高效液相色谱法测定羊乳中的乳铁蛋白

为开发羊乳中乳铁蛋白的高效液相色谱测定方法及报告羊乳中乳铁蛋白的分布规律。本研究采集哈尔滨地区羊乳样品(n=24)和经过巴氏杀菌的羊乳样品(n=24),采用高效液相色谱测定其乳铁蛋白质量浓度。样品脱脂后,调整pH沉淀酪蛋白,采用C8色谱柱分离,二极管阵列检测器210nm检测,以水、乙腈、三氟乙酸为流动相进行线性梯度洗脱。方法回收率94.2%,线性范围50~300μg/mL,检出限12μg/mL,定量限40μg/mL。原料羊乳中乳铁蛋白的质量浓度的平均值122.1μg/mL,巴氏杀菌后羊乳中乳铁蛋白的平均值103.9μg/mL。巴氏杀菌对羊乳中乳铁蛋白浓度无影响。     

高效液相色谱检测乳制品中的乳铁蛋白含量

目的：借助高效液相色谱法测定乳制品中乳铁蛋白。方法：先通过额外加入的二价铁离子使乳铁蛋白的构型更利于沉淀。然后用体积分数60% 乙醇溶液沉淀蛋白除去糖分,再用醋酸盐缓冲液提取乳铁蛋白并分离掉酪蛋白,最后用高效液相色谱检测,采用LiChrosorb RP-C18 色谱柱,在质量浓度0.1g/100mL 的三氟乙酸溶液协助下,甲醇与水线性梯度洗脱。结果：乳铁蛋白的线性范围是0.4～2mg/mL(R2=0.9980),平均回收率95.4%。结论：此方法可以用于乳制品中乳铁蛋白的测定。     

液相色谱-串联质谱法测定牛乳基婴幼儿配方奶粉中的乳铁蛋白

目的建立液相色谱-串联质谱法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry, LC-MS/MS)测定牛乳基婴幼儿配方奶粉中的乳铁蛋白含量的方法。方法试样中的乳铁蛋白经尿素-碳酸氢铵缓冲液提取,二硫苏糖醇还原,碘乙酰胺烷基化,37℃酶解后,特征肽段用液相色谱-串联质谱正离子模式测定,内标法定量。结果乳铁蛋白在0.00080-0.16 pmol/μL（相当于10~2000 mg/100 g）水平间线性关系良好,相关系数r≥0.9990,检出限为0.0020 pmol/μL,相当于25 mg/100g。检测结果加标回收率为92.00%~101.90%,相对标准偏差2.96%~4.15%。结论该方法准确好、特异性强、灵敏度高,可用于牛乳基婴幼儿配方奶粉中的乳铁蛋白含量的测定。     

牛乳中乳铁蛋白的分离纯化研究

牛乳经酸沉淀除酪蛋白后,通过超滤、离子交换法分离纯化得到乳铁蛋白,利用考马斯亮蓝、SDS-PAGE电泳定性定量检测。结果表明:每毫升牛乳能提取乳铁蛋白0.22mg,纯度为95%。     

反相高效液相色谱法快速测定乳铁蛋白含量

目的建立一种反相高效液相色谱法(RP-HPLC)快速测定乳铁蛋白在乳原料及乳制品中含量的方法。方法根据酪蛋白在等电点(p H 4.6)凝聚沉淀特点,采用RP-HPLC法,用p H4.6醋酸盐缓冲液溶解分离乳铁蛋白,用C18色谱柱快速分离,用流动相A为0.1%三氟乙酸水溶液,流动相B为含有0.09%(V:V)三氟乙酸的90%(V:V)乙腈水溶液,进行梯度洗脱,检测波长214 nm,流速0.7 m L/min。结果乳铁蛋白在10~500 mg/L之间呈现良好的线性,相关系数为0.9999,平均回收率为98.0%,RSD=0.8%(n=9)。结论该方法推广性高、快速,简便、准确,可用于乳铁蛋白原料、奶粉、牛奶及保健品等中乳铁蛋白的含量检测。     

