固相萃取-高效液相色谱法测定七种痕量生物胺

研究了固相萃取-高效液相色谱法测定痕量7种生物胺(色胺、酪胺、组胺、腐胺、尸胺、精脒、精胺)的方法。7种不同生物胺的标样混合溶液与荧光衍生剂丹酰氯在特定条件下衍生,衍生后通过C18固相萃取柱净化、富集,InertsilODS-3色谱柱分离,荧光检测器检测,流动相为乙腈和水梯度洗脱20min,流速为1mL/min。变异系数(CV%)为0.51～2.23,检测低限为1.29×10-6～2.57×10-4μg/mL。     

高效液相色谱法测定市售泡凤爪中的生物胺

采用丹磺酰氯为柱前衍生,建立高效液相色谱法同时测定市售泡凤爪中色胺、β-苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、酪胺、亚精胺、精胺8种生物胺含量的方法。色谱条件:C18色谱柱分离,以水和乙腈为流动相梯度洗脱,流速0.8mL/min,紫外检测器,检测波长:254nm。在此条件下,8种生物胺在23min内实现了良好的分离,该方法标准曲线相关系数均在0.998以上,精密度在可接收范围内(RSD<5%),8种生物胺的平均回收率在90.41%~99.66%之间。结果表明该方法灵敏度高,精密度和重复性好,可快捷、准确地对市售泡凤爪中的生物胺进行检测。检测出生物胺总量范围在72.42~409.67mg/kg,其中,色胺、组胺、腐胺、尸胺、亚精胺的检出率为100%,其平均含量分别为47.53、26.20、35.65、12.94、8.15mg/kg。     

柱前衍生-固相萃取-高效液相色谱法测定黄油中七种生物胺

研究柱前衍生-固相萃取-反相高效液相色谱法测定黄油中7种生物胺(色胺、酪胺、组胺、腐胺、尸胺、精脒、精胺)残留的方法。黄油样品经甲醇提取去除蛋白和脂肪,提取液经柱前衍生,衍生后通过ODS-C18固相萃取柱净化、富集,InertsilODS-3色谱柱分离,荧光检测器检测,外标法定量,流动相为乙腈和水梯度洗脱20min,流速为1mL/min。对添加3个不同含量水平的7种生物胺,5次平行实验的变异系数(CV)为3.52%￣6.75%,检测低限为2.71×10-5￣1.36×10-3μg/mL,平均回收率为80.4%￣89.1%。     

高效液相法测定市售腌制蔬菜商品中8种生物胺的含量

采用丹磺酰氯为衍生试剂,建立反相高效液相色谱法同时测定腌制蔬菜中色胺,β-苯乙胺,腐胺,尸胺,组胺,酪胺,亚精胺和精胺含量的方法。色谱条件:C18色谱柱分离,以水和乙腈为流动相梯度洗脱,流速0.8 mL/min,紫外检测器,检测波长:254 nm。在设定的试验条件下,8种生物胺在30 min内实现了良好的分离,待测生物胺峰面积同其相应浓度呈良好的线性相关性(R2>0.998)。仪器重复性良好(RSD<0.63%),方法重复性在可接收范围内(RSD<10%),8种生物胺的平均回收率在89.19%～103.02%之间。结果表明生物胺的HPLC检测方法,灵敏度高,精密度和重复性好,可快捷、准确地对腌制蔬菜中的生物胺进行检测。对市售腌制蔬菜样品中的生物胺含量进行了分析,检测出生物胺总量范围在39.38～628.82 mg/kg,属于目前我国安全标准范围之内。     

