杨梅多酚对晚期糖基化终末产物的抑制作用

晚期糖基化末端产物(AGEs)是美拉德(Maillard)反应的产物之一,是蛋白质游离氨基与还原糖羰基反应形成的一类复杂物质的总称。较多研究表明植物多酚能够很好地抑制AGEs的形成。为了探究杨梅多酚抑制AGEs形成的能力并探讨其抑制机理,建立牛血清蛋白(BSA)-葡萄糖(Glucose)生成AGEs模拟反应体系。以纯度69.24%(DW)的杨梅多酚提取物(BP)为抑制剂,测定反应体系中荧光性AGEs和甲基乙二醛的变化,以及蛋白质羰基、巯基含量变化,·OH诱导生成的AGEs的变化。研究结果表明:杨梅多酚在BSA-Glucose模拟反应体系中对荧光性AGEs具有较强的抑制作用,且效果优于氨基胍和维生素E(P0.05),与茶多酚相当;杨梅多酚浓度越高对AGEs的抑制作用越强(P0.05),当其质量浓度为100μg/mL时,对荧光性AGEs的抑制率达97.6%。基于模拟体系中重要中间体甲基乙二醛的变化,蛋白质羰基和巯基含量的变化初步明确杨梅多酚对AGEs形成的抑制途径,即杨梅多酚通过清除模拟体系中的羟自由基、甲基乙二醛中间体,以及保护蛋白质巯基,抑制蛋白羰基化,减少蛋白质交联来阻断AGEs的形成。     

桑椹花色苷对晚期糖基化末端产物抑制作用及其机制分析

晚期糖基化末端产物(Advanced Glycation End Products,AGEs)是蛋白质游离氨基与还原糖羰基反应形成的一类复杂物质的总称,是诱发糖尿病等多种慢性病的重要因素之一,而多酚类化合物能够抑制AGEs的形成。为了探讨桑椹花色苷对AGEs的抑制机制,建立牛血清蛋白(BSA)/葡萄糖(Glucose)生成AGEs模拟反应体系,以0.5%酸性乙醇提取、AB-8型大孔树脂纯化的桑椹花色苷为抑制剂,测定反应体系中蛋白质羰基、巯基含量变化、羟基自由基(·OH)对AGEs形成的影响,利用SDS-PAGE凝胶电泳技术分析BSA的分子量变化。研究结果表明,随着桑椹花色苷浓度的增加,反应体系中的AGEs含量显著降低(P0.05)。桑椹花色苷可显著抑制·OH诱导的AGEs的形成(P0.05)。桑椹花色苷通过保护巯基和抑制蛋白质形成羰基而抑制AGEs生成;SDS-PAGE图谱显示,桑椹花色苷可阻断糖基化反应导致的蛋白质交联物的形成。     

杏仁种皮黑色素抑制晚期糖基化末端产物(AGEs)的研究

建立牛血清蛋白-葡萄糖(BSA-Glucose)、牛血清蛋白-果糖(BSA-Fructose)和牛血清蛋白-丙酮醛(BSA-Methylglyoxal)的美拉德模拟反应体系,在体系中添加不同浓度的杏仁种皮黑色素,氨基胍(AG)作为阳性对照,37℃下反应,以荧光强度(Ex=370 nm,Em=440 nm)表示晚期糖基化末端产物(AGEs)含量,分析BSA-Glucose体系中蛋白质巯基、羰基含量变化,通过反相高效液相色谱/二极管阵列法(RP-HPLC-DAD)分析杏仁种皮黑色素对丙酮醛(Methylglyoxal,MGO)的清除效果。结果表明,杏仁种皮黑色素对BSAGlucose、BSA-Fructose、BSA-Methylglyoxal体系中AGEs的形成均有显著的抑制作用(P<0.05),抑制率最高分别达到73.81%、42.22%、38.57%。杏仁种皮黑色素能显著升高BSA-Glucose中蛋白质巯基含量(P<0.05),对MGO也具有清除作用,清除率随着时间的延长而升高,当反应24 h时,清除率达到最高,为63.54%。     