超高效液相色谱质谱联用技术在发酵乳有机酸分析中的应用

利用超高效液相色谱-质谱联用(UPLC-MS)技术,建立了发酵乳中乙酸,乳酸,琥珀酸的检测方法。色谱条件为:采用ACQUITY UPlC HSS T3色谱柱进行分离,乙腈-0.1%甲酸/1 mmol/L甲酸铵水溶液体系作为流动相进行梯度洗脱,流速为0.25 mL/min,柱温为30℃,进样量5μL。质谱采集选择ESI-负离子监测模式进行扫描,优化锥孔电压和碰撞能量等质谱条件,离子源温度100℃,脱溶剂气温度450℃,脱溶剂气流量600 L/h。通过绘制有机酸的标准曲线,得到乙酸、琥珀酸、乳酸的线性范围分别是0~100,0~80,0~600μg/mL;最低检出限分别为0.04,0.0025,0.0025μg/mL;最低定量限分别为0.2,0.01,0.01μg/mL;相关系数范围R2为0.9951~0.9997,回收率范围为93.5%~106.07%。该方法准确、快速,可用于检测发酵乳中有机酸的含量。     

高效液相色谱法测定牛乳中α-乳白蛋白

利用常规的C18色谱柱的高效液相色谱建立测定牛乳中主要过敏蛋白α-乳白蛋白含量的方法。色谱条件:色谱柱Alltima-C18(4.6 mm×200 mm,5μm),柱温为45℃,UV检测波长215 nm,流动相A为含0.1%三氟乙酸的超纯水,流动相B为乙腈:超纯水:三氟乙酸=400:100:0.5,采用梯度洗脱方法,流速0.8 mL/min。结果表明:α-乳白蛋白的线性范围分别为50～1 000μg/mL(r=0.990 9);α-乳白蛋白平均回收率为97.27%,RSD=0.76%(n=5);该方法简便、准确,适合于乳制品中α-乳白蛋白含量的测定。     

不同来源乳中α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和乳铁蛋白含量分析

本研究通过高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS)对不同种乳中α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和乳铁蛋白的含量进行测定和比较。结果显示,不同来源乳中α-乳白蛋白、β-乳球蛋白、乳铁蛋白和总蛋白存在一定差异。羊乳中乳清蛋白平均值为0.385 mg/100 g,低于牛乳和牦牛乳;羊乳中乳铁蛋白含量最高,均值为4.43 mg/100 g,最大值9.90 mg/100 g,是优质的乳铁蛋白来源;牦牛乳总蛋白含量(均值3.61%),明显高于牛乳(均值3.22%)和羊乳(均值2.89%);牛奶中乳清蛋白量在三类乳中最高。     

牛初乳中乳铁蛋白的分离和纯化

利用超滤、盐析和层析三种方法,采用单因素实验和正交实验对酸牛乳清中的乳铁蛋白进行分离和纯化,得到盐析的最佳条件为:先以50%硫酸铵除去杂蛋白,然后在30°C,pH8.5,80%硫酸铵进行盐析。用CM-SephadexC-100进行层析,进样量为2mL,洗脱液pH为7.4时可以得到乳铁蛋白纯品。SDS-PAGE凝胶电泳结果表明,牛初乳中乳铁蛋白的纯度为92%,分子量大约为78000±2000Da。     

酶联免疫吸附法快速检测婴儿配方奶粉中乳铁蛋白含量

目的采用乳铁蛋白快速检测试剂盒,通过酶联免疫吸附法定量测定婴儿配方奶粉中的乳铁蛋白含量,并验证该方法的准确性、稳定性和可靠性。方法按照试剂盒操作说明制作标准曲线,选取乳铁蛋白阴性样品进行添加回收实验,验证方法的准确性;选取一个乳铁蛋白阳性样品,重复检测6次,计算结果偏差,验证方法的稳定性;选取12个乳铁蛋白阳性样品,分别采用试剂盒方法和高效液相色谱法进行检测,对比2种方法的检测结果,验证试剂盒方法的可靠性。结果试剂盒检出限为2 mg/100 g;试剂盒检测方法回收率在101.6%~109%;相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为5.34%;试剂盒方法检测结果与标签值的偏差为-6.90%~6.45%,和高效液相色谱法检测结果的偏差为-6.45%~6.9%,说明试剂盒方法具有很好的可靠性。结论乳铁蛋白试剂盒检测方法灵敏度高、操作简单,能快速准确地测定婴儿配方奶粉中的乳铁蛋白含量。     

