抗菌肽brevilaterin与ε-聚赖氨酸对金黄色葡萄球菌的协同抑菌机理

金黄色葡萄球菌是食品中常见的致病菌,控制食品中金黄色葡萄球菌的生长繁殖对提高食品安全性至关重要。本研究以金黄色葡萄球菌作为指示菌,考察了抗菌肽brevilaterin与ε-聚赖氨酸的协同抑菌机理。抑菌动力学结果表明抗菌肽与ε-聚赖氨酸对金黄色葡萄球菌具有协同抑菌效果;细胞膜质子动力势研究结果显示,抗菌肽对跨膜pH值梯度无明显影响,ε-聚赖氨酸会破坏跨膜pH值梯度,1/4最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)抗菌肽+1/4 MICε-聚赖氨酸(联用组)对跨膜pH值梯度产生了协同破坏作用;采用流式细胞术结合荧光显微镜考察细胞膜的完整性,发现抗菌肽对细胞膜完整性具有较强的破坏作用,1/4 MIC抗菌肽即可导致36.3%的膜破损,而ε-聚赖氨酸对膜完整性损伤较小,1/4 MICε-聚赖氨酸仅破坏10.4%的细胞膜完整性,两者联用可对细胞膜完整性产生协同破坏作用,导致51.3%细胞膜完整性发生损伤;采用透射电子显微镜观察了细胞超微结构,发现抗菌肽和ε-聚赖氨酸联用较单独使用对细胞形态和细胞内容物的泄漏产生了协同破坏作用;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示,ε-聚赖氨酸会抑制菌体蛋白质的合成或降解蛋白质,而抗菌肽对蛋白质合成无影响;琼脂糖凝胶阻滞电泳表明,抗菌肽对菌体DNA条带无明显变化,而ε-聚赖氨酸以及两者联用会造成DNA滞留,表明ε-聚赖氨酸可以通过与DNA结合发挥抑菌作用。上述结果表明,抗菌肽brevilaterin和ε-聚赖氨酸联用可以增强对细胞膜的破坏强度,且兼具抗菌肽对呼吸链脱氢酶活性的抑制与ε-聚赖氨酸对跨膜pH值梯度的破坏和DNA的结合作用,从而实现多靶位协同抑菌。     

安石榴苷的纯化及对金黄色葡萄球菌抑菌作用的研究

采用超声波辅助法从石榴皮中提取单宁类物质,并用Amberlite XAD-16大孔吸附树脂进行柱层析,以甲醇梯度洗脱法进行纯化,经高效液相色谱对其组分进行分析后,以安石榴苷含量最高的组分对金黄色葡萄球菌进行抑菌实验,分别测得抑菌圈直径和最小抑菌浓度,并检测了安石榴苷对金黄色葡萄球菌生长曲线的影响。液相结果表明,随着洗脱剂浓度的升高,安石榴苷的含量呈现先升高后降低的趋势,最高含量达79.6%;抑菌结果表明,安石榴苷纯化物对金黄色葡萄球菌有明显的抑菌效果,最小抑菌浓度为0.1mg/m L,安石榴苷纯化物以剂量依赖的形式抑制金黄色葡萄球菌的生长。     

安石榴苷对金黄色葡萄球菌毒力因子表达的抑制作用

分别采用溶血试验法、凝固酶效价法和酶联免疫反应法检测了安石榴苷处理后金黄色葡萄球菌溶血素、血浆凝固酶和总肠毒素的表达变化,并通过反转录实时荧光定量PCR技术检测毒力相关基因的表达情况。结果表明,安石榴苷能显著减少α-溶血素的产生,但对溶血素的抑制作用未呈现浓度依赖性;在高于1/4 MIC浓度下安石榴苷能降低血浆凝固酶的表达;在高于1/2 MIC浓度下,安石榴苷显著降低总肠毒素的产生;安石榴苷对肠毒素基因sea、溶血素基因hla和调节基因agrA的转录产生显著抑制作用,在1/8 MIC浓度下3个基因的相对表达量分别为对照组的3%,5%,5%。     