紫苏提取物的抗氧化性能及其对晚期糖基化末端产物的抑制作用

本研究采用单纯形-重心设计方法提取紫苏中的活性成分,在对其进行抗氧化性能评价的基础上,考察其对BSA/Glucose模拟体系中晚期糖基化末端产物(Advanced glycation end products,AGEs)生成的抑制作用。结果表明:最佳提取溶剂组成为无水乙醇、蒸馏水、无水甲醇(1:1.2:3.4,v/v),三种溶剂之间存在的交互作用同时对紫苏中提取的抗氧化物质浓度产生影响;紫苏提取物对AGEs生成的抑制作用呈浓度依赖性,相同浓度的紫苏提取物与氨基胍(aminogunidine,AG)对AGEs生成的抑制效果存在显著性差异(P<0.05),当二者浓度为625 μg/mL时,紫苏对AGEs生成抑制率为78.1%,而AG对其抑制率仅为60.3%;紫苏提取物中含有较高含量的迷迭香酸,含量为14.8 mg/g;紫苏提取物的添加可减少BSA/Glucose模拟体系中羰基的形成,抑制巯基的氧化及蛋白质与葡萄糖的交联。本研究为深入开发紫苏应用价值及有效控制食品热加工过程中AGEs的生成提供理论支撑。     

杏仁种皮黑色素抑制晚期糖基化末端产物的研究

建立牛血清蛋白-葡萄糖(BSA-Glucose)、牛血清蛋白-果糖(BSA-Fructose)和牛血清蛋白-丙酮醛(BSA-Methylglyoxal)的美拉德模拟反应体系,在体系中添加不同浓度的杏仁种皮黑色素,氨基胍(AG)作为阳性对照,37℃下反应,以荧光强度(Ex=370 nm,Em=440 nm)表示晚期糖基化末端产物(AGEs)含量,分析BSA-Glucose体系中蛋白质巯基、羰基含量变化,通过反相高效液相色谱/二极管阵列法(RP-HPLC-DAD)分析杏仁种皮黑色素对丙酮醛(Methylglyoxal,MGO)的清除效果。结果表明,杏仁种皮黑色素对BSAGlucose、BSA-Fructose、BSA-Methylglyoxal体系中AGEs的形成均有显著的抑制作用(P0.05),抑制率最高分别达到73.81%、42.22%、38.57%。杏仁种皮黑色素能显著升高BSA-Glucose中蛋白质巯基含量(P0.05),对MGO也具有清除作用,清除率随着时间的延长而升高,当反应24 h时,清除率达到最高,为63.54%。     

食品加工中晚期糖基化终产物的变化趋势及茶多酚对其抑制作用

晚期糖基化终产物(AGEs)是食品加工和贮藏中美拉德反应、脂质氧化反应或葡萄糖氧化等多种途径中的产物,在人体内积累后能够引起一些慢性疾病,如糖尿病、肾病、高血脂等,因此抑制晚期糖基化终产物具有重要意义。采用葡萄糖(Glc)与牛血清白蛋白(BSA)模拟食品加工中产生的糖基化产物反应过程,以茶多酚为抑制剂加入反应体系中,通过NBT法测定果糖胺,高效液相色谱法(HPLC)测定乙二醛(GO)和羧甲基赖氨酸(CML),荧光法测定AGEs来检测糖基化反应的早、中期和晚期产物,根据蛋白质羰基和巯基含量和蛋白质相对分子质量变化,获得茶多酚抑制晚期糖基化终产物的主要机制。试验结果表明:在食品加工条件下茶多酚对糖基化反应的中间产物果糖胺、乙二醛有明显抑制作用,对CML和荧光性AGEs有一定抑制作用。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳表明茶多酚与蛋白质的相互作用引起蛋白质二级结构的变化,阻止蛋白质交联。结合茶多酚对蛋白质巯基的保护作用,茶多酚既以抗氧化作用参与抑制糖基化反应,又对蛋白质的交联反应有抑制作用。     

多酚黄酮物质对晚期糖基化终产物的抑制研究

研究多酚黄酮类化合物对食品加工模拟体系中晚期糖基化终产物(Advanced glycation end products,AGEs)的抑制影响。构建了牛血清白蛋白-葡萄糖模拟体系,研究多酚黄酮类化合物对AGEs的荧光产物和非荧光产物羧甲基赖氨酸(N~ε-carboxymethyllysine,CML)的抑制效果。通过研究不同的多酚黄酮类化合物对甲基乙二醛(methylglyoxal,MGO)的加合试验进一步探究抑制机理。结果表明,除阳性对照组氨基胍外,茶多酚和木犀草素对AGEs的荧光产物和CML的抑制较其他抑制剂的效果好,茶多酚和木犀草素对AGEs的荧光产物的抑制率为68.52%和61.19%,对非荧光产物CML的抑制率为13.67%、16.52%。通过多酚黄酮类化合物对活性二羰基化合物MGO的捕获试验,推测出可以与MGO发生加和反应的结构通式,初步阐述多酚黄酮类化合物对AGEs的抑制机理。     