RP-HPLC柱后衍生法检测干酪中6种生物胺

目的:建立干酪中6种生物胺的高效液相色谱-柱后衍生检测方法。方法:采用高氯酸提取干酪中生物胺,以邻苯二甲醛(OPA)为柱后衍生试剂,高效液相色谱-柱后衍生-荧光法检测。采用Agilent Eclipse XDBC18色谱柱;流动相A为乙酸钠-辛烷磺酸钠溶液,流动相B为乙酸钠-辛烷磺酸钠和乙腈混合溶液,流速1.0m L/min,梯度与等度相结合洗脱方式;柱温40℃;荧光探测器激发波长330 nm,发射波长465 nm;衍生剂流量0.3 m L/min,衍生池温度45℃。结果 :采用本洗脱程序,40 min内6种生物胺完全分离;衍生剂OPA质量浓度0.4 mg/m L,流速0.3 m L/min时衍生效果最佳;6种生物胺标准曲线具有良好的线性关系(R20.9982),平行样品相对标准偏差(RSD)3.8%,方法稳定性良好,6种生物胺样品平均回收率89.25%~103.09%。结论:本法样品预处理简便,灵敏度高,重复性好,准确性高,适合检测干酪中的生物胺。     

高效液相色谱法同时测定香肠中6种生物胺

采用丹磺酰氯为衍生试剂,建立反相高效液相色谱法同时测定香肠中腐胺、尸胺、酪胺、组胺、亚精胺和精胺6种生物胺的方法.色谱条件:C18色谱柱分离,以甲醇和0.1%乙酸溶液为流动相梯度洗脱,流速0.8mL/min,二极管阵列检测器,检测波长254 nm.以1,7-二氨基庚烷为内标,在设定的试验条件下,6种生物胺实现了良好的分离,并呈良好的线性相关性(r>0.999).方法的检测限:腐胺、亚精胺、尸胺和酪胺均为0.8μg/mL,组胺和精胺均为4 μg/mL.本检测方法具有良好的重现性和回收率.对发酵香肠样品中的生物胺含量进行了分析,其中部分香肠中含有一定量的生物胺,最高可达1.09mg/g.     

高效液相色谱快速测定干酪中5种生物胺的改进方法

利用RP-HPLC、采用荧光／二极管陈列检测器对干酪中生物胺进行测定,并建立了改进的快速分析方法。以三氯乙酸、无水乙醇或甲醇为溶剂提取样品中的生物胺,邻苯二甲醛衍生后乙酸乙酯萃取衍生产物,HPLC分析时甲醇-KH2PO4为流动相等梯度洗脱,流速0．8mL／min,可用紫外检测器检或荧光检测器检测。分析结果确认,三氯乙酸提取是快速、高效的提取方法,二种检测器均能满足生物胺的分析;采用乙酸乙酯对衍生产物的萃取,可有效的解决滤膜对衍生产物的截留问题,同时除去干扰物质。     

高效液相色谱法检测食品中生物胺的不同离线衍生策略的比较分析

摘 要： 目的 分析和比较高效液相色谱法检测食品生物胺过程中最常用的4种离线柱前衍生策略,为研究者合理选择能够准确测定食品中生物胺的方法提供参考技术指导。方法 分别采用丹磺酰氯、9-芴甲基氯甲酸酯、苯甲酰氯、4-二甲胺基苯基偶氮苯磺酰氯对混合酱油样品和混合葡萄酒样品中的生物胺进行衍生,于衍生后的0、24和48 h分别采用紫外检测器-反相高效液相色谱法使用反相C18色谱柱和紫外检测器定量分析反应混合物中的生物胺衍生物的水平。 结果 4种衍生剂均能与腐胺、尸胺、精胺、亚精胺、酪胺、β-苯乙胺、组胺、色胺的胺基反应,但反应产物的稳定性不同,不同衍生策略在制备的8种生物胺衍生物在C18色谱柱上的洗脱顺序上存在差异。采用丹磺酰氯制备的生物胺衍生物显示了高稳定性最稳定,在其在室温下放置48 h未发现显著降解,而采用其他衍生剂制备的某些特定生物胺衍生物则在该条件下则发生了显著降解。此外,采用不同衍生策略剂制备的8种生物胺衍生物在C18色谱柱上的洗脱顺序也存在差异。结论 采用丹磺酰氯衍生制备的生物胺衍生物具有高稳定性,适合在高效液相色谱仪上采用批处理程序进行分析,而采用其他3种衍生剂制备的某些特定生物胺的衍生物稳定性不佳,不适合在高效液相色谱仪上采用批处理程序进行分析。     