丁香油与月桂酸对金黄色葡萄球菌的协同抑制作用

该研究探讨了丁香油、百里香油、薄荷油等三种植物精油以及中链脂肪酸月桂酸对金黄色葡萄球菌的抑制作用,筛选出具有协同抑制作用的组合丁香油与月桂酸,测定协同组合对金黄色葡萄球菌生长、细胞膜通透性的影响,并将该组合制成抑菌保鲜液,应用于生鲜米粉保鲜。结果表明,丁香油、薄荷油、百里香油及月桂酸对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度分别为2.00μg/mL、4.00μg/mL、7.50μg/mL以及9.00μg/mL,丁香油和月桂酸联合使用,在浓度为1/4 MIC丁香油+1/4 MIC月桂酸时具有协同抑菌效果,此时分级抑菌浓度系数为0.50。丁香油与月桂酸协同处理使金黄色葡萄球菌细胞膜损伤,增加通透性。抑菌保鲜液对生鲜米粉中的菌落总数、金黄色葡萄球菌均有抑制作用,对维持生鲜米粉品质具有积极影响。72 h贮藏期间,处理组初始菌落总数比对照组至少低1.50 lg CFU/g;金黄色葡萄球菌降低1.65 lg CFU/g;酸度值比对照组至少低0.8°T;感官评价得分均高于对照组。结果表明,丁香油与月桂酸协同组合制成抑菌保鲜液有可能成为生鲜米粉的可替代复合保鲜液。     

槐糖脂对金黄色葡萄球菌的抑菌机理

通过测定槐糖脂抑制金黄色葡萄球菌最低抑菌质量浓度和生长曲线,探讨槐糖脂对金黄色葡萄球菌的抑菌机理,同时利用扫描电镜和透射电镜观察金黄色葡萄球菌显微形态。结果表明:槐糖脂能有效抑制金黄色葡萄球菌生长,且抑制作用体现质量浓度依赖特性,最小抑菌质量浓度(MIC)为1.5625mg/mL。酸性和高温条件不影响槐糖脂抑菌性,表明其具有很好的稳定性。电镜结果表明,槐糖脂对金黄色葡萄球菌的抑制可能源于其对菌体细胞壁和细胞膜的破坏作用。     

脂肽和茶多酚对副溶血弧菌的协同抑菌效应和机理

研究脂肽和茶多酚对副溶血弧菌的协同抑菌效应和机理,为脂肽协同茶多酚应用于副溶血弧菌的控制提供理论依据。利用"棋盘法"研究脂肽和茶多酚对副溶血弧菌的协同抑菌效应;通过研究脂肽和茶多酚独立作用及协同作用对细胞膜完整性、细胞蛋白质合成及磷代谢方面影响来研究二者的协同抑菌机理。结果表明:脂肽和茶多酚对副溶血弧菌存在强烈的协同抑菌效应,部分抑菌浓度指数达到0.19;与1/16最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)脂肽或1/8 MIC茶多酚各自独立作用相比,在1/16 MIC脂肽和1/8 MIC茶多酚协同作用下,副溶血弧菌的细胞膜通透性显著增强,细胞部分蛋白质合成的抑制作用得到进一步加强,并且细胞的磷代谢完全受到抑制。结果表明,脂肽和茶多酚对副溶血弧菌具有强烈的协同抑菌效应,其协同抑菌作用主要通过二者协同破坏细胞膜的完整性,从而影响细胞部分蛋白质的合成与正常代谢实现的。     

茶多酚-肉桂精油复合保鲜剂抗氧化活性及抑菌作用

为了研究茶多酚-肉桂精油复合保鲜剂抗氧化活性和对金黄色葡萄球菌的抑菌作用。采用体外抗氧化法测定了复合保鲜剂抗氧化能力。通过抑菌圈大小确定抑菌效果和最小抑菌浓度(MIC),结合抑菌活力、细菌生长曲线、细胞壁完整性和细胞膜通透性,综合评价复合保鲜剂对金黄色葡萄球菌的影响。结果表明,复合保鲜剂清除DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基的IC50分别为4.02μg/m L、9.15μg/m L、0.61 mg/m L。复合保鲜剂能够有效抑制金黄色葡萄球菌的生长,MIC为0.5 mg/m L,且能够破坏细胞壁和细胞膜。综上所述复合保鲜剂具有很强的抗氧化活性,对金黄色葡萄球菌有很好的抑菌效果,其可能的抑菌机理是破坏细胞壁,影响细胞膜的通透性。     