响应面法优化石榴瓤多酚的提取工艺及抗糖基化活性分析

探讨应用响应面法优化石榴瓤多酚提取的最佳工艺条件,并测定其体外抗糖基化活性。以石榴瓤多酚得率为考察指标,料液比、乙醇体积分数和超声时间为影响因素,在单因素试验基础上,采用Box-Behnken Design(BBD)试验设计优化石榴瓤多酚的最佳提取工艺条件,并通过建立牛血清白蛋白(BSA)-果糖模拟反应体系和BSA-丙酮醛模拟反应体系,评价石榴瓤多酚对非酶糖基化终末产物(AGEs)的抑制作用。结果表明,当料液比1:17(g/mL)、乙醇体积分数63.5%、超声时间37 min时,石榴瓤多酚得率达15.81%,与模型预测结果接近。在浓度0.375～36μg/mL内,石榴瓤多酚与对AGEs的抑制作用之间呈一定的正相关关系,在浓度为36μg/mL时,对BSA-果糖模型中AGEs的生成抑制率达到56.1%,抑制作用的IC_(50)=27.807μg/mL,对BSA-丙酮醛模型中AGEs的生成抑制率达到52.2%,抑制作用的IC_(50)=30.363μg/mL。该方法提取石榴瓤多酚可行、可靠,产物具有较好的抗糖基化活性。     

莲原花青素对含有不同饱和度脂肪酸的乳糖-赖氨酸体系中晚期糖基化终末产物的抑制作用

研究莲原花青素低聚体（lotus seedpod procyanidin oligomers,LSOPC）对含有不同饱和度脂肪酸的乳糖-赖氨酸模拟体系中晚期糖基化终末产物（advanced glycation end products,AGEs）生成的抑制作用。选择α-乳糖、L-赖氨酸和油酸/亚油酸/亚麻酸建立3 种热加工模拟体系,采用荧光分光光度法、电子鼻等技术,研究了在不同加热温度和时间、不同质量浓度LSOPC、不同脂肪酸等因素的作用下LSOPC对模拟体系中生成AGEs抑制作用的影响。加热温度和时间是LSOPC抑制AGEs生成的重要因素。在各模拟体系中,LSOPC对AGEs的抑制率均随LSOPC质量浓度增加而增加,且低温加热模式下的抑制率和抑制速率比高温加热模式下大。通过电子鼻技术的指纹图谱分析,发现低温（100 ℃）时,添加LSOPC后3 种模拟体系生成的气味物质之间无明显差异,高温（180 ℃）时,则有显著差异。LSOPC对含有不同饱和度脂肪酸的乳糖-赖氨酸模拟体系中AGEs的生成有一定的抑制作用,具有剂量依赖关系,且与加热温度和时间以及脂肪酸种类相关。     

蛋白基体系美拉德反应在荔枝皮原花青素作用下的抑制研究

本试验分别研究了在乳清蛋白-葡萄糖和牛血清白蛋白-葡萄糖模拟生理体系中,荔枝果皮原花青素(Litchi pericarp procyanidins,LPPC)对美拉德反应和晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)的抑制作用,以荧光性AGEs的强度为表征依据。结果表明,在乳清蛋白-葡萄糖模拟体系中孵育35 d时,LPPC对AGEs的抑制效果最强,达60.21±1.34%。LPPC浓度为1 mg/m L时,相对抑制率最大可达85.33±9.02%(显著高于维生素C(Vc),p0.05)。在牛血清白蛋白-葡萄糖体系中,孵育35 d后LPPC对AGEs的相对抑制率最高达70.01±1.32%,且与LPPC浓度呈现正相关。当LPPC浓度为0.5 mg/m L时,抑制率最大为95.46±10.12%(显著高于氨基胍(AG),p0.05)。不同p H值下蛋白质的稳定性研究表明,乳清蛋白在与LPPC长期孵育后,其热稳定性明显降低,再次提示了LPPC对美拉德反应的抑制作用。LPPC可作为一种天然的食品基质的AGEs抑制剂深度开发。     

