传统发酵食品中乳酸菌的抗生素耐药性评估及耐药基因分析

对传统发酵食品中分离的97株乳酸菌的抗生素耐药性进行评估及耐药基因分析,结果表明:所有分离菌株对万古霉素、庆大霉素、卡那霉素、链霉素、四环素和替考拉宁的耐药性较强,耐药率达50%以上;对氨苄青霉素、红霉素、甲氧苄啶、头孢呋肟较敏感,耐药率为10%左右。携带最多的耐药基因是tetM(91.75%)和ermB(86.60%)基因,其次为aac(6,)-aph(2')(53.61%),lnuA(45.36%),tetK(39.18%),ermC(36.08%),strA(34.02%)和blaZ(32.99%)基因,携带率相对较低的基因为strA(27.84%),msrA/B(22.22%)和aph(3')-III(7.22%)基因。另外,所有乳酸菌中均未检测出氯霉素(cat)和万古霉素(vanX)耐药基因。多重耐药菌株在发酵乳制品中的分离率最高,且多出现在植物乳杆菌(45.83%)、凝结芽孢杆菌(20.83%)和耐久肠球菌(12.28%)中。MTP试验结果显示70%的菌株都具有产生物被膜的能力,其多重耐药性显著高于不产生物被膜的菌株。综上所述,乳酸菌的耐药性可能成为重要的食品安全隐患,急需出台一系列用药规定,减少抗生素的选择压力,加强食用菌株的安全性检测。     

产细菌素屎肠球菌SC-Y112的体外益生性及安全性评价

屎肠球菌SC-Y112是一种具有广谱抗菌性质的产细菌素乳酸菌，为更深入了解其菌株性质，本研究通过模拟胃肠液耐受实验、胆盐耐受实验、抗氧化活性测定、溶血活性测定、明胶液化实验、有害代谢物质检测、耐药性评价及肠球菌毒力基因检测对屎肠球菌SC-Y112的体外益生性质与安全性质进行分析评价。结果表明：屎肠球菌SC-Y112对模拟胃肠液耐受性强，在模拟胃液培养3 h存活率达73.66%，在0.3 g/100 mL的胆盐质量浓度下培养3 h后存活率达56.38%，其发酵24 h上清液总抗氧化能力达35.21 U/mL；此外，屎肠球菌SC-Y112不产生物胺、吲哚以及偶氮还原酶等有害代谢物质，无溶血现象，不溶解明胶，不携带常见肠球菌毒力基因，且对万古霉素敏感。研究结果可为菌株的进一步开发与应用提供科学依据。     

马奶及其制品中肠球菌属乳酸菌的安全性评价

目的：为使具有民族特色和特殊功效的马奶及其制品中的有益乳酸菌应用于食品发酵工业,确保分离自内蒙古牧区靠自然发酵制作的马奶及其制品中的乳酸菌的安全性,对分离自马奶及其制品中的乳酸菌进行安全性评价。方法：通过吲哚实验、硝酸盐还原酶实验、氨基脱羧酶实验、溶血实验、D-乳酸检测及质粒提取实验,确定菌株是否含有有害代谢产物及有无耐药性。结果：菌株的吲哚实验、硝酸盐还原酶实验、氨基脱羧酶实验、溶血实验均为阴性,在菌株JHZ9、JHZ15、JHZ25、JNN1中检出了少量的D-乳酸,菌株对实验所选药品无耐药性且未检测到可转移的耐药质粒。结论：7 株肠球菌属的乳酸菌在代谢活动中不产生有害代谢产物,不存在可转移的耐药质粒。     

市售酸奶中乳酸菌耐药性及耐药基因的检测

为探讨酸奶中乳酸菌所携带耐药基因对人类健康的潜在影响,对市售酸奶中的乳酸菌进行分离和鉴定,并通过药物敏感性实验确定菌株的耐药谱,同时利用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）扩增技术调查链霉素、庆大霉素、磺胺类和四环素等耐药基因的分布情况。结果表明：25 份市售酸奶样品中共分离得到56 株乳酸菌,包括26 株德氏乳杆菌保加利亚亚种、3 株植物乳杆菌、2 株嗜酸乳杆菌以及25 株嗜热链球菌。药敏结果显示,31 株乳杆菌对链霉素（87.1%）、庆大霉素（80.6%）、环丙沙星（74.2%）和四环素（61.3%）的耐药率较高,对头孢菌素类则较为敏感;而25 株嗜热链球菌同样对链霉素的耐药率最高,达76.0%;其次分别为万古霉素（32.0%）、环丙沙星（32.0%）和四环素（20.0%）。56 株乳酸菌中共检出5 种不同的耐药基因,分别为链霉素耐药基因ant(6)（检出率1.8%）、庆大霉素耐药基因aac(6')-aph(2')（检出率7.1%）、四环素耐药基因tetM（检出率5.4%）以及磺胺类耐药基因sulⅠ（检出率14.3%）和sulⅡ（检出率1.8%）。受试的乳酸菌中共有13 株检出耐药基因,其中有4 株携带两种不同的耐药基因。长期以来被认为安全并广泛应用于发酵食品领域的乳酸菌可能成为潜在的耐药基因贮存库。     