高效液相色谱-二极管阵列检测器-荧光检测器法测定植物油中的18 种多环芳烃

建立凝胶渗透色谱法净化样品、高效液相色谱-二极管阵列串联荧光检测器法同时测定植物油中18 种多环芳烃的检测方法。样品经环己烷-乙酸乙酯（1∶1,v/v）溶解,利用凝胶渗透色谱法去除油脂大分子,PAH C18柱分离,乙腈和水作流动相进行梯度洗脱,设置荧光检测程序,以2 个发射波长通道同时采集数据,测定油样中的17 种多环芳烃,以二极管阵列检测器测定苊烯。结果表明：方法检出限为0.5～4 ng/mL,样品回收率在78.65%～103.4%之间,相对标准偏差小于5%。本方法满足德国标准对18 种多环芳烃的同步检测新要求。     

HPLC测定虾皮中不同类型的生物胺

虾皮是深受我国消费者喜爱的食物和调味品,为分析虾皮中生物胺含量及种类,利用高效液相色谱法对市售虾皮中的生物胺含量进行检测。利用5%三氯乙酸溶液提取虾皮中的生物胺,并采用丹磺酰氯进行柱前衍生;Agilent TC-C18(5μm,250 mm×4.6 mm)柱进行分离,乙腈和水为流动相进行梯度洗脱,荧光检测器检测,其中激发波长336 nm,发射波长495 nm。结果表明,虾皮中生物胺有色胺、苯乙胺、腐胺、尸胺、酪胺、亚精胺及精胺等8种,在20 min内8种生物胺得到很好的分离。经方法学验证,线性范围为1~50μg/m L,回收率在53%~183%,方法检出限为1μg/g;RSD在1.97%~3.56%。不同来源的样品生物胺的含量及种类差异很大,可能与加工工艺有较大相关性,该方法灵敏度高,重现性好,可为测定虾皮中生物胺含量提供技术支持。     

不同啤酒生物胺含量的比较

使用反相高效液相色谱法,测定啤酒中8种常见生物胺含量。以苯甲酰氯为衍生试剂,Agilent EclipseXDB-C18为固定相,乙腈和乙酸铵溶液为流动相,紫外检测波长设置为254 nm,梯度洗脱。本文首先对国内市售啤酒生物胺种类及含量范围进行研究,检测结果表明国内啤酒中8种生物胺均有存在,但不同样品所含种类不同,且有个别胺含量偏低无法定量。不同厂家的产品在种类和含量上存在差别,但整体含量接近,生物胺总量为4.21～10.59 mg/L,不足以对人类健康产生危害。原麦汁浓度、酒精度与生物胺含量的关系显示,二者与生物胺有一定联系,但非主要因素,相对于生产厂家和发酵情况,原麦汁浓度、酒精度对生物胺含量的影响较小。     

Reverse phase HPLC/DAD determination of biogenic amines as dansyl derivatives in experimental red wines

An accurate, rapid and very sensitive high-performance liquid chromatographic (HPLC) method for the determination of dansyl derivative of 11 biogenic amines, in experimental red wine samples from the crop year 2000 produced by Sicilian and French viticultures, was developed. The method involved the derivatisation with dansyl chloride followed by liquid chromatography gradient elution analysis without any other sample pre-treatment. The chromatographic system was equipped with a reversed-phase C-18 column and a DAD detector. A mobile phase of acetonitrile/water was used. The levels of biogenic amines in the samples ranged from 0.10 to 0.80 μg/ml. The HPLC method developed, showed a good linearity, sensitivity and repeatability. Recovery test ranged from 85.0% to 98.6% while detection limit was 0.01 ng/ml for all the studied compounds.     

