高温短小芽孢杆菌及其产高温淀粉酶的初步研究

从云南腾冲热海热泉中分离出一株产高温淀粉酶的菌株,命名为Tamy12。该菌株生长温度范围为37～70℃,最适生长温度为55℃。对菌株进行16SrRNA基因序列分析表明,该菌株为短小芽孢杆菌(Bacillus pumilussp·)。对该菌所产淀粉酶性质的初步研究表明:该酶在80℃具有最高催化活性,在98℃保温30min,仍剩余30%的活力;其最适反应pH为5·0。通过Native-PAGE分析表明菌株Tamy12的粗酶液只含有单一条带的淀粉酶。通过TLC(薄层层析)分析该酶水解淀粉的产物表明,其产物主要为葡萄糖、麦芽糖及3～5个葡萄糖基的寡糖,初步确定菌株所产的淀粉酶为高温α-淀粉酶。     

耐高温α-淀粉酶产生菌的选育研究

从土壤中分离到1株能在55℃生长并分泌耐高温α-淀粉酶的菌株,其最适生长pH值为7．0-8．0,最适生长温度50℃。该菌株经初步鉴定为芽孢杆菌,疑似微地衣芽孢杆菌,命名为DG-1。对该菌株分泌的耐高温α-淀粉酶的性质研究表明,最适作用pH值为7．0,在pH6．0-7．5的范围内有较高酶活。最适反应温度为95℃,95℃保温60min处理后酶活仅损失4．73％。经紫外线诱变处理,得到菌株DG-4,酶活较出发菌株提高了104．6％。     

丹参内生真菌产生淀粉酶菌株的筛选鉴定及酶学性质分析

目的:从丹参内生真菌中筛选耐热性强的酸性生淀粉酶菌株,并对其酶学性质进行初步研究。方法:以50株丹参内生真菌作为筛选对象,通过淀粉固体培养基初筛、液体发酵复筛,筛选产生淀粉酶活力较高的菌株;通过形态学观察和ITS序列分析对产酶菌株进行鉴定。结果:从50株丹参内生真菌中,筛选出5株产生淀粉酶活力较高的菌株,其中菌株ZDH2-2-1-1为产淀粉酶活性最强的菌株,酶活力达到117.63 U/m L,经鉴定为互隔链格孢(Alternaria alternata)。该淀粉酶最适p H为4.0,最适反应温度为55℃,具有较好的热稳定性和p H稳定性,对生淀粉具有广谱的降解能力。通过薄层层析发现,ZDH2-2-1-1所产淀粉酶的酶解产物为葡萄糖。结论:丹参内生真菌能产生高活性的耐热性酸性生淀粉酶,在生淀粉深加工中具有极大的开发潜力。     

双酶协同酶解木薯淀粉的研究

本文研究了α-淀粉酶(酶活:4,000 U/g,最适pH 5.5～6.5,最适温度50～55℃)和糖化酶(酶活:100,000 U/g,最适pH 4.0～4.5,最适温度58～62℃)协同水解制备木薯微孔淀粉的工艺条件.结果表明木薯淀粉的水解率为50%时质量最好,此时的工艺条件为:加酶量(α-淀粉酶与糖化酶的质量比为3:1)为干基淀粉质量的0.50%,反应时间12 h,反应温度55℃,反应pH 5.0.     

荞麦淀粉耐高温α-淀粉酶液化工艺条件研究

利用耐高温α-淀粉酶能将底物同步糊化和液化的特性,通过单因素和正交试验对耐高温α-淀粉酶水解荞麦淀粉的动力学参数和最适反应条件进行了测定.结果表明:耐高温α-淀粉酶的最适温度为80～85℃,最适pH为5.0～6.5;该酶水解荞麦淀粉的Km为4.9674mg/mL,Vm为0.3448mg/(mL·min);该酶水解荞麦淀粉的优化工艺条件为荞麦淀粉浆浓度25%,温度为83℃,pH6.5,酶用量40U/g,液化时间15min.荞麦淀粉液化液糖化后的DE值为89.87%.     

酸性α-淀粉酶生产菌株的筛选和酶的纯化及酶的性质研究

从土壤中筛选得到一产酸性α-淀粉酶的野生青霉菌株，对其所产酸性α-淀粉酶进行分离纯化，该酶反应的最适pH值为4.4，最适温度为60℃，分子量约为85kD。薄层层析结果表明该酶水解淀粉生成糊精和多种低聚糖。     

温度和pH值对耐高温α-淀粉酶活力的影响

本文系统的研究了温度、pH值和底物浓度对地衣芽孢杆菌HM-3产生的耐高温α-淀粉酶酶活力的影响。研究结果表明：地衣芽孢杆菌HM-3N耐高温α-淀粉酶的最适酶促反应温度为：75％-85℃之间，最适作用的pH值为：6．1-7．0之间，该酶用于玉米淀粉的液化其最适底物浓度是20％～25％。     