罗非鱼肠道乳酸菌对抗生素的药敏性

为研究罗非鱼肠道乳酸菌对常用抗生素的药敏性,采用纸片扩散法测定分离自罗非鱼肠道中的42株乳酸菌对13种抗生素(青霉素、氨苄西林、红霉素、卡那霉素、链霉素、庆大霉素、四环素、多西环素、万古霉素、氯霉素、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星)的药敏性。结果表明42株乳酸菌都有一定的耐药性,主要对PEN、KAN、GEN、VAN、CIP、NOR和OFL耐药,耐药菌株数分别为19 (45.2%),31 (73.8%),24 (57.1%),34 (81.0%),30(71.4%),34(81.0%)和20(47.6%)。菌株的耐药性有一定的种间和种内差异,部分菌株有多重耐药性。     

广州市售酸奶中乳酸菌的耐药性评估

研究广州市售酸奶中乳酸菌对不同种类抗生素的药物敏感性。从市售酸奶中分离并鉴定乳酸菌,采用纸片扩散法检测分离菌株对18种抗生素的药物敏感性;E-test方法对耐药菌株进行最低抑菌浓度测定。从31份市售保质期内商标注册酸奶中分离鉴定出48株乳酸菌,其中25株嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)、20株保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)、3株副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)。48株乳酸菌对卡那霉素、链霉素均耐药;对头孢他啶、头孢噻肟、红霉素均敏感;对环丙沙星、庆大霉素、万古霉素等呈现出不同程度的耐受性;79.2%(38/48)表现出多重耐药性;E-test分析表明,除了保加利亚乳杆菌MR10的MIC为256μg/mL以外,所有万古霉素耐药菌株对万古霉素的MIC均大于1024μg/mL。不同品牌酸奶分离菌株对抗生素具有不同的耐受性,均有多重耐受性出现,应加强其耐药性连续监测及安全评价。     

五株嗜热链球菌抗药性研究

采用药敏纸片法研究了五株高产粘嗜热链球菌(KLDS3.1012、KLDS3.1014、KLDS-SM、KLDS3.0206、KLDS3.0207)对15种抗生素的敏感性,结果发现,KLDS3.1014对两种抗生素有抗性,KLDS3.1012、KLDS-SM、KLDS3.0206对3种抗生素有抗性,KLDS3.0207则表现出多重抗药性。对五株嗜热链球菌耐四环素基因(tet M,tet S,tet L)、耐红霉素基因(erm A,erm B,msr A/B)和耐氯霉素基因(cat)的初步研究表明,四环素耐受基因、红霉素耐受基因以及氯霉素耐受基因不位于基因组DNA上,同时,受试菌株均无质粒,因此可以初步判断受试菌株抗药性不会进行传递。     

中国水产品中副溶血性弧菌耐药性及遗传特征分析

目的研究我国水产品中分离的副溶血性弧菌耐药性、产毒特性及遗传特征。方法对我国26个省、直辖市和自治区水产品中分离的1 137株副溶血性弧菌进行耐药性分析和毒力基因检测,并用脉冲场凝胶电泳方法比对产毒菌株的遗传特征。结果 1 137株副溶血性弧菌中有254株(22.3%)受试菌株对测定的12种抗生素全部敏感,883株(77.7%)对测定的抗生素呈现不同程度耐药。所有受试菌株对左氧氟沙星和庆大霉素抗生素敏感,主要耐受的抗生素为氨苄西林(53.7%,611/1 137)、阿莫西林/克拉维酸(46.3%,526/1 137)和头孢唑林(24.2%,275/1 137)。1 137株副溶血性弧菌分离株全部检出tlh基因,有3株检出tdh基因,有19株检出trh基因,其中2株同时检出tdh和trh基因。20株产毒菌株遗传特征分散,与其食品来源和耐药谱之间也无密切关联,其中4株对测定的抗生素均敏感,其余菌株主要对青霉素类和头孢类抗生素耐药。结论我国水产品中副溶血性弧菌对青霉素类抗生素普遍耐药,毒力基因携带率较低,产毒菌株遗传特征多样。     