乳铁蛋白的补铁作用

实验研究了在磷酸根存在的中性条件下,乳铁蛋白对铁离子溶解作用的影响。随着乳铁蛋白加入量的增加,上清液中二价铁和三价铁的浓度呈线性增加,表明乳铁蛋白对二价铁和三价铁均具有明显的增溶作用。乳铁蛋白可以使铁的溶解度提高60~70倍,远远超过其分子的含铁量,这样,乳铁蛋白必然能够成为一种治疗缺铁性贫血的功能性食品的重要添加成分。     

Inhibitory effects of lactoferrin on pulmonary inflammatory processes induced by lipopolysaccharide by modulating the TLR4-related pathway

This study tested the ability of lactoferrin to modulate pulmonary inflammation. To construct in vitro and in vivo inflammatory lung models, cells from the human lung adenocarcinoma cell line (A549) were exposed to lipopolysaccharide (LPS, 1 µg/mL), and mice (CD-1) were intratracheally administered LPS [10 mg/kg of body weight (BW), tracheal lumen injection], respectively. The A549 cells were preincubated with lactoferrin (10 mg/mL), and the mice were intraperitoneally injected with lactoferrin (100 mg/kg of BW), followed by LPS treatment. The concentrations of proinflammatory cytokines (IL-1β and TNF-α) in culture medium of A549 cells and in bronchoalveolar lavage fluid of the mice were determined using enzyme-linked immunosorbent assays. The toll-like receptor 4–related pathway (TLR4/MyD88/IRAK1/TRAF6/NFκB) was determined at gene and protein expression levels in A549 cells and mouse lung tissue. Results showed that LPS treatment significantly elevated the concentrations of IL-1β and TNF-α in the A549 cell culture medium and in bronchoalveolar lavage fluid of the mice; it also elevated both the mRNA and protein expressions of TLR4 and the TLR4 downstream factors in A549 cells and mouse lung tissue. Nevertheless, lactoferrin apparently depressed the releases of IL-1β and TNF-α from A549 cells and lung tissues stimulated by LPS, and significantly suppressed the TLR4 signaling pathway. Lactoferrin also promoted the enhancement of miR-146a expression in A549 cells and mouse lung tissue. Moreover, 100°C heating for 3 min caused total loss of the previously listed bioactivity of lactoferrin. Collectively, we proved that lactoferrin intervened in LPS-induced inflammation in the pulmonary cell model and in the mouse model, through inhibiting the TLR4-related pathway.     

乳铁蛋白铁吸收效果的研究

对乳铁蛋白和硫酸亚铁中铁的吸收进行了研究。结果表明,乳铁蛋白比硫酸亚铁更容易吸收。     

酪氨酸酶酶促乳铁蛋白在丝素表面的接枝

本文利用酪氨酸酶对酪氨酸残基具有催化氧化的特性,进行了酶促乳铁蛋白在丝素表面接枝效果研究。借助酪氨酸含量分析、丝素蛋白溶液黏度测定等,评价了酪氨酸酶的催化接枝效果。研究结果表明,经酪氨酸酶处理后,丝纤维中酪氨酸含量下降;与仅经乳铁蛋白处理相比,酪氨酸酶/乳铁蛋白组合后丝织物的强力、丝素蛋白溶液黏度增加,验证了酶促乳铁蛋白在丝素蛋白表面的接枝反应。此外,乳铁蛋白也会在丝纤维表面吸附,表现为酪氨酸酶/乳铁蛋白处理样与仅乳铁蛋白处理样染色性能较相近。     