耐酸性α-淀粉酶产生菌株的筛选及其液态发酵条件研究

从富含淀粉质的土壤中筛选到1株耐酸性α-淀粉酶的产生菌株ZY8,经初步鉴定为黑曲霉。并对其液态发酵条件进行了研究,产酶适宜培养基为可溶性淀粉50g/L,柠檬酸氢二铵20g/L,KH2PO43g/L,CaCl20.1g/LF,eSO4.7H2O0.01g/L,MgSO4.7H2O1g/L。以2%的接种量在30℃、120r/min、初始pH4.0的条件下培养72h,酶活力达到19.86U/mL。酶学特性研究表明,该耐酸性-α淀粉酶最适反应温度为70℃,最适反应pH值为2.0～5.0,在90℃高温处理20min酶活力仍然保持在80%以上。     

耐高温α-淀粉酶产生菌的分离鉴定及发酵条件与酶性质研究

从西藏八宿温泉附近土壤中 ,分离到一株能在 5 .5℃生长并分泌高温α- 淀粉酶的菌株 ,其生长pH 5 . 0～11. 0 ,最适生长pH 7. 0～ 8. 0。该菌株经初步鉴定为地衣芽孢杆菌 ,命名为BacilluslicheniformisZ - 8。在 4 5℃ ,10 %装液量 ,16. 0r/min条件下振荡培养 4 8h后 ,发酵液酶活可达 2 1. 2× 10 .4UV/mL。发酵培养基的组成成分为黄豆粉 0 . 5 %、麸皮 1%、可溶性淀粉 0 . 2 5 %、pH 8. 8。对该酶的性质研究表明 ,其最适作用pH为 6 . 0 ,最适反应温度为 95℃ ,95℃下保温 6 0min处理后酶活仅损失 5 . 4 % ,对Ca2 + 没有依赖性。     

中温α-淀粉酶高产菌株的选育及其粗酶性质

以从自然界中筛选的野生芽孢杆菌XLG-1为出发菌株,通过紫外线诱变及紫外线-氯化锂复合诱变筛选出高产中温α-淀粉酶的优异菌株XLG-51,经鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。初步研究了其所产的α-淀粉酶的酶学性质:通过SDS-starch-PAGE电泳与酶谱分析得该酶分子质量为60 ku左右,最适作用温度为60℃,最适作用pH范围为5.0～6.5,且在最适条件下具有较强的稳定性。以该菌株为生产菌进行5 L罐发酵实验,产酶达5298 U/mL。     

耐高温α-淀粉酶特性的研究

耐高温α-淀粉酶是在高温下具有最适反应温度的α-淀粉酶。本文对地衣芽孢杆菌所产耐高温α-淀粉酶的最适反应温度、热稳定性、最通反应 pH 以及 pH 稳定性等进行了系统的研究,为该酶的广泛应用提供了理论基础。     

组成型分泌表达嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶的重组粪肠球菌的构建

该研究以高效组成型启动子P10替换pSIP401-gtamyhds中诱导型启动子,构建重组载体pSIP401Z-gtamyhds,并以其为基础框架,分别导入粪肠球菌（Enterococcus faecalis）来源的8种信号肽（s1～s8）,采用电转化法将信号肽筛选载体转入具有优良益生特性的粪肠球菌EXW27,构建组成型分泌表达嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy的重组粪肠球菌。以发酵上清液中α-淀粉酶活性为评价指标,对8种信号肽进行筛选,并对嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy进行分离纯化和酶学性质研究。结果表明,信号肽s7对嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy的分泌效率最高,发酵上清液中α-淀粉酶活性达到310 U/mL。重组Gt-amy的最适反应pH值为5.0,在pH 4.0～8.0范围内具有较好的稳定性,最适反应温度为80 ℃,于80 ℃的半衰期为3 h,在40 ℃条件下反应3 h,对玉米淀粉的降解率可达55.8%。     

海洋细菌Pseudoalteromonas sp.G23产低温淀粉酶发酵条件的研究

从江苏连云港海域筛选和分离到1株产低温淀粉酶的海洋细菌Pseudoalteromonas sp.G23,对该菌株进行了产α-淀粉酶发酵条件研究,结果表明,该菌株发酵16h后到达产酶高峰,最适产酶温度为15℃,最适产酶pH值为8.5,装液量为20%。可溶性淀粉、酵母膏和蛋白胨促进产酶。利用响应面方法对菌株Pseudoalteromonas sp.G23产α-淀粉酶的发酵条件进行了优化,结果表明,可溶性淀粉浓度为1.16%、蛋白胨浓度为2.11%,发酵温度12.38℃,酶活为41.4U/mL,较优化前提高了7倍。     

窖泥中产纤维素酶菌株的筛选鉴定及产酶特性的研究

纤维素酶能够把纤维素降解成可发酵性糖,在许多工业领域有着广阔的应用价值。以窖泥为材料,采用传统平板法对产酶菌株进行筛选,获得一株产纤维素酶系齐全、活性强的菌株XWS-A,经16S rDNA分子生物学鉴定,结果表明该菌株为枯草芽孢杆菌。在液态条件下,对该菌株产酶特性进行研究发现,产内切β-葡聚糖酶最佳条件为温度35℃,培养基初始pH5.5,培养时间72 h;产外切β-葡聚糖酶最佳条件为温度35℃,培养基初始pH6.0,培养时间72 h;产β-葡萄糖苷酶最佳条件为温度40℃,培养基初始pH6.0,培养时间72 h。进一步对其酶学性质进行研究,结果表明:内切β-葡聚糖酶最适反应温度是50℃,最适反应pH为5.5;外切β-葡聚糖酶最适反应温度是50℃,最适反应pH为6.0;β-葡萄糖苷酶最适反应温度是50℃,最适反应pH为6.0。     

