枯草芽孢杆菌B.subtilisML中性蛋白酶基因的克隆及鉴定

以蛋白酶高产菌株Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ ＭＬ为供体菌，提取其染色体ＤＮＡ，经限制性内切酶ＢａｍＨＩ完全酶切后，插入枯草杆菌载体ｐＮＱ１２２的相同酶切位点，连接后转化中性碱性蛋白酶基因双缺陷型菌株Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓＤＢ１０４。从含有氯霉素的酪蛋白平板上获得了２０个具有蛋白酶活性的克隆。     

啤酒酿造用复合酶的研制

从一系列枯草芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）和淀粉液化芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）出发，经筛选和诱变选育，得到一株淀粉液化芽孢杆菌突变株（ＷＬ－ＢＡ－ｌ），该菌株经三角瓶摇瓶和２０Ｌ发酵后，在３０００Ｌ标准通风罐上进行试验，菌株发酵周期短，发酵液中β－葡聚糖酶约为１２０ｕ／ｍｌ，α－淀粉酶约１５０ｕ／ｍｌ，蛋白酶约１８００ｕ／ｍｌ．发酵液经压滤浓缩后制得液体酶制剂。     

耐盐脱毛蛋白酶产生菌的研究：Ⅰ.耐盐脱毛蛋白酶产生菌的筛选

从已经开始掉毛的盐腌猪皮上筛选到一株可在８％盐浓度下生长的耐盐菌，该菌产生的蛋白酶具有较好的脱毛性能。经初步鉴定为芽孢杆菌，命名为Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．ｎｏ８１３。     

B.subtilis蛋白酶高产菌株的筛选与鉴定

本文以中性蛋白酶生产菌Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓＡＳ１．３９８为出发菌，用ＮＴＧ与紫外辐照相结合的方法对其进行复合诱变，筛选到一株蛋白酶活性明显高于出发菌的正突变株，命名为Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓＭＬ。通过对该突变株蛋白酶活性曲线的绘制、酶作用最适ＰＨ的确定、所产一的酶性质的分析及比酶活性的测定，发现该突变株扩酶活性比ＡＳ１．３９８至少高出３０％，最适反应ＰＨ７－８，酶活性受ＥＤＴＡ的强烈抑制，其突变位点很     

淀粉液化芽孢杆菌BS5582中性蛋白酶基因的克隆表达及其酶学性质研究

以一株高产中性蛋白酶的Bacillus amyloliquefaciens BS5582基因组DNA为模板,PCR扩增获得结构基因npr,构建质粒pPIC9K-npr,并转化到表达菌株毕赤酵母GS115中得到重组菌。经甲醇诱导发酵,测定中性蛋白酶活性。结果表明,目的基因大小为1566bp,在宿主中得到了成功表达,重组菌酶活力为9.17×103U/g,酶学性质分析表明,重组中性蛋白酶的最适反应温度为50℃,最适反应pH为7,在40℃中保温1h后仍能保持85%左右活性,在pH4～9的范围内稳定性较好,Ca2+、Mg2+、Mn2+离子对该酶有激活作用。     

几丁质酶基因在烟草栽培品种中的表达

利用多聚酶链式反应（ＰＣＲ）对来源于一种生物杀虫剂（ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ）的几丁质酶基因进行体外扩增，并插入载体质粒ｐＲＯＫ２中，然后转化大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）ＸＬ１Ｂｌｕｅ。用重组质粒ｐＲＯＫ２ＤＮＡ转化植物转基因载体——土壤农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉａｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）ＬＢＡ４４０４菌株。借助于土壤农杆菌侵染烟草叶圆片，将目的基因导入。通过组织培养诱导生芽和生根，获得烟草再生植株。利用含卡那霉素的培养基对再生烟株进行初步筛选。进一步ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹检测结果表明：转基因烟草中有几丁质酶基因和蛋白的表达。初步检测结果表明：转基因烟草具有较高的几丁质酶活性。     

