乳酸对主要发炎和抗炎细胞因子的影响

目的:通过不同给药途径观察及评价了乳酸对小鼠血清中IL-6、IFN-γ、IL-1β、TNF-α、IL-10、IL-4水平的影响,进而研究了乳酸对免疫系统的调节作用。方法:通过灌胃、腹腔注射、尾静脉注射三种途径给小鼠乳酸,分别在给药4、3、3h后取血分离血清,采用ELISA法检测血清中IL-6、IFN-γ、IL-1β、TNF-α、IL-10、IL-4的含量。结果:实验组三种给药途径对小鼠血清中IL-6、IFN-γ、IL-1β、TNF-α、IL-10、IL-4与对照组相比都有显著性变化,给药组小鼠血清中IL-6、IFN-γ、TNF-α、IL-10、IL-4含量明显高于相应的对照组,IL-1β含量显著低于对照组。结论:三种给药途径中腹腔注射的效果最为明显,静脉注射及灌胃组次之。乳酸菌发酵产物的免疫调节作用可能是通过其代谢产物--乳酸发挥作用,乳酸通过对肠粘膜系统细胞细胞因子网络和信号传递系统的调节发挥免疫调节和生理功能。     

酸马奶中乳杆菌MG2-1株的抗氧化作用研究

应用分离自酸马奶,并经过耐酸性实验、人工胃肠消化液中存活能力筛选的L.acidophilus MG2-1,制备成热致死菌体和活菌制剂后灌服大鼠至28 d,测定大鼠肝脏组织匀浆和血清SOD,GSH-PX活力和MDA含量.结果表明,活菌制剂能够使大鼠肝脏组织匀浆中SOD活力和GSH-PX活力活力均明显提高,与对照组比较分别达到显著（P＜0.05）和极显著（P＜0.01）水平;大鼠血清中GSH-PX活力显著提高（P＜0.05）.L.acidophilus MG2-1活菌制剂能够显著地降低大鼠血液和肝脏组织匀浆中MDA含量（P＜0.05）.L.acidophilus MG2-1活菌制剂的抗氧化作用优于热致死菌体制剂.本研究证明来源于传统酸马奶的乳杆菌具有一定的抗氧化生理活性作用.     

酸马奶中干酪乳杆菌发酵特性的研究

研究了从内蒙古锡林浩特传统发酵酸马奶中分离4株(Lb.caseiZL3-1,Lb.caseiZL3-4,Lb.caseiZhang和Lb.caseiXM2-1)具有潜在益生特性的干酪乳杆菌的发酵特性。结果表明,37℃发酵24h结束后,干酪乳杆菌发酵乳滴定酸度为79.75°T,pH值变化在4.52～4.26之间。Lb.caseiZL3-1,Lb.caseiZL3-4,Lb.caseiZhang和Lb.caseiXM2-1在发酵结束的活菌总数分别为8.11×108,8.53×108,9.61×108和5.30×108mL-1,其中Lb.caseiZhang活菌数为最高。24h发酵结束时,Lb.caseiZL3-1,Lb.caseiZL3-4,Lb.caseiZhang和Lb.caseiXM2-1的黏度分别为0.1830,0.2957,0.1167和0.2497Pa.s。发酵过程中质量分数为12%的TCA可溶性氮无明显增加,4株干酪乳杆菌的蛋白水解力无显著性差异(P>0.05)。     

乳双歧杆菌V9对头孢曲松钠作用小鼠肠道菌群的变化

该研究主要探讨了乳双歧杆菌V9对头孢曲松钠作用的小鼠肠道菌群的变化。头孢曲松钠连续灌胃5 d建立小鼠肠道菌群失调的模型,然后随机分为4组,分别为模型组及低、中和高剂量组。低、中和高剂量组灌胃不同剂量乳双歧杆菌V9溶液,另设正常对照组,与模型组灌胃等体积生理盐水,连续灌胃23 d。灌胃结束后,采集小鼠的粪便进行活菌计数和16S rDNA测序,检测粪便中微生物组成及分布,测定血清中IL-1β、IL-6、TNF-α以及IL-2的含量,测定小肠及肝脏组织中SOD、MDA、GSH、GSH-Px的含量,HE染色观察小鼠小肠组织病理学变化。结果表明,灌胃乳双歧杆菌V9溶液后,中、高剂量组IL-1β、IL-6、TNF-α及IL-2的含量分别显著降低31.73、17.04、12.57及31.71 pg/mL;高剂量组小肠及肝脏组织中MDA含量显著降低（p<0.01）,中、高剂量组SOD、GSH及GSH-Px均极显著升高（p<0.01）。同时,乳双歧杆菌V9使得头孢曲松钠导致的小鼠肠道菌群失调得到明显改善,粪便活菌计数显示高剂量组肠杆菌数量显著降低0.34 lg cfu/g,乳杆菌及双歧杆菌数量显著增加,分别增加0.40 lg cfu/g和0.26 lg cfu/g。拟普雷沃菌属和魏斯氏菌丰度显著降低（p<0.01）。说明乳双歧杆菌V9对由头孢曲松钠引起的肠道菌群失衡具有一定的调节作用,并调节菌群多样性。     