新疆发酵乳中保加利亚乳杆菌的耐药性研究

以分离自新疆酸牛乳中的5株保加利亚乳杆菌为研究对象,采用肉汤稀释法测定保加利亚乳杆菌在15种常见抗生素条件下的耐药表型,并通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术对菌株可能出现的耐药基因进行检测。结果表明,IMAU32330、IMAU32265和IMAU32166对环丙沙星耐药,对其他抗生素敏感;而IMAU32071、IMAU32276对所有抗生素均敏感。通过检测受试菌株的耐药基因,从5株菌中均检出erm(B),从部分受试菌株中检出了耐药基因vanX等。实验结果可以为人们安全使用抗生素和乳酸菌提供一定的参考。     

自贡市肉及其制品中粪肠球菌耐药性毒力基因和多位点序列分析

目的了解四川省自贡市肉及其制品分离粪肠球菌的抗生素耐药性和携带毒力基因情况,以及多重耐药菌株的序列分型(ST)。方法 2013年4月17~21日对147份肉及其制品样品污染的粪肠球菌进行分离鉴定,使用全自动微生物鉴定仪对分离菌株的耐药性进行检验,应用聚合酶链式反应(PCR)方法检测分离到的粪肠球菌携带4种常见毒力基因的情况,并对多重耐药菌株进行多位点序列分型(MLST)研究。结果从147份肉及其制品样品中共分离到65株粪肠球菌,其中耐药菌株比例为58.5%(38/65);分离菌株对四环素的耐药率最高,为41.5%(27/65),对利福平、氯霉素和红霉素也均有较高的耐药率;分离菌株对高浓度链霉素和高浓度庆大霉素的耐药率分别达到了15.4%(10/65)和12.3%(8/65);未分离到对青霉素类(青霉素和氨苄西林)、糖肽类(万古霉素)和脂肽类(达托霉素)抗生素耐药的菌株。4种常见毒力基因(gel E、asa1、esp、cyl A)在65株分离株中均有携带,阳性率分别为56.9%(37/65)、21.5%(14/65)、9.2%(6/65)和7.7%(5/65)。14株多重耐药菌株共有9个MLST型别,包括4株ST16、2株ST81和2株ST480菌株,且相同ST型别的粪肠球菌有相似的耐药谱和毒力基因携带情况。结论四川省自贡市肉及其制品中相同ST型别的粪肠球菌有相似的耐药谱和毒力基因携带情况,应重视肉及其制品中耐药粪肠球菌对公众健康的潜在威胁。     

牦牛奶酪中乳酸菌对抗生素的药敏性

分析牦牛奶酪中乳酸菌对常用抗生素的药敏性。采用纸片扩散法测定分离自牦牛奶酪的39 株乳酸菌对8 种常用抗生素的药敏性。结果表明：39 株乳酸菌都有耐药性,主要对万古霉素、新霉素、链霉素和萘啶酮酸有抗性,抗性菌株分别达到了36 株（92.3%）、32 株（82.1%）、38 株（97.4%）和39 株（100%）,菌株的耐药性有一定的种间差异,部分菌株有多重耐药性。     

广西生榨米粉中益生乳酸菌的筛选及鉴定

通过革兰氏染色、过氧化氢酶试验、溶血性试验、耐酸、耐胆盐试验及体外抗氧化能力测定从广西本地传统发酵食品生榨米粉中筛选优良益生乳酸菌，对其生长情况及产酸性能进行测定，并通过分子生物学技术对其进行鉴定。结果表明，共分离得到146株γ-溶血乳酸菌，其中22株乳酸菌对pH 2.0和0.3%胆盐均具有良好耐受性，且乳酸菌PM20、PM22、FD13及PM44的综合体外抗氧化能力较好。4株菌株的生长及产酸趋势一致，其中菌株PM44的生长速度和产酸能力最强。经鉴定菌株PM20、PM22、FD13均为发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentum），菌株PM44为乳酸片球菌（Pediococcus acidilactici）。     