苹果多酚提取物对体外蛋白质非酶糖化的抑制作用

采用牛血清白蛋白-葡萄糖非酶糖化反应体系,研究苹果多酚提取物对体外蛋白质非酶糖化反应进程的影响。结果表明,苹果多酚提取物对蛋白质非酶糖化反应中间产物Amadori和高级糖化终末产物(AGEs)的形成均具有较强的抑制作用并呈明显的量效关系;在试验条件下,苹果多酚提取物对蛋白质非酶糖化反应中间产物Amadori和AGEs形成的最大抑制率分别可达80.85%和98.36%,IC50分别为0.40 g/L和0.28 g/L。说明苹果多酚提取物可能对糖尿病并发症具有一定的防治作用。     

色氨酸抑制体外模型中晚期糖基化终末产物形成机理

食源性晚期糖基化终末产物（advanced glycation end products,AGEs）与多种慢性疾病密切相关,尤其是糖尿病和肾脏疾病。为减少AGEs对机体的健康风险,降低食品中AGEs含量,本研究从13?种氨基酸中筛选出具有良好AGEs抑制效果的色氨酸（tryptophan,Trp）,利用牛血清白蛋白（bovine serum albumin,BSA）-果糖、BSA-丙酮醛（methylglyoxal,MGO）、BSA-乙二醛（glyoxal,GO）和精氨酸（arginine,Arg）-MGO模型探究Trp对AGEs的抑制机理。结果表明,Trp对荧光AGEs的抑制呈现出显著的质量浓度依赖性。在BSA-GO模型中Trp抑制效果最佳,其次是BSA-MGO模型和Arg-MGO模型,而在BSA-果糖模型中抑制效果不明显。Trp对Nε-羧甲基赖氨酸（Nε-carboxymethyllysine,CML）和Nε-羧乙基赖氨酸（Nε-carboxyethyllysine,CEL）的抑制呈现钟形曲线,在1 000 μg/mL下对CML和CEL的抑制率最高。通过探究Trp捕获MGO的能力发现,其可通过芳香亲电子取代和Pictet-Spengler反应捕获MGO,最高捕获能力为3 mol。     

Inhibitory effects of guava (Psidium guajava L.) leaf extracts and its active compounds on the glycation process of protein

Hyperglycaemia causes increased protein glycation and the formation of early glycation products and advanced glycation end products (AGEs) which are major factors responsible for the complications of diabetes. This study investigated the ability of guava leaf and compounds to inhibit glycation process in an albumin/glucose model system and compared the potency of these extracts with Polyphenon 60 which is a commercial polyphenol product extracted from green tea and with the standard antiglycation agent, aminoguanidine. The results showed that the inhibitory effects of guava leaf extracts on the formation of α-dicarbonyl compounds were over 95% at 50 μg/ml. Phenolic compounds present, namely gallic acid, catechin and quercetin exhibited over 80% inhibitory effects, but ferulic acid showed no activity. The guava leaf extracts also showed strong inhibitory effects on the production of Amadori products and AGEs from albumin in the presence of glucose. The phenolic compounds also showed strong inhibitory effects on the glycation of albumin, especially quercetin exhibited over 95% inhibitory effects at 100 μg/ml. According to the results obtained, guava leaf extracts are potent antiglycation agents, which can be of great value in the preventive glycation-associated complications in diabetes.     

8种别样茶对AGEs抑制能力的筛选及其抑制机制探究

目的:本研究通过检测非酶糖基化终末产物（advanced glycation end-products,AGEs）生成量评价8种别样茶的糖基化抑制能力,并探究抑制效果较好的别样茶对AGEs生成各阶段的抑制作用机制。方法:本研究首先对8种别样茶水提液中总黄酮含量进行检测,接着通过构建体外蛋白质非酶糖基化模型实验检测了8种别样茶抑制AGEs生成的能力,最后择优测定其对糖基化早期产物果糖胺、中期产物活性羰基化合物以及蛋白质交联的抑制能力,从而探究其对非酶糖基化反应的抑制机制。结果:大叶苦丁茶（Ilex latifolia Thunb）和甜茶（Rubus suavissimus S. Lee）对AGEs的抑制效果在8种别样茶中较为突出,50 μg/mL时AGEs抑制率分别达到了76.31%±0.87%和81.75%±0.41%;大叶苦丁茶和甜茶主要通过抑制糖基化早期、中期产物的生成量来减少AGEs的产生。其中,500 μg/mL甜茶对果糖胺抑制率最高（59.12%）,蛋白质交联抑制率最高（81.41%）,5000 μg/mL大叶苦丁茶对活性羰基化合物抑制率最高（94.24%）。结论:大叶苦丁茶及甜茶可以作为抑制糖基化反应的功能食品,本研究可为具有抑制AGEs产生功效原料的综合开发利用提供一定的理论依据。     