马铃薯酪氨酸酶对羊毛的抗菌整理

为了研究生物法对羊毛的改性,文章运用简易方法从马铃薯中提取酪氨酸酶,并以酪氨酸为底物,测试了自制酪氨酸酶的活性,并用它来处理羊毛,以接枝乳铁蛋白,然后利用电镜、红外光谱检测羊毛,并对羊毛进行抗菌整理研究。结果表明,自制的马铃薯酪氨酸酶具有一定活力,通过电镜和红外光谱证明了乳铁蛋白被成功接枝,并具有一定的抗菌性能,对金黄色葡萄球菌的抑菌率达76.32%。     

基于核酸适配体的胶体金比色法检测奶粉中的乳铁蛋白

目的 建立一种基于核酸适配体(aptamer)胶体金(colloidal gold, AuNPs)比色法检测奶粉中乳铁蛋白(lactoferrin, LF)的方法。方法 以无标记的LF适配体为生物识别元件, AuNPs为信号分子, 利用AuNPs的光学特性构建一种可定性和定量检测LF的比色适配体传感器。结果 在最优条件下, 20 min内即可完成检测, 在5~75 nmol/L浓度范围内具有良好线性关系,相关系数(r2)为0.998, 检出限为3.6 nmol/L, 特异性较好, 并且在基质标准曲线中也表现出较好的线性关系(r2=0.987)。结论 该方法操作简单, 分析快速, 安全环保, 灵敏度较高, 有望应用于奶粉中LF的检测。     

Genetic variability of lactoferrin content estimated by mid-infrared spectrometry in bovine milk

The effects of lactoferrin (LF) on the immune system have already been shown by many studies. Unfortunately, the current methods used to measure LF levels in milk do not permit the study of the genetic variability of lactoferrin or the performance of routine genetic evaluations. The first aim of this research was to derive a calibration equation permitting the prediction of LF in milk by mid-infrared spectrometry (MIR). The calibration with partial least squares on 69 samples showed a ratio of standard error of cross-validation to standard deviation equal to 1.98. Based on this value, the calibration equation was used to establish an LF indicator trait (predicted LF; pLF) on a large number of milk samples (n = 7,690). A subsequent study of its variability was conducted, which confirmed that stage of lactation and lactation number influence the overall pLF level. Small differences in mean pLF among 7 dairy breeds were also observed. The pLF content of Jersey milk was significantly higher than that in Holstein milk. Therefore, the choice of breed could change the expected LF level. Heritability estimated for pLF was 19.7%. The genetic and phenotypic correlations between somatic cell score and pLF were 0.04 and 0.26, respectively. As somatic cell score increases in presence of mastitis, this observation seems to indicate that pLF, or a function of observed pLF, compared with expected LF might have potential as an indicator of mastitis. The negative genetic correlation (−0.36) between milk yield and pLF could indicate an undesirable effect of selection for high milk production on the overall LF level.     

哺乳动物小肠乳铁蛋白受体及其功能的研究进展

乳铁蛋白是哺乳动物体内具有多种生理功能的铁结合性糖蛋白。乳铁蛋白作用的靶细胞及细胞表面的特异性受体是其发挥多种生物功能的基础。本文主要介绍哺乳动物小肠乳铁蛋白受体的结构、结合特性和生理功能;阐述人和小鼠小肠乳铁蛋白受体的特性,及其促进铁离子吸收和调节机体免疫的功能。     

酶联免疫法测定牛初乳中乳铁蛋白含量

应用酶联免疫法制定牛初乳中乳铁蛋白的含量,最小检出量为０．５ｎｇ／ｍｌＬＦ,浅性范围为０．８ｎｇ／ｍｌ至１００ｎｇ／ｍｌ。标准曲线性方程为Ｙ＝－２２．７２Ｘ＋２１．３８,相关系数γ为０．９９６。结果较为理想,这种对ＬＦ的检测方法在国内未见报道。