乳球菌属对抗生素最小抑菌浓度的分析

抗生素与乳酸菌一直被人们所关注,乳酸菌作为功能性发酵剂以及益生菌应用于发酵食品和饲料中并且安全性使用史的时间很自中国不同地区不同乳源的明串珠球菌属、乳球菌属、肠球菌属及嗜热链球菌属等4个种属的26株乳球菌为研究对象,采用16S rRNA对其进行基因序列的分析鉴定;用最小抑菌浓度(MIC,Minimum Inhibitory Concentration)法对其进行10种分别属于氨基糖苷类、四环素类、氟喹诺酮类、糖肽类、大环内酯类、苯丙醇类和安莎霉素类7类常见抗生素耐药性以及敏感性的解析,探讨不同抗生素对不同乳酸菌菌株的耐药性。结果表明,属于4个种属的26株乳球菌菌株对属于7类的10种常见抗生素的耐药性均有不同。本实验结果可以为人们在使用抗生素与乳酸菌时提供一定的参考,并在其共同应用过程中更合理化和安全化。     

自然发酵酸菜汁中乳杆菌的分离鉴定

通过选择性培养和形态学观察,从分别采自辽宁省阜新、葫芦岛、兴城、营口、锦州的5份传统发酵酸菜汁中,分离纯化和筛选出4株具有耐酸特性的乳杆菌疑似菌株(HLD1-3、YK1-2、JZ6-3、XC4-4),并对其进行运动性、过氧化氢酶、石蕊牛乳、明胶液化、不同温度生长、不同NaCl质量浓度生长、糖发酵实验等传统生理生化鉴定和16S rDNA序列分析,进一步鉴定其属种。二者结果均表明：4株耐酸乳酸菌均属于乳杆菌属,其中,HLD1-3和YK1-2属于乳杆菌属的清酒乳杆菌种,而JZ6-3和XC4-4属于乳杆菌属的植物乳杆菌种。由此可以推断,东北自然发酵酸菜可作为潜在益生乳酸菌分离筛选的资源库。     

内蒙古传统发酵乳制品中乳酸菌的分离及其耐药性研究

以内蒙古通辽地区自制的奶豆腐和酸性奶油（乌日莫）为材料,采用稀释涂布法从中分离乳酸菌,通过分子生物学技术对其进行菌种鉴定,并对其耐药性进行研究。结果表明,共分离纯化得到80株乳酸菌,经鉴定,归属于13个种,分别为短乳杆菌（Lactobacillus brevis）、粪肠球菌（Enterococcus faecalis）、乳酸片球菌（Lactobacillus acidilacticii）、乳酸乳球菌（Lactococcus lactis）、瑞士乳杆菌（Lactobacillus helveticus）、屎肠球菌（Enterococcus faecium）、戊糖片球菌（Pediococcus pentosaceus）、副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei）、食二酸乳杆菌（Lactobacillus digitalis）、奥塔基乳杆菌（Lactobacillus ottaki）、耐久肠球菌（Enterococcus durans）、植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）、开菲尔乳杆菌（Lactobacillus kefir）,表现出高的生物多样性。80株乳酸菌对萘啶酸的耐药率为100%;对链霉素、环丙沙星、万古霉素的耐药率较高,分别为95.00%、80.00%、72.50%;对利福平和四环素的耐药率中等,分别为51.25%,45.00%;对红霉素、氯霉素的耐药率较低,分别为26.25%、23.75%。此外,76株（95%）的乳酸菌还具有多重耐药性。     

冷藏鲜肉中腐败乳酸菌的分离及鉴定

利用稀释平板法从冷藏3 d的肉样品中共分离出60株疑似乳酸菌菌株,经过2次划线分离,然后进行革兰氏染色、镜栓、过氧化氢酶试验、明胶液化试验、硝酸盐还原试验和H2S检验,得到36株乳酸菌.将分离出的这36株乳酸菌,经过形态学和生理生化鉴定,确定他们属于5大类,即清酒乳杆菌,13株;马里乳杆菌,8株;消化乳杆菌,7株;口乳杆菌,4株;未知乳杆菌,4株.     

南美白对虾肠道内乳酸菌的分离鉴定及其对抗生素的耐药性

以南美白对虾为研究对象,采用平板分离法从其肠道内筛得26株乳酸菌,通过16S rRNA测序鉴定可归为4种:乳酸乳球菌乳亚种L. lactis subsp. lactis、台湾乳球菌L. taiwanensis、格式乳球菌L. garvieae、乳酸乳球菌L. lactis。选取7株具有代表性的乳酸菌,用PCR的方法检测对虾中检出率较高的6类18种抗性基因(ARGs)在乳酸菌中的分布,辅以平板涂布的方法用抗生素选择性培养基研究乳酸菌对抗生素的耐药性。研究发现:7株乳酸菌具有相似的耐药谱,对四环素、磺胺吡啶、乙酰螺旋霉素表现出耐药性(抑菌率50.00%),对盐酸金霉、土霉素、硫酸庆大霉素、氯霉素、红霉素敏感(抑菌率100%);含有多重抗性基因,ARGs的检出率:磺胺类(92.86%)四环素类(53.06%)喹诺酮类(23.81%)氨基糖苷类(4.76%)氯霉素类=大环内酯类(0.00%),其ARGs基因型与菌株的抗生素表型并不能完全吻合。     