迷迭香酸协同ε-聚赖氨酸对金黄色葡萄球菌的抑菌机理初探

本文研究了迷迭香酸协同ε-聚赖氨酸对食品常见污染菌——金黄色葡萄球菌的抑菌作用,检测了两种抑菌成分对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC)、抑菌圈、联合作用效果、抑菌动力学曲线、可溶性蛋白、还原糖外泄和菌表面蛋白SDS-PAGE(十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳)图谱的效果。结果表明:迷迭香酸和ε-聚赖氨酸对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC)分别为4和0.1875 mg/mL,且抑菌浓度指数(FICI)为0.5,有较好的协同增效作用。1/4 MIC迷迭香酸和1/4 MIC ε-聚赖氨酸的复合有较强的抑菌活力,能损伤菌细胞膜,导致蛋白质和还原糖外泄,其蛋白图谱分析的菌体表面蛋白分子量变化,说明这两种抑菌成分促使金黄色葡萄球菌表面蛋白降解,抑制了金黄色葡萄球菌表面毒力因子的毒性。     

靓果安和大蒜油的联合抑菌作用及抑菌机理

本文以金黄色葡萄球菌和大肠杆菌为供试菌,用抑菌圈法测定靓果安、大蒜油以及靓果安与大蒜油复配抑菌液(复配液)对供试菌株的最小抑菌浓度;通过紫外分光光度法测定靓果安、大蒜油以及靓果安与大蒜油复配抑菌液影响供试菌的生长曲线;光学显微镜、透射电子显微镜观察菌体形态,探讨靓果安的抑菌机理。结果显表明,靓果安对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的最小抑菌浓度分别为20、40 mg/mL;大蒜油对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的最小抑菌浓度分别为0.4、51.2 mg/mL。复配液对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的最小抑菌浓度分别为0.3125、10 mg/mL;靓果安、大蒜油以及复配液对两种供试菌的生长具有抑制作用,菌体形态发生改变、菌体散乱、变小,同时对供试菌的细胞壁以及细胞膜进行破裂、使得内容物流出,从而导致细胞的死亡。     

金银花主要成分对铜绿假单胞菌多耐药菌株的抑制作用研究

目的 研究金银花主要成分对铜绿假单胞菌质控菌株和多耐药菌株的体外抑菌作用,及金银花有机酸总样与氨基糖苷类抗生素联合使用对多耐药菌株的抑菌效果.方法 平板倍比稀释法测定金银花中主要成分绿原酸、异绿原酸组分和木犀草素以及氨基糖苷类抗生素硫酸阿米卡星和庆大霉素对铜绿假单胞菌质控菌株和耐药菌株的最低抑菌浓度(MIC),在此基础上研究金银花有机酸总样与硫酸阿米卡星联合用药的抑菌效果.结果 金银花主要成分绿原酸、异绿原酸组分和木犀草素对铜绿假单胞菌多耐药菌株的MIC分别为10,5和2.5 mg/mL,对质控菌株的MIC分别为＞10,5和2.5 mg/mL.金银花有机酸总样与氨基糖苷类抗生素联合用药,可降低硫酸阿米卡星对多耐药铜绿假单胞菌的MIC,两者联用有一定的协同作用.结论 金银花主要成分绿原酸、异绿原酸和木犀草素均有抑制铜绿假单胞菌的作用,其中绿原酸对耐药菌株的抑制作用最强.金银花有机酸组分与氨基糖苷类抗生素联合用药,对铜绿假单胞菌多耐药菌株具有协同抑制作用.     

酒花苦味酸对乳酸菌的抑制作用

酒花苦味酸对乳酸菌有抑制作用，其抑菌效果受pH、金属离子浓度的影响。抑菌机理是其作为离子载体，使细胞外的质子转入到细胞内降低胞内pH值，膜内外的pH差消失，从而使该细胞生长被抑制。另一方面乳酸菌对酒花苦味酸的抑菌也有一定的耐受力，耐受菌的细胞膜能使内外维持一个较高的pH差。其耐受力虽可通过驯化使其恢复，但基因型相当稳定。     

