应制备大豆异黄酮苷元的β-葡萄糖苷酶产生菌完全可行。大豆异黄酮粗品经酶液处理后,苷元的数量有明显的增加,尤其是黄豆黄素和染料木素,分别增加了30倍和11.67倍。为进一步研究奠定了基础。     

纤维素酶催化大豆异黄酮的水解

为充分发挥大豆异黄酮生物价值,采用纤维素酶催化糖苷型大豆异黄酮水解制备游离苷元型大豆异黄酮。通过考察10种纤维素酶对糖苷型大豆异黄酮总水解率和苷元型大豆异黄酮总转化率的影响,筛选得到一种成本较低且水解效果较好的纤维素酶,用于催化水解糖苷型大豆异黄酮,优化了该纤维素酶在水解工艺中底物质量浓度、酶添加量、反应体系pH、酶解温度、酶解时间等参数。结果表明：选择来源于Trichoderma viride的纤维素酶作为大豆异黄酮水解用酶;底物质量浓度0.8～2.0 mg/mL、酶添加量7%～11%、反应体系pH 5.0、酶解温度55℃、酶解时间5～6 h是较经济有效的水解工艺参数,实验优化过程中,大豆异黄酮总水解率超过90%,总转化率接近60%。因此,采用纤维素酶催化水解大豆异黄酮可显著增加游离苷元含量,提高大豆异黄酮利用价值。     

纤维素酶水解大豆异黄酮糖苷混合物的抗氧化活性

大豆异黄酮主要以糖苷类型的分子形式存在于大豆中,但是其具有生物活性的部分主要是苷元.为了建立一种体外生物转化大豆异黄酮糖苷为大豆异黄酮苷元的新方法,采用纤维素酶水解70%乙醇提取脱脂大豆粕得到的异黄酮粗提物,对比了水解前后两样品的异黄酮组成差异,并测定了其清除DPPH自由基的能力.结果表明:纤维素酶能完全水解大豆苷和染料木苷为大豆素和染料木素;而不能水解丙二酰基染料木苷和丙二酰基大豆苷.纤维素酶处理以后的大豆异黄酮糖苷混合物达到DPPH自由基50%清除率所需要的异黄酮浓度是未处理的大豆异黄酮糖苷混合物的1/2.56.     

大豆胚芽异黄酮的提取分离与结构鉴定

利用柱层析法从大豆胚芽中分离到 8个异黄酮化合物 ,分别是黄豆素糖苷、大豆苷元糖苷、染料木素糖苷、丙二酰黄豆素糖苷、黄豆素苷元、大豆苷元、染料木素、染料木素葡萄糖苷 - 6″ -阿拉伯糖 ,其中化合物染料木素葡萄糖苷 - 6″ -阿拉伯糖在大豆中为新发现