杂质吸附固相萃取–液相色谱串联质谱法同时测定粮食中15种真菌毒素

建立了同步检测粮食中15种真菌毒素的杂质吸附固相萃取–超高效液相色谱串联质谱方法。样品经0.1%酸化84%乙腈水溶液提取,杂质吸附柱Prime-HLB净化后,加入稳定同位素内标补偿基质效应干扰,选择Phenomenon Kinetex Bipheny l100A作为分离柱,采用梯度洗脱,超高效液相色谱–串联质谱（UPLC-MS/MS）检测,内标法定量。结果表明,15种真菌毒素的线性相关系数均大于0.996,检出限为0.2~15 μg/kg,定量限为0.8~30 μg/kg;三种基质3个添加水平的回收率为76.9%~116.1%,相对标准偏差（RSD）为1.4%~10%;对玉米基质标准物质进行检测验证,表明8种真菌毒素的检测值均在标示范围内;采用本方法检测了市售粮食135批次,共有97批样品检出真菌毒素,检出率为71%,多毒素同时污染现象较为普遍。方法可用于粮食及其制品中真菌毒素的快速检测。     

多功能净化柱净化-超高液相色谱串联质谱法检测云南所售部分面条及面条制品中的6种真菌毒素

目的 建立多功能净化柱净化-超高液相色谱-串联质谱法检测云南所售部分面条及面条制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇、3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、雪腐镰刀菌烯醇、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮6种真菌毒素的含量。方法 样品经乙腈-水-甲酸(70: 29: 1, V:V:V)溶液浸泡提取, 通过Pribo Fast?M226多功能净化柱净化, 采用超高液相色谱-串联质谱的多反应监测模式进行分析, 外标法进行定量。结果 6种真菌毒素在0.05~400 μg/L范围内线性关系良好(r>0.994), 加标回收率为87.6%~101.3%, 相对标准偏差为1.09%~3.65%。81份面条样品中, 脱氧雪腐镰刀菌烯醇检出含量为15.2~664 μg/kg, 检出率为98.77%, 检测值均未超过国家食品安全标准规定的参考限量值, 其余5种真菌毒素均为未检出。结论 本检测方法具有快速便捷、准确性好、灵敏度高、特异性强等特点, 适用于面条中6种真菌毒素的同时测定。     

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定水果中9种真菌毒素

利用超高效液相色谱-串联质谱法建立水果中9种真菌毒素同时检测的方法。实验对提取溶剂、净化方式及色谱质谱条件进行优化。样品经10 mmol/L柠檬酸-乙腈溶液提取,再加入氯化钠盐析,离心后上清液采用C₁₈吸附剂进行净化处理,以ACQUITY UPLC BEH C₁₈色谱柱分离,采用电喷雾正离子电离,多反应监测模式测定,以空白基质匹配标准溶液外标法定量。结果表明,9种真菌毒素在5 min内完成色谱分离分析,在各自浓度范围内呈良好线性关系（R2>0.999）,方法的检出限（S/N=3）为0.004~1.676 μg/kg,定量限（S/N=10）为0.014~5.587 μg/kg。以桃、樱桃为基质,在低、中、高3个添加浓度水平下,9种真菌毒素的加标回收率在84.5%~113.2%之间,相对标准偏差为0.7%~4.0%（n=6）。将该方法用于分析实际水果样品（草莓、樱桃、葡萄、苹果、梨）中9种真菌毒素的污染状况,结果发现小粒、易腐的樱桃和葡萄中共检出白僵菌素、展青霉素、链格孢菌毒素共计7种毒素,含量在ND（未检出）~12.47 μg/kg之间。所建方法稳定、准确、灵敏、快速,能够满足水果样品中多组分真菌毒素残留分析的需求。     

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定陈年老茶中16 种真菌毒素残留

建立一种超高效液相色谱-串联质谱法测定不同种类陈年老茶中16 种真菌毒素的方法。样品经甲酸-乙腈（10∶90,V/V）溶液提取,提取液加入QuEChERS盐包振摇离心,过OASIS PRIME HLB小柱和dSPE净化管处理,以ACQUITY UPLC HSS T3