基于细胞膜损伤的蔗糖月桂酸酯对金黄色葡萄球菌的作用机制

研究蔗糖月桂酸酯对金黄色葡萄球菌的抑菌活性及其对细胞膜的损伤机制。首先采用二倍稀释法考察了蔗糖月桂酸酯对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度,用平板计数法绘制了时间-杀菌曲线;通过DiSC3(5)探针标记荧光分光光度法考察了蔗糖月桂酸酯对菌体细胞膜电势差的影响,使用荧光显微镜结合流式细胞术研究了菌体细胞膜渗透性的影响,使用紫外分光光度法考察了大分子物质的泄漏情况,使用PBFI钾离子探针测定了胞内钾离子泄漏量,最后通过透射电子显微镜观察了蔗糖月桂酸酯处理前后菌体的超微结构。结果表明：蔗糖月桂酸酯对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）为0.312 5 mg/mL;经蔗糖月桂酸酯作用的金黄色葡萄球菌与对照组相比,DiSC3(5)探针的荧光强度呈现剂量依赖性增大;PI探针对菌体的沾染率增加,MIC处理30 min菌体PI沾染率达到84.7%;260 nm波长处的吸光度随作用时间的延长逐渐增大,但增大量较小;蔗糖月桂酸酯会导致金黄色葡萄球菌细胞钾离子泄漏,且泄漏量与添加的蔗糖月桂酸酯质量浓度呈正相关;经MIC蔗糖月桂酸酯作用1 h后,金黄色葡萄球菌体表面变粗糙,边缘模糊。结论：蔗糖月桂酸酯可以通过破坏细胞膜渗透性消散细胞膜电势,从而导致胞内物质发生轻微泄漏,最终达到抑菌作用,本研究可为多功能性糖酯抑菌产品的开发提供理论依据。     

山茶油抑菌性能和机理的研究

以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌为实验菌,研究了山茶油的抑菌性能和抑菌机理。通过测定山茶油的最低抑菌浓度、菌生长曲线的影响来评定山茶油的抑菌性能;通过测定菌液中碱性磷酸酶、电导率、还原糖和蛋白质含量的变化,从菌体细胞膜和细胞壁的损伤等方面来阐述山茶油的抑菌机理。结果表明:山茶油对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(MIC)为0.5%和1%,山茶油对大肠杆菌的抑制效果强于金黄色葡萄球菌;山茶油可使大肠杆菌和金黄色葡萄球菌细胞壁和细胞膜受到损伤,并引起菌体细胞溶出物、蛋白质以及离子的泄露,从而导致菌体的死亡。     

源自螺旋藻渣枯草芽孢杆菌发酵抗菌肽SP-AP-1和伊枯草菌素对金黄色葡萄球菌抑菌机制对比研究

目的：研究枯草芽孢杆菌发酵螺旋藻渣的发酵液中分离出的抗菌肽SP-AP-1和伊枯草菌素对金黄色葡萄球菌的抑菌机理。方法：采用紫外分光光度法、邻硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷法和原子吸收光谱法研究抗菌肽对金黄色葡萄球菌细胞膜通透性的影响;采用考马斯亮蓝法、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖凝胶电泳考察抗菌肽对金黄色葡萄球菌胞内蛋白合成及对基因组DNA结合作用的影响,并通过模拟细胞膜的疏水环境探究抗菌肽发挥抑菌作用时其二级结构的变化情况。结果：抗菌肽SP-AP-1和伊枯草菌素均能引起金黄色葡萄球菌细胞膜通透性增加,导致胞内钾离子释放量、蛋白质泄漏量及细胞膜疏水性增加,但抗菌肽SP-AP-1的抑菌效果更为显著（P＜0.05）;两种抗菌肽均能抑制菌体蛋白合成,尤其对分子质量为17、20、25～35 kDa的蛋白抑制作用最为明显;虽然两种抗菌肽对金黄色葡萄球菌基因组DNA没有明显阻滞作用,但增大抗菌肽质量浓度,SP-AP-1可与溴化乙锭竞争性结合DNA,使基因组DNA条带变暗,影响蛋白质的表达。本实验为螺旋藻渣抗菌肽拮抗金黄色葡萄球菌的抑菌机理研究提供了理论参考。     

苦瓜总皂甙最小抑菌浓度和最佳抑菌条件的研究

苦瓜总皂甙是苦瓜中有效成分,具有抑菌等作用。通过绘制生长曲线判断苦瓜总皂甙对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和黑曲霉菌生长曲线的影响。采用琼脂稀释法测定苦瓜总皂甙的最小抑菌浓度(MIC)。运用正交实验设计法确定苦瓜总皂甙的最佳抑菌条件。结果表明,苦瓜总皂甙对黑曲霉菌的生长几乎没有抑菌作用。浓度为50、100、150、200mg/mL的苦瓜总皂甙对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌生长均有抑制作用,且以150mg/mL浓度时为最强,MIC分别为30、40、30mg/mL。苦瓜总皂甙对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最佳抑菌条件为:40℃下,pH为6.0时,抑菌20h。     