UPLC-MS/MS法测定黄酒中8 种生物胺

建立黄酒中组胺、酪胺、腐胺、色胺、β-苯乙胺、尸胺、精胺、亚精胺共8?种生物胺的超高效液相色谱-串联质谱检测方法。样品衍生化处理后,经C18色谱柱（100.0?mm×2.1?mm,1.7?μm）分离,0.1%甲酸溶液、0.1%甲酸-乙腈溶液作为流动相梯度洗脱,用多反应监测模式下的电喷雾正离子扫描获得质谱数据,并采用内标法进行定量。结果表明：8?种生物胺可在19?min内分离,且在各自质量浓度范围内线性良好,r2均大于0.995?1;检出限为0.25～0.50?ng/mL,定量限为1～2?ng/mL,日内精密度为0.61%～5.68%,日间精密度为0.82%～5.00%;黄酒样品中生物胺的加标回收率在83.56%～117.45%之间,相对标准偏差均低于6.69%。     

Application of the simplex method for optimization of chromatographic analysis of biogenic amines in fish

The aim of this study was to optimize the separation of biogenic amines with ion-exchange high-performance liquid chromatography, using the modified simplex method. A modified chromatographic response function was used, and two methodological parameters were selected as simplex variables: the proportion of the organic solvent 2-propanol in the mobile phases, added as a new mobile phase, and the variation of the gradient curve at one specific step in the elution program. In optimum conditions the correct resolution and separation of the biogenic amines (tyramine, β-phenylethylamine, histamine, tryptamine, putrescine, cadaverine, agmatine, spermidine and spermine) were completed in 16 min, reducing the analysis time by 9 min compared with the original method. The regression coefficients were higher than 0.99 in all the amines, except for spermine (0.989). The detection limits varied between 0.06 mg/L, for histamine and agmatine, and 0.22 mg/L, for tryptamine, while retention time repeatability, determined as a relative standard deviation, was between 4.64% for histamine and 11.95% for tryptamine. The repeatability variation for the amine concentrates was found between 0.71% in cadaverine and 3.23% for tryptamine. Applying the optimized method to samples of refrigerated sardine and sea bream demonstrated the effectiveness of the method in these fish species.     

黄酒中9 种生物胺的高效液相色谱分析法

建立一种检测黄酒中生物胺的反相高效液相色谱法。用三氯乙酸提取黄酒中生物胺,丹磺酰氯作为衍生化试剂,1,7-二氨基庚烷作为内标定量。色谱条件为：Waters XBridge C18色谱柱（4.5 mm×250 mm,3.8 μm）作为分离柱,乙腈和水作为流动相进行梯度洗脱,流速1 mL/min,紫外检测波长254 nm。结果表明,9 种生物胺（盐酸吡哆胺、色胺、腐胺、尸胺、β-苯乙胺、组胺、酪胺、精胺和亚精胺）在40 min内能被很好分离。在1～50 mg/L质量浓度范围内,各种生物胺呈现良好的线性相关性（R2＞0.999）。各生物胺加标回收率为79.54%～89.55%,相对标准偏差为3.14%～6.35%,该法各组分检出限（RSN=3）为0.002～0.009 mg/L。应用柱前衍生化高效液相色谱-紫外检测法,实现了黄酒中生物胺的准确检测。     