牛磺酸对顺铂所致H22荷瘤小鼠免疫器官及淋巴细胞损伤的保护作用

目的：研究牛磺酸对顺铂化疗荷瘤小鼠免疫器官和淋巴细胞损伤的保护作用。方法：H22荷瘤小鼠随机分为5 组：模型对照组、顺铂（1.5 mg/（kg·d））化疗组、顺铂＋高剂量（640 mg/（kg·d））牛磺酸组、顺铂＋中剂量（320 mg/（kg·d））牛磺酸组和顺铂＋低剂量（160 mg/（kg·d））牛磺酸组,末次用药24 h后眼球放血处死小鼠,测定小鼠体质量、瘤质量、脾脏指数、胸腺指数以及血清白细胞介素-2（interleukin-2,IL-2）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、干扰素-γ（interferon-γ,IFN-γ）水平,胸腺依赖性淋巴细胞（thymusdependent lymphocyte,T细胞）、骨髓依赖性淋巴细胞（bone marrow dependent lymphocyte,B细胞）增殖能力的变化情况。结果：顺铂化疗组小鼠体质量和瘤质量均明显低于模型对照组,抑瘤率为36%,顺铂＋中、高剂量牛磺酸组小鼠的体质量显著高于顺铂化疗组,抑瘤率分别达到51%和68%;顺铂化疗组小鼠的脾脏质量和脾脏指数明显低于模型对照组,而顺铂＋各剂量牛磺酸组小鼠的脾脏质量和脾脏指数均高于顺铂化疗组;顺铂化疗组小鼠的胸腺质量和胸腺指数明显低于模型对照组,顺铂＋高剂量牛磺酸组小鼠的胸腺质量和胸腺指数明显高于顺铂化疗组;顺铂化疗组小鼠血清IL-2、IFN-γ和TNF-α的分泌水平明显低于模型对照组（P＜0.01）;而顺铂＋各剂量牛磺酸组血清IL-2、IFN-γ和TNF-α的水平均高于顺铂化疗组;顺铂可明显抑制荷瘤小鼠对丝裂原刺激的T细胞和B细胞的增殖,顺铂＋高剂量牛磺酸组小鼠的T细胞刺激指数明显高于顺铂化疗组（P＜0.05）;而顺铂＋低、中剂量牛磺酸组小鼠的B细胞刺激指数则高于顺铂化疗组。结论：牛磺酸可协同顺铂发挥抑制肿瘤的作用,其机制与保护顺铂导致的动物免疫器官和淋巴细胞功能损伤有关。     

牦牛酸乳分离发酵乳杆菌发酵豆浆的胃溃疡预防效果研究

以采自川西青藏高原的自然发酵牦牛酸乳样品中分离纯化得到的1 株发酵乳杆菌（Lactobacillusfermentum Zhao,LFZ）作为研究对象,探索比较其与商业用嗜热链球菌（Streptococcus thermophilus,ST）发酵豆浆的胃溃疡预防效果。通过利血平诱导胃溃疡小鼠模型,LFZ组小鼠的IL-6、IL-12、TNF-α和IFN-γ细胞因子低于ST组小鼠;血清生长抑素和血管活性肠肽水平高于ST组,胃动素和P物质水平低于ST组,且LFZ组小鼠胃溃疡面积也低于ST组小鼠。由此可知,Lactobacillus fermentum Zhao发酵豆浆的品质优于标准嗜热链球菌发酵豆浆,且其对胃溃疡有很好的预防效果。     