酸乳用乳酸菌抗生素耐药性研究

旨在通过纸片扩散法对乳酸菌菌株耐药情况进行研究。对48份酸乳发酵剂中的乳酸菌进行分离鉴定,共分离出63株乳酸菌,其中嗜热链球菌43株、德氏乳杆菌保加利亚亚种20株。结果表明:63株乳酸菌对临床使用率较高的12种抗生素呈现不同程度的耐药性,其中,青霉素(36.51%)、复方新诺明(33.33%)、链霉素(28.57%)、氨苄西林(26.98%)、环丙沙星(20.63%),同时52.38%(33/63)的菌株具有多重耐药性,其中嗜热链球菌对12种抗生素的多重耐药性(30.23%)显著低于德氏乳杆菌保加利亚亚种(100%)。     

富集钙乳酸菌的筛选、鉴定及安全性评价

采用传统培养分离法从新疆发酵酸奶中分离乳酸菌菌株，通过钙富集量、耐受性与黏附能力测定筛选性能优良的富集钙菌株，通过抗生素敏感性、溶血活性与硝基还原酶产生能力测定进行安全性评价，并采用形态观察及分子生物学技术进行菌种鉴定。结果表明，共分离出40株乳酸菌，均具有钙富集能力，其中菌株M5、M18、M24的钙富集能力较好，分别为41.90 mg/g、49.37 mg/g、52.60 mg/g，且对酸和胆盐具有耐受性；菌株M24在氯仿中疏水性高(44.12%)，菌株M18在二甲苯中疏水性高(37.14%)，菌株M5、M24的自凝聚能力均>80%;3株菌株经人工胃肠液消化，活菌数均>6×10⁷ CFU/mL;3株菌株对氯霉素、克林霉素、氨苄西林、红霉素敏感，溶血试验阴性且不产生硝基还原酶，为安全菌株。经鉴定，菌株M5、M18、M24分别为发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)、乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)和植物乳杆菌(Lactiplantibacillus plantarum)。     

Assessment of antibiotic susceptibility within lactic acid bacteria strains isolated from wine

Susceptibility to 12 antibiotics was tested in 75 unrelated lactic acid bacteria strains of wine origin of the following species: 38 Lactobacillus plantarum, 3 Lactobacillus hilgardii, 2 Lactobacillus paracasei, 1 Lactobacillus sp, 21 Oenococcus oeni, 4 Pediococcus pentosaceus, 2 Pediococcus parvulus, 1 Pediococcus acidilactici, and 3 Leuconostoc mesenteroides. The Minimal Inhibitory Concentrations of the different antibiotics that inhibited 50% of the strains of the Lactobacillus, Leuconostoc and Pediococcus genera were, respectively, the following ones: penicillin (2, < or =0.5, and < or =0.5 microg/ml), erythromycin (< or =0.5 microg/ml), chloramphenicol (4 microg/ml), ciprofloxacin (64, 8, and 128 microg/ml), vancomycin (> or =128 microg/ml), tetracycline (8, 2, and 8 microg/ml), streptomycin (256, 32, and 512 microg/ml), gentamicin (64, 4, and 128 microg/ml), kanamycin (256, 64, and 512 microg/ml), sulfamethoxazole (> or =1024 microg/ml), and trimethoprim (16 microg/ml). All 21 O. oeni showed susceptibility to erythromycin, tetracycline, rifampicin and chloramphenicol, and exhibited resistance to aminoglycosides, vancomycin, sulfamethoxazole and trimethoprim, that could represent intrinsic resistance. Differences were observed among the O. oeni strains with respect to penicillin or ciprofloxacin susceptibility. Antibiotic resistance genes were studied by PCR and sequencing, and the following genes were detected: erm(B) (one P. acidilactici), tet(M) (one L. plantarum), tet(L) (one P. parvulus), aac(6')-aph(2") (four L. plantarum, one P. parvulus, one P. pentosaceus and two O. oeni), ant(6) (one L. plantarum, and two P. parvulus), and aph(3')-IIIa (one L. plantarum and one O. oeni). This is the first time, to our knowledge, that ant(6), aph(3')-IIIa and tet(L) genes are found in Lactobacillus and Pediococcus strains and antimicrobial resistance genes are reported in O. oeni strains.