碱性脱毛蛋白酶产生菌的选育

从富含蛋白质的土壤中筛选出的碱性蛋白酶产生菌，命名为Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．８（简称为Ｎｏ．８）。Ｎｏ．８菌能在ｐＨ６￣１２且含有较高浓度钙离子条件下生长并产酶，与目前的碱性蛋白酶生产菌如地衣芽孢杆菌２７０９相比，它具有较强的耐碱性和耐钙离子性。培养基起始ｐＨ值为７．５，接种菌龄为１８ｈ种子液２％，在３５￣３７℃，培养４８￣６０ｈ的条件下，Ｎｏ菌产生的蛋白酶活力可稳定在１７００￣１８００ｕ／ｍｌ，     

接种Bacillus coagulans低盐腌渍雪里蕻的探讨(Ⅰ)

文中研究了接种Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ低盐腌渍雪里蕻的腌渍效果。分别检测了腌渍过程中卤汁中的微生物变化及分析了一些理化指标变化。结果显示，接种Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ进行腌渍，可使盐分添加量由传统方法的８％￣１０％降至５％，且接种后腌菜中的溶氧量和ｐＨ下降较快，产酸量增加快而显著，接种后也能明显促进乳酸菌快速生长繁殖，有效地抑制酶母和霉菌的生长，研究结果为雪里蕻低盐化腌渍工     

二种重组α-乙酰乳酸脱羧酶在啤酒生产中降低双乙酰的作用

利用已构建的含有短芽胞杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｂｒｅｖｉｓ）和产气肠杆菌（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒａｅｒｏｇｅｎｅｓ）、α -乙酰乳酸脱羧酶（α -ａｃｅｔｏｌａｃｔａｔｅｄｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ,α -ＡＬＤＣ）基因的工程菌株 ,并使它们分别在大肠杆菌中高效表达 ,获得重组α -ＡＬＤＣ。在实验室 ,用２Ｌ体积的麦芽汁进行啤酒生产试验 ,添加２种重组α -ＡＬＤＣ后 ,使啤酒中的双乙酰含量快速下降到或始终保持在０．１ｍｇ／Ｌ以下。证明得到的重组α -ＡＬＤＣ能有效地降低啤酒中双乙酰含量。这２种重组α -ＡＬＤＣ可进一…     

大麻酶法脱胶研究

用Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｐ．Ｎｏ．７４菌发酵生产的粗酶制剂作大麻纤维脱胶试验，比较了预处理方式脱时间、酶用量及麻品种的脱胶效果，根据脱胶后纤维的残胶、纤维支数、纤维强力等指标，评估大麻酶法脱胶工艺条件。     

酶解南美白对虾下脚料制备抗氧化酶解液的研究

以南美白对虾加工下脚料(虾头虾壳)为原料,采用内源酶、中性蛋白酶,通过控制pH、水料比、酶解温度、酶解时间和酶用量等条件进行酶解,从而制取抗氧化酶解液,以还原能力、清除羟基自由基能力为指标选择最优的酶解条件。结果表明,内源酶最佳酶解条件为:pH为6,水料比为2∶1,酶解温度为40℃、酶解时间为6h,此时还原力为0.668,·OH清除率为67.24%;中性蛋白酶的最佳酶解条件为:酶用量为60U/g原料,pH为6,水料比为2∶1,酶解温度为60℃、酶解时间为5h,此时还原力为0.672,·OH清除率为68.43%。在最佳酶解条件下,两种酶解液的还原力与·OH清除率大小排列为:中性蛋白酶>内源酶,但两者相差不大,从经济能源的综合因素考虑,选用内源酶较合适。     

耐盐米曲霉制曲及复合酶分泌条件的研究

该文研究了耐盐米曲霉制曲的产酶特性,并且通过对耐盐米曲霉在不同作用条件下制得的曲料的蛋白酶活力和淀粉酶活力的变化分析,探讨了不同原料配比、水分添加量、制曲温度和蒸料时间等因素对耐盐米曲霉制曲效果的影响,为米曲霉在工业生产中的研究和应用提供理论依据.研究表明,耐盐米曲霉制曲产生的中性蛋白酶和碱性蛋白酶的酶活较高,酸性蛋白酶和淀粉酶酶活较低.复合酶分泌的最佳工艺条件为:原料配比为豆粕:麸皮=2:3,加水量为120％,蒸料时间为30min,30℃制曲42h,此条件下酸性蛋白酶和淀粉酶活力有明显的提高.     