螺旋藻多糖通过腹腔黏膜对小鼠产生的免疫调节作用

目的：分析螺旋藻多糖3 种不同给药途径对小鼠血清中24 种细胞因子的影响,进而研究螺旋藻多糖对小鼠的免疫调节作用。方法：通过灌胃、腹腔注射、尾静脉注射3 种途径分别给小鼠不同剂量的螺旋藻多糖,对照组给与实验组同等体积的生理盐水。灌胃组在3h 后眼球取血,腹腔注射和尾静脉注射组在2h 后眼球取血,分离血清,采用Millipore 小鼠细胞因子试剂盒和液体芯片扫描仪检测血清中24 种细胞因子的浓度。结果：3 种给药方式小鼠的IL-1α、IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ等炎症细胞因子都有不同程度的显著性升高,说明螺旋藻多糖对炎症细胞因子的分泌和先天免疫有促进作用。其中,腹腔注射螺旋藻多糖对细胞因子的影响最为显著,这种方式的信号传导途径主要包括NF- κB、MAPK、JAK/STAT 等。结论：从螺旋藻多糖对小鼠细胞因子的影响来看,总体上表现出促进免疫的作用,推测螺旋藻多糖主要是通过对肠黏膜系统的受体相互作用,刺激相应细胞产生细胞因子来发挥其免疫调节作用和多种生理功能的。     

鼠曲草总黄酮抑制疼痛模型小鼠炎症因子产生而致镇痛作用

目的：研究鼠曲草总黄酮的镇痛活性及其作用机制。方法：采用热板刺激、腹腔注射醋酸法构建小鼠疼痛模型,观察灌胃给予不同剂量的鼠曲草总黄酮对小鼠疼痛反应的作用,研究鼠曲草总黄酮对疼痛小鼠血清中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）、一氧化氮（nitric oxide,NO）的作用,以及对腹腔巨噬细胞TNF-α、IL-6、诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）基因表达的影响。结果：鼠曲草总黄酮可明显延长热刺激引起的小鼠舔足时间,抑制腹腔注射醋酸后引起的小鼠扭体反应;降低腹腔注射醋酸致痛小鼠血清中TNF-α、IL-6、NO的含量,也抑制小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α、IL-6、iNOS基因表达。结论：鼠曲草总黄酮具有镇痛作用,其作用与减少血清中炎症因子的产生和巨噬细胞介导的炎症反应有关。     

乳杆菌对小鼠脾脏淋巴细胞增殖的影响

目的：体外评估7 种乳杆菌的免疫作用,探讨小鼠离体脾脏淋巴细胞在筛选免疫活性乳酸菌中应用的可行性。方法：用MTT 法观察不同种属、不同剂量的活性和热致死乳杆菌对小鼠脾脏淋巴细胞增殖能力的影响。结果：活性和热致死乳杆菌单独作用都能促进体外淋巴细胞增殖且均表现出剂量依赖关系,当活性和热致死乳杆菌剂量为107CFU/mL 时(即细菌与细胞的比例为10:1)的效果最为明显(P＜ 0.05),且活菌制剂的免疫调节作用优于热致死菌体 (P ＜ 0.05),其中活性罗伊氏乳杆菌、约氏乳杆菌和发酵乳杆菌刺激淋巴细胞的增殖指数(PI 值)明显较ConA诱导组高(P ＜ 0.05)。结论：正常离体小鼠脾脏淋巴细胞可用于体外初步筛选具有潜在免疫活性的乳杆菌,从而缩小用于动物实验的目标菌株的范围。     

植物乳杆菌C88联合人参多糖的免疫调节作用

以环磷酰胺诱导昆明小鼠建立免疫抑制模型后,分别给其灌胃人参多糖、人参多糖联合植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）C88。实验结束后,采用酶联免疫吸附实验检测了小鼠血清中的白细胞介素-2（interleukin-2,IL-2）、白细胞介素-4（interleukin-4,IL-4）、白细胞介素-10（interleukin-10,IL-10）、干扰素-γ（interferon-γ,IFN-γ）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、免疫球蛋白G（immunoglobulin G,IgG）,并利用碳廓清法检测了小鼠吞噬细胞吞噬能力,评价了人参多糖（water-soluble ginseng polysaccharides,WGPA）联合植物乳杆菌C88的体内免疫调节作用。结果表明WGPA联合益生菌C88可明显增强免疫抑制小鼠吞噬细胞的吞噬能力和迟发型超敏反应,显著上调血清中IL-2、IL-4、IFN-γ、TNF-α、IgG水平,下调IL-10水平,并呈现剂量依赖性,且联合用药组的作用明显强于人参多糖WGPA单独用药组。综上所述,植物乳杆菌C88联合人参多糖可以发挥一定的免疫调节作用。     