卵黏蛋白抑菌活性及其作用机制

研究了卵黏蛋白对导致禽蛋腐败的常见微生物——金黄色葡萄球菌、腐生葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌以及对致龋齿的变异链球菌的抑菌活性及作用机制。采用最小抑菌浓度(MIC)和牛津杯法测定卵黏蛋白的抑菌活性,分析卵黏蛋白对其中3种菌生长动力曲线的影响;利用流式细胞仪与扫描电镜分析其抑菌机制。结果表明:卵黏蛋白对金黄色葡萄球菌、腐生葡萄球菌、变异链球菌的MIC分别为62.5,125,1 000μg/m L,并有明显的抑菌圈产生;对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌的抑制作用较差,无明显抑菌圈。卵黏蛋白对菌体生长起到延缓对数期或缩短稳定期的作用,并使菌体细胞膜的通透性发生改变。扫描电镜结果显示,卵黏蛋白使菌体细胞形态发生变化,细胞膜损伤或者破坏。卵黏蛋白通过对菌体细胞膜造成损害而发挥其抑菌活性。     

葡萄籽和苹果原花青素对变形链球菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用

研究苹果原花青素和葡萄籽原花青素对变形链球菌(Streptococcus mutans)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的抑制作用,采用试管液体稀释法和琼脂稀释法抑菌实验测定其最低抑菌质量浓度(MIC)和质量最低杀菌质量浓度(MBC),并通过测定培养基pH值的变化,研究葡萄籽原花青素对变形链球菌产酸能力的影响。结果表明：苹果原花青素、葡萄籽原花青素对变形链球菌和金黄色葡萄球菌生长都有抑制作用;苹果原花青素对变形链球菌的MIC和MBC分别为1.25、4.00mg/mL,葡萄籽原花青素对变形链球菌的MIC和MBC分别为1.75、2.00mg/mL;苹果原花青素对金黄色葡萄球菌的MIC和MBC分别为4.00、9.00mg/mL,葡萄籽原花青素对金黄色葡萄球菌的MIC和MBC分别为2.00、6.50mg/mL。葡萄籽原花青素质量浓度大于1.00mg/mL对变形链球菌的产酸能力有显著抑制效果。     

纳豆菌脂肽对金黄色葡萄球菌抑菌机理的研究

【目的】研究纳豆菌脂肽对金黄色葡萄球菌的抑菌机理。【方法】通过对金黄色葡萄球菌生长曲线、细胞膜通透性、细胞蛋白的合成、细胞超微结构、细胞代谢的影响等方面的研究,探讨纳豆菌脂肽对金黄色葡萄球菌的抑菌机理。【结果】脂肽可以使金黄色葡萄球菌的细胞膜通透性增加,使得具有紫外吸收的大分子物质发生泄漏;可以导致金黄色葡萄球菌细胞壁形成孔洞甚至使细胞断裂;脂肽对金黄色葡萄球菌蛋白表达未见有明显影响,但可抑制部分蛋白质的合成;对金黄色葡萄球菌代谢活力有较强的抑制作用。【结论】纳豆菌脂肽可使金黄色葡萄球菌细胞膜通透性增加,或细胞膜形成孔洞导致细胞内物质泄漏,使细胞生长受到抑制,进而导致死亡。     

丹参提取液体外抑菌活性研究

目的 研究丹参提取液的体外抑菌作用.方法 采用常量肉汤稀释法测定最低抑菌浓度(MIC),探讨其体外抑菌作用.采用杯碟法检测丹参不同提取方式、不同灭菌方式以及改变提取液pH值对金黄色葡萄球菌抑菌活性的影响.结果 丹参醇提液对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌、铜绿假单胞杆菌、短小芽胞杆菌均有抑菌作用,其95%醇提液对上述菌的MIC分别为20,20,40,80,80 mg/mL,对白色念珠菌无抑菌作用.丹参醇提液对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌抑菌活性较强;不同灭菌方式及改变提取液pH值对金黄色葡萄球菌抑菌活性无差异.结论 丹参提取液具有一定抑菌作用.     

丹参提取液体外抑菌活性研究

目的 研究丹参提取液的体外抑菌作用.方法 采用常量肉汤稀释法测定最低抑菌浓度(MIC),探讨其体外抑菌作用.采用杯碟法检测丹参不同提取方式、不同灭菌方式以及改变提取液pH值对金黄色葡萄球菌抑菌活性的影响.结果 丹参醇提液对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌、铜绿假单胞杆菌、短小芽胞杆菌均有抑菌作用,其95%醇提液对上述菌的MIC分别为20,20,40,80,80 mg/mL,对白色念珠菌无抑菌作用.丹参醇提液对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌抑菌活性较强;不同灭菌方式及改变提取液pH值对金黄色葡萄球菌抑菌活性无差异.结论 丹参提取液具有一定抑菌作用.