酸性异淀粉酶产生菌的筛选及鉴定

从淀粉厂附近的土壤中分离出产脱枝酶的菌株,通过初筛和复筛,得到1株产偏酸性异淀粉酶活力较高的菌株YDF30。其发酵56h时酶活力最大,达到16．4U/mL。所产生的异淀粉酶最适反应温度为55℃,最适pH值为5．2,在低于50℃和pH5．2～9．6条件下较稳定。依据其形态特征和生理生化实验结果,初步鉴定该菌株为芽孢杆菌(Bacillus sp．)。     

一株酸性淀粉酶产生菌的分离鉴定及其酶学性质研究

用含有淀粉的选择培养基,通过透明圈法筛选到一株产酸性淀粉酶的菌株,其发酵液酶活力达到123U/mL。通过形态观察。生理生化实验和16S rDNA序列分析等方法初步鉴定该菌株为地衣芽孢杆菌,命名为Bacillus lincheniformis BW-2。对其产生的淀粉酶的酶学性质进行分析发现,该菌株产生的淀粉酶最适反应温度为70℃;最适反应pH为4.5,同时具有较好的热稳定性和pH稳定性;Ca2+和Mg2+对该酶有激活作用,Mn2+和Cu2+对该酶有抑制作用,抑制剂PMSF(苯甲基磺酰氟)及DTT(二硫苏糖醇)对该酶活力影响较小。通过PAGE分析发现BW-2产生的淀粉酶与已知热稳定淀粉酶分子量或结构可能存在差异。Bacillus lincheniformis BW-2是一株具有研究开发潜力的产酸性淀粉酶的菌株。     

一株蜡状芽孢杆菌α-淀粉酶产生菌株的分离鉴定及酶学性质研究

从土壤中筛选出一株淀粉酶分泌能力较强的菌株,通过形态学观察、生理生化试验、16S rDNA测序分析等方法对该菌株进行了鉴定,并对其分泌的淀粉酶的酶学性质进行了研究。经鉴定该菌株为蜡状芽孢杆菌。酶学性质研究表明,该酶的最适温度为40℃,最适pH值为5.0~6.0,在40℃保温20min,酶活力下降70%左右。Ca2+对酶的活性和热稳定性没有激活作用。非变性蛋白电泳和淀粉酶活性染色结果显示,该菌仅产生一种淀粉酶。通过高效液相色谱分析,该酶对可溶性淀粉的主要水解产物为糊精、寡聚糖和少量葡萄糖,表明该酶为α-淀粉酶。     

酸性生淀粉酶产生菌的筛选及酶学性质研究

酸性生淀粉酶在淀粉制糖中具有重要的开发价值.本实验从醋厂醋渣、淀粉厂排污口泥土分离到酸性条件下α-淀粉酶活力较高的三株菌,其中B-5所产α-淀粉酶最适pH为5.0,为酸性α-淀粉酶.对三株菌粗酶液降解生淀粉的能力进行比较,可知B-5、B-1降解生淀粉能力较强,而B-6虽然有较高的á-淀粉酶活力,但其生淀粉降解能力却较低,粗酶液降解后的生淀粉电镜图片也说明了此结果.     

白曲霉产中温酸性α-淀粉酶组成成分分析及酶学性质的研究

对高产白曲霉菌株产生中温酸性α-淀粉酶进行了酶学性质研究,试验表明该酶最适作用温度为60℃,最适作用pH为5.0,该酶在pH4.5～7.0范围内酶活较稳定,金属离子对此酶几乎没有激活作用,Hg＋、Fe3＋对酸性α-淀粉酶有明显的抑制作用。酸性α-淀粉酶的Vmax为311.53mg/（u·min）,Km为2.18mg/（u·min）。该酶具有较好的耐热性和耐酸性,能在同一pH条件下进行淀粉的液化和糖化作用,具有较好的应用前景。     

蒙脱石固定化α-淀粉酶和糖化酶的研究

以蒙脱石为载体,利用吸附法分别固定α-淀粉酶、糖化酶以及共固定化α-淀粉酶和糖化酶。α-淀粉酶和糖化酶最佳固定化温度分别是20℃和30℃,最佳固定化pH是6.5和4.5。共固定化最佳条件为淀粉酶(U):糖化酶(U):蒙脱石(g)为15:7.5:0.2,pH为5.5;温度为20℃。固定化α-淀粉酶、固定化糖化酶和共固定化酶的最适pH分别为6.0、4.5和5.5,最适反应温度分别是60、60℃和55℃。蒙脱石固定化α-淀粉酶、固定化糖化酶和共固定化酶的稳定性均较好,尤其是共固定化酶表现突出。