花生粕酱油制曲工艺条件优化

以花生粕、小麦麸皮为原料制备花生酱油成曲,研究花生粕与小麦麸皮质量比、米曲霉（Aspergillus oryzae）As3.042接种量、制曲温度和制曲时间4个因素对花生粕酱油成曲中性蛋白酶酶活的影响,并通过单因素试验和响应面试验优化制曲工艺。结果表明,对中性蛋白酶活影响程度从大到小依次为制曲温度＞接种量＞原料质量比＞制曲时间。花生酱油成曲的最佳制曲工艺条件为：花生粕与小麦麸皮质量比8∶2,米曲霉接种量0.65%,制曲温度32 ℃、制曲时间24 h。在此优化条件下,成曲中性蛋白酶活为（2 493.67±7.70） U/g,酸性蛋白酶活为（596.84±23.12） U/g、糖化酶活为（29.91±2.63） U/g、淀粉酶活为（882.85±32.63） U/g、纤维素酶活为（11.72±3.69） U/g。     

响应面法优化牛皮酶法脱毛工艺

研究旨在探求复合酶脱毛的最优工艺条件,并为牛皮的开发利用提供了一定的理论基础。本试验以牛皮酶法脱毛过程中加酶方式、酶活力配比、酶液浓度、酶解时间、酶解pH、酶解温度等为研究因素,在单因素实验基础上进行复合酶脱毛方法,结合响应面法对复合酶脱毛工艺进行优化。结果表明,碱性蛋白酶和中性蛋白酶采用先后加入的酶解方式,得到了碱性蛋白酶和中性蛋白酶的最适酶活力配比、酶解温度、酶液浓度、酶解时间、pH值,测得综合评分为0.756。响应面法分析结果表明,酶解温度和酶液浓度的交互作用对脱毛效果的影响显著,而其他因素交互作用不显著。     

米曲霉Y6产中性蛋白酶和内切葡聚糖酶的研究

以提高中性蛋白酶和内切葡聚糖酶酶活为目的,优化了米曲霉Y6的制曲工艺。在单因素的试验基础上,采用正交试验优化的米曲霉Y6中性蛋白酶的最佳制曲工艺参数为温度30℃,接种量1.0×107个孢子/g干基,培养时间42h,含水量80%,其酶活达到3637U/g;内切葡聚糖酶的最佳制曲工艺参数为温度为30℃,接种量0.25×107个孢子/g干基,培养时间48h,含水量100%,其酶活达到810U/g。     

蛋白桑叶中蛋白质提取工艺优化及6种蛋白酶酶解物体外降血糖活性分析

为开发利用蛋白桑叶中蛋白质资源,对其蛋白质提取工艺及酶解物体外降血糖活性进行研究。本研究以蛋白桑叶为原料,采用超声辅助碱提酸沉法提取蛋白桑叶蛋白质。通过单因素实验和响应面法优化提取工艺,以α-葡萄糖苷酶抑制率为评价指标,分析不同蛋白桑叶蛋白酶解产物体外降血糖活性。结果表明,蛋白桑叶中蛋白质的最佳提取工艺为：氢氧化钠浓度0.125 mol/L、提取温度40℃、提取时间40 min和液料比37:1 mL/g。在此优化条件下,得到蛋白质提取率实际值为49.59%±0.45%,所得蛋白质等电点为pH3.5,吸水性为6.49±0.49 g/g,吸油性为2.59±0.06 g/g,乳化活性为7.40±0.17 m2/g,乳化稳定性为72.48%±3.03%。研究考察了蛋白桑叶蛋白质的复合蛋白酶酶解物、风味蛋白酶酶解物、碱性蛋白酶酶解物、胰蛋白酶酶解物、中性蛋白酶酶解物、木瓜蛋白酶酶解物体外降血糖活性,其中中性蛋白酶酶解物对α-葡萄糖苷酶抑制效果最佳,其IC₅₀=3.52 mg/mL。本研究认为,此蛋白桑叶蛋白质提取工艺稳定,中性蛋白酶解肽具有较高的体外降血糖活性,为进一步开发...     