酸马奶中乳杆菌Lb.casei.Zhang和ZL12-1的16S rDNA基因序列及聚类分析

利用遗传学方法对分离自内蒙古锡林郭勒盟牧区采集的酸马奶样品中的乳杆菌Lb．casei．Zhang和ZL12-1的16S rDNA扩增与测序．并将结果与同属的乳杆菌作同源性分析，建立系统发育树，以求更准确地确定其归属，为益生菌的筛选奠定基础。结果表明，菌株Lb.casei.Zhang标准菌株Lb．casei ATCC334^T同源性为100％，菌株zLl2—1与标准Lb.gallinanum ATCC 33199^T的同源性为98％。结合系统发育树及16S rDNA的部分序列分析结果，将Lb.casei.Zhang判定为Lb．caseissubsp.casei.ZL12-1鉴定为Lb.gallinanum，这与传统分类方法所得鉴定结果一致。     

转Bt玉米暴露对亲代及子代大鼠免疫细胞分型及细胞因子的影响

为研究转苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)基因抗虫玉米长期食用对大鼠免疫的影响,以其亲本非转基因玉米饲料及商业饲料为对照,分别采用流式细胞术及液相芯片法检测喂养90 d后亲代及子代刚断乳大鼠外周血、脾脏免疫细胞分型及相关血清细胞因子的表达。结果发现,转Bt基因抗虫玉米饲料组亲代大鼠外周血和脾脏及子代脾脏各淋巴细胞亚群(CD4~+、CD8~+、TCRαβ~+、TCRγδ~+)的细胞数量比例及亲代血清中10种细胞因子表达水平均与非转基因玉米饲料组无显著差异(P0.05);子代外周血B淋巴细胞数量比例显著增高,巨噬细胞炎症蛋白-1α、单核细胞趋化因子-1β、白细胞介素-5表达水平明显降低(P0.05)。结果表明:转Bt基因抗虫玉米暴露90 d对亲代大鼠免疫系统影响不大;对子代刚断乳大鼠的细胞免疫及体液免疫有一定的影响。     

利用Lactobacillus casei Zhang开发益生菌新鲜干酪

通过添加不同比例Lactobacillus casei Zhang发酵剂制作新鲜干酪,并对其在新鲜干酪中的活力和添加Lactobacillus后新鲜干酪的理化性质进行了研究。结果表明,Lb.casei Zhang在新鲜干酪中具有较高的活力,添加2%、1%、0.5% Lb.casei Zhang发酵剂的干酪中,4℃冷藏开始前,Lb.casei Zhang活菌数分别为2.24×10~8 cfu/g,1.38×10~8 cfu/g,5.55×10~7 cfu/g,4℃冷藏28d后,Lb.casei Zhang存活率分别为99.12%,98.31%,98.61%。在制作过程中和4℃冷藏过程中,与空白组相比,添加Lb.casei Zhang对新鲜干酪的pH值、滴定酸度、蛋白水解活性影响都不显著(P>0.05)。     

螺旋藻蛋白酶解肽对腹腔粘膜系统的作用

目的：探索螺旋藻(Spirulina)碱性蛋白酶酶解肽对家兔腹腔黏膜系统的作用。方法：采用盐析法从螺旋藻中提取可溶性螺旋藻蛋白,以碱性蛋白酶水解得到螺旋藻蛋白水解物溶液。将所得水解物以3 种方式(口服、腹腔注射、耳静脉注射)对家兔给药,分别在给药3、2、2h 后,用ELISA 试剂盒测定血清中IL-1β、IL-6、IL-12、IFN-γ、TNF-α、IL-1Ra、IL-4、IL-10、TGF- β细胞因子的质量浓度。结果：3 个实验组与正常生理盐水组相比,IL-12 质量浓度均下降,IFN-γ、IL-10 质量浓度均升高;在3 种给药方式中,腹腔注射效果最显著,其他两组细胞因子水平均没有显著性变化。腹腔注射组中炎症细胞因子IL-1β、IL-6、IL-12、TNF-α的质量浓度均显著性降低,抗炎细胞因子IL-1Ra 和IL-4 显著性升高,说明该螺旋藻碱性蛋白酶酶解肽对降低免疫活性起到了一定作用。结论：肠黏膜系统对螺旋藻蛋白酶解肽信号传递主要是通过肠道上皮细胞、内皮细胞及单核/ 巨噬细胞、淋巴细胞之间的信号网络抑制NF- κB 和PKC/p38/MAPK 途径来降低免疫的。这与植物非营养物质能够通过抑制转录因子NF- κB 活性抑制炎症信号级联的作用机制相一致,说明短肽类成分也可以进入体内对机体的慢性疾病甚至癌症起到一定的治疗作用。     