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定小黄花鱼中9种生物胺

为快速检测水产品中精胺、亚精胺、腐胺、尸胺、组胺、色胺、章鱼胺、酪胺、2-苯乙胺9种生物胺含量,本研究以小黄花鱼为基质,优化了流动相组成和样品提取溶剂,建立了超高效液相色谱-串联三重四极杆质谱同时检测方法。样品经0.1%三氯乙酸水溶液重复提取两遍,合并上清液过0.22 μm聚四氟乙烯滤膜。以HSS T3为色谱柱,流动相A为0.1%甲酸乙腈,流动相B为10 mmol/L甲酸铵水溶液含0.2%甲酸,在电喷雾正离子电离、多反应监测模式下,9种生物胺在4 min内得到分离。根据响应强度不同,9种生物胺分成酪胺、2-苯乙胺,腐胺、尸胺、组胺、色胺、章鱼胺,精胺、亚精胺三组,以1:5:25浓度比配制多浓度混合标准中间液。该方法对三组生物胺的线性范围分别为1~40 ng/mL、5~200 ng/mL和25~1000 ng/mL;方法定量限依次为0.01、0.05和0.25 mg/kg。低、中、高三个浓度水平加标回收率分别为81.7%~111.2%、80.0%~110.3%、80.0%~99.0%;精密度（n=6）依次为1.7%~7.3%、1.3%~9.1%、0.7%~4.6%。总体而言,该方法简便、快速,具有良好的灵敏度、回收率和精密度,适用于小黄花鱼中生物胺的测定。     

PITC柱前衍生-反相高效液相色谱法测定黄酒中游离氨基酸和生物胺

建立柱前衍生-反相高效液相色谱,同时测定黄酒中17 种氨基酸及7 种生物胺含量的方法。采用异硫氰酸苯酯柱前衍生试剂,采用Inertsil ODS-SP C18（250 mm×4.6 mm,5 μm）分析,以乙酸钠溶液和乙腈溶液混合液进行梯度洗脱,在254 nm波长处进行氨基酸和生物胺的含量分析。氨基酸和生物胺在2.0～500 mg/L和0.5～125 mg/L范围内具有良好的线性关系,相关系数R2大于0.99,平均回收率在86.44%～99.75%之间,相对标准偏差在0.31%～3.53%之间;检出限为0.02～0.25 mg/L,定量限为0.25～4.50 mg/L。方法线性范围广、准确性高、稳定性好,适用于黄酒中氨基酸及生物胺的检测。     

高效液相色谱法测定东北农家酱中的5种生物胺

建立柱前衍生-高效液相色谱法检测东北农家酱中的生物胺。采用5%的三氯乙酸提取东北农家酱中生物胺,正己烷除脂,丹磺酰氯作为柱前衍生试剂。采用C18（250 mm×4.6 mm,5 μm）色谱柱,以甲醇和水混合液进行梯度洗脱,流速为0.8 mL/min,在254 nm紫外检测波长处进行生物胺含量测定。结果表明,东北农家酱中的5 种生物胺（组胺、酪胺、β-苯乙胺、腐胺、亚精胺）在40 min内能很好地被分离。方法中5 种生物胺的线性范围为1～50 mg/kg,相关系数R2不小于0.99;检出限（RSN=3）为0.02～0.06 mg/kg,相对标准偏差低于5%,在添加量为5.0、10.0 mg/L和15.0 mg/L时,样品的平均回收率在82%～105%之间。本方法线性范围较广、重复性好、准确性高,能快速简便地对东北农家酱中的生物胺进行检测分析。     

Method development and cultivar-related differences of nine biogenic amines in Ontario wines

We have developed a new high-performance liquid chromatographic method using pre-column derivatization with orthophthalaldehyde, gradient elution and fluorescence detection to assay the concentrations of nine biogenic amines in wines: histamine, 1-methylhistamine, methylamine, ethylamine, tyramine, tryptamine, 2-phenylethylamine, putrescine and cadaverine. The method shows excellent analytical characteristics. It has been used to measure the concentration of these biogenic amines in 73 monovarietal wines from five red and six white cultivars. All wines were from the Niagara viticultural region of southern Ontario and were certified as to origin. Pinot noir wines had the highest content of total amines, and also of histamine, putrescine, cadaverine, ethylamine and 1-methylhistamine. Among the white wines, those from Chardonnay had the highest content of total amines and also of histamine, tyramine, methylamine and 1-methylhistamine. It is suggested that longer ageing as well as Sur-lie fermentation (Chardonnay) can account, at least in part, for these findings.