芽孢杆菌的产酶特性及其对抗生素的耐受性

以4株枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）和2株地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）为研究对象,通过测定其成胞率、中性蛋白酶活性及对24种抗生素的耐受性,从中筛选优良芽孢杆菌。结果表明,从6株芽孢杆菌中筛选得到3株成胞率和产中性蛋白酶均较好的芽孢杆菌,分别为枯草芽孢杆菌BLCC1-0552、BLCC1-0615和地衣芽孢杆菌BLCC1-0441,液体发酵24 h后,成胞率较高,均达到98%;中性蛋白酶活性分别为90.58 U/mL、100.32 U/mL和24.72 U/mL。其中,枯草芽孢杆菌BLCC1-0615固体发酵玉米-豆粕型常规饲料产中性蛋白酶活力最高,发酵48 h时达到2 154.49 U/g。3株芽孢杆菌对抗生素的耐受性不一致,其中枯草芽孢杆菌BLCC1-0615对24种抗生素中的17种表现敏感,敏感率最高为70.83%。因此,确定优良菌株为枯草芽孢杆菌BLCC1-0615,其成胞率、产中性蛋白酶能力好及对抗生素耐受性较低,具有作为饲料添加剂应用于畜禽饲料中的潜力。     

酶解虾壳蛋白制备ACE 抑制剂的工艺优化

以虾壳粉为原料,以水解度和ACE抑制率为指标,利用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶进行酶解,其中中性蛋白酶和碱性蛋白酶有较高的ACE抑制活性,因此对碱性蛋白酶和中性蛋白酶的工艺条件进一步优化。结果表明：碱性蛋白酶酶解工艺优化条件为：温度60℃、pH9.5、底物质量浓度2.5g/100mL、加酶量4000U/g、酶解时间2.5h,在此条件下ACE抑制率最高,为67.70%,水解度为69.79%;中性蛋白酶酶解工艺优化条件为：温度50℃、pH7.0、底物质量浓度2.5g/100mL、加酶量2000U/g、酶解时间2h,在此条件下ACE抑制率最高,为84.04%,水解度为26.76%。提示中性蛋白酶酶解能够产生更多的ACE抑制肽,是酶解虾壳蛋白制备ACE抑制肽的较优酶。     

高产中/碱性蛋白酶的枯草芽孢杆菌W1菌株的筛选及条件优化

为了筛选高产蛋白酶活性细菌,以大豆及其发酵制品为目标样品,采用酪蛋白平皿筛选到一株既可产中性蛋白酶又可产碱性蛋白酶的细菌菌株W1,经形态学及16S rDNA基因序列分析鉴定为枯草芽孢杆菌枯草亚种(Bacillus subtilis subsp. Subtilis),其产中性蛋白酶和碱性蛋白酶活力分别为28.99 U/mL和33.19 U/mL。通过单因素试验对其产蛋白酶的培养条件进行初步优化,并在此基础上以总蛋白酶活力为指标对其产蛋白酶条件进一步进行正交试验优化,最佳条件为培养基初始pH 9.0,接种量4%,培养温度35℃,培养时间48 h,此条件下中性蛋白酶活力为40.39 U/mL,碱性蛋白酶活力为52.02 U/mL,总蛋白酶活力为92.41 U/mL,优化后相应酶活力分别提高了39.3%、56.7%和48.6%,这将为枯草芽孢杆菌W1菌株蛋白酶的酶学性质研究提供帮助,同时也是对蛋白酶活性枯草芽孢杆菌资源库的丰富。     

马氏珍珠贝肉固体发酵制曲条件的优化

以马氏珍珠贝为米曲霉制曲原料,蛋白酶活力为指标,研究了珍珠贝蒸煮条件、曲料碳源、曲料初始水分含量、培养温度、培养时间对成曲中性和酸性蛋白酶活力的影响.结果表明,米曲霉珍珠贝固体发酵制曲的最优条件为:珍珠贝肉121℃蒸煮10min、曲料初始水分51.89％(m/m)、曲精接种量0.5％(m/m)、培养温度32℃、培养时间...