莲原花青素低聚体在模拟生理环境下对非酶糖化末端产物的抑制作用

为探究莲原花青素低聚体（oligomeric procyanidins of lotus seedpod,LSOPC）在模拟生理环境下对非酶糖化末端产物（advanced glycation end products,AGEs）的抑制作用,测定金属离子、高糖和高蛋白质量浓度条件下LSOPC对体外AGEs的抑制率,以及固定比例法评价LSOPC与表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin gallate,EGCG）复配物对体外AGEs生成的抑制作用。结果表明：在模拟生理环境下,AGEs体外孵育最适反应时间为35?d,LSOPC的抑制效果达到最大值。不同质量浓度的金属离子（Cu2＋、Fe2＋、Zn2＋、Ca2＋、Mg2＋、Al3＋、Sn2＋）对体外AGEs生成的影响各不相同,其中Cu2＋和Fe2＋在模拟体系中AGEs生成的促进作用最强,但和LSOPC一起有协同抑制作用;其他5?种金属离子对AGEs生成都有不同程度的抑制或促进作用,但对LSOPC对AGEs的抑制作用几乎无影响。在高糖高蛋白反应体系中,发现LSOPC在高糖、高蛋白以及单独高蛋白情况下,抑制效果最差。LSOPC与EGCG复配有协同抑制AGEs效果,并且在LSOPC与EGCG质量浓度比为2∶1时最佳。     

采用牛血清白蛋白/果糖体系研究荧光性AGEs生成的动力学

为分析荧光性晚期糖基化末端产物(advanced glycation end products,AGEs)生成的动力学,采用牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)/果糖模拟反应体系,荧光光谱法测定荧光强度来衡量荧光性AGEs生成量,分别考察了不同BSA质量浓度、果糖浓度、温度及p H值对荧光性AGEs生成量的影响,探究荧光性AGEs生成和底物消耗的反应动力学。结果表明:随着BSA质量浓度、果糖浓度、温度及p H值的增加,荧光性AGEs生成量均呈现增加的趋势。体系反应24 min后,果糖和氨基酸浓度分别减少了1.25×10-2、1.92×10-4 mol/L,果糖消耗量要高于氨基酸消耗量。在此基础上,运用最小二乘法拟合,得出在各反应条件下,荧光性AGEs的生成符合0级反应动力学,最大速率常数为31.57 AU/min,反应活化能为70.58 k J/mol;底物消耗符合1级反应动力学。     

Inhibitory effect of mung bean extract and its constituents vitexin and isovitexin on the formation of advanced glycation endproducts

The anti-glycation activity of four kinds of beans including mung bean, black bean, soybean and cowpea were evaluated. Aqueous alcohol extract of mung bean exhibited the strongest inhibitory activity against the formation of fluorescent advanced glycation endproducts (AGEs) in a bovine serum albumin (BSA)-glucose model, and the inhibitory activities of extracts of the four beans were found to be highly correlated with their total phenolic contents (R² = 0.95). Subsequent HPLC analysis of mung bean extract revealed two major phenolics which were purified and identified as vitexin and isovitexin by spectral methods. In the anti-glycation assays, both vitexin and isovitexin showed significant inhibitory activities against the formation of AGEs induced by glucose or methylglyoxal with efficacies of over 85% at 100 μM. In another assay, vitexin and isovitexin failed to directly trap reactive carbonyl species, such as methylglyoxal, suggesting that their anti-glycation activities may mainly be due to their free radical scavenging capacity.     

褐藻中降血压活性物质及其提取工艺研究进展

褐藻为我国的重要海产资源,含有丰富的营养成分及活性物质,近年来在褐藻中提取食源性降血压活性物质已成为研究热点。文章综述了褐藻中降血压物质降血压肽、氨基酸、褐藻多酚、类胡萝卜素、多糖等的降血压作用,分析比较了褐藻中降血压物质的提取工艺。通过褐藻高效利用提取分离褐藻中的降血压活性物质,为其开发功能性食品提供参考。     

Evaluation of the in vitro inhibitory effects of buckwheat enhanced wheat bread extracts on the formation of advanced glycation end-products (AGEs)

In this study, the inhibitory effects of extracts from buckwheat enhanced wheat breads, on the formation of fluorescent advanced glycation end-products (AGEs) were studied in bovine serum albumin (BSA)/glucose and BSA/methylglyoxal (MGO) systems. Correlations with total phenolic compounds (TPC), total flavonoids (TF) as well as rutin (Ru) and quercetin (Q) contents were also identified.