瑞士乳杆菌对小鼠肠道粘膜免疫应答及细胞因子的影响

探讨灌胃瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus TS206)发酵制品对健康Balb/c 小鼠肠道黏膜免疫应答及细胞因子的影响。本实验将Balb/c 小鼠分为空白对照组、生理盐水组和瑞士乳杆菌组3 组,瑞士乳杆菌组的灌胃剂量为108CFU/mL,分别在灌胃后0 、1 、2、3 、4 、6 、8、12、24h 处死小鼠得到小肠组织样品,利用RIA 法和ELISA 法测得各组小鼠肠道黏膜SIgA 和细胞因子的含量,并作统计分析。结论：灌胃组小鼠肠道黏膜中SIgA 的含量与生理盐水对照组相比差异极显著(P ＜ 0.01);灌胃组小鼠肠道黏膜中IL-2 和IFN-γ的含量与生理盐水对照组相比具有显著性差异(P ＜ 0.05);灌胃组IL-4 与生理盐水对照组相比含量明显升高(P ＜ 0.05);而灌胃组和生理盐水对照组相比IL-6 的表达水平后期差异不显著(P ＞ 0.05);IFN-γ/IL-4 的值处于相互拮抗的状况,表明瑞士乳杆菌对健康小鼠具有维护肠黏膜免疫平衡的作用,也对保持Th1/Th2 平衡状态具有明显的作用,即证实瑞士乳杆菌作为益生菌具有调控小鼠肠道黏膜免疫应答的功效。     

ω-6亚油酸对小鼠免疫系统的调节作用

目的：探索ω-6 亚油酸对小鼠免疫系统的调节作用。方法：将市购的ω-6 亚油酸以口服、腹腔注射、耳静脉注射3 种方式作用于小鼠,分别在3、2、2h 后取血分离血清,用液体芯片检测技术测定小鼠血清中的IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-12(p40)、IFN-γ、G-CSF、MCP-1、VEGF 等24 种细胞因子含量的变化。结 果：灌胃组中显著升高的细胞因子有IL-1α、Eotaxin 和VEGF,显著降低的有IL-6、IL-12(p40)、G-CSF 和KC;腹腔注射组中炎症细胞因子IL-1 和IL-17 显著升高的同时也伴随着IL-4、IL-10 抗炎细胞因子的显著升高以及趋化因子G-CSF 的显著降低;静脉注射组总体表现为促炎作用,IL-2、IL-5、IL-6 浓度显著升高,抗炎细胞因子IL-3、IL-4、IL-9、IL-10、IL-12(p40)、IL-17 浓度显著降低。结论：ω-6 亚油酸能通过小鼠胃肠黏膜系统和血液系统传递信号,调节机体的免疫系统。灌胃组主要激活了PKC/NF- κB 途径以及STAT 的部分途径,抑制NF- κB、JAK-STAT3、PI3K 途径;腹腔注射组激活的信号途径有NF- κB、JNK\p38\MAPK、PI3K 和JAK\STAT6 途径,抑制STAT3 途径;静脉注射组激活的信号途径有NF- κB、MAPK 和JAK\STAT3。抑制的信号途径有PI3K/ATK、ERK/MAPK、STAT1、STAT4、STAT5。     

Impact of Autolytic and Proteolytic Lactobacilli and Nisin-Producing Culture on Proteolysis and Sensory Characteristics in Cheddar Cheese

ABSTRACT: Cheddar cheeses were made using a nisin-tolerant starter culture with either Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus UL12 (autolytic strain), Lactobacillus casei subsp. casei L2A (proteolytic strain), Lactococcus lactis subsp. lactis biovar. diacetylactis UL719 (nisin producer), or of Lb. bulgaricus UL12 and Lc. diacetylactis UL719. Lb. bulgaricus UL12 produced more trichloroacetic acid-soluble nitrogen than did Lb. casei L2A, which produced more phosphotungstic acid-soluble nitrogen than did Lc. diacetylactis UL719. High-performance liquid chromatography analyses showed that either lactobacilli or Lc. diacetylactis UL719 increased the hydrophilic and hydrophobic peptide contents. Cheeses containing both Lb. bulgaricus UL12 and Lc. diacetylactis UL719 had the most intense old Cheddar cheese flavor after 6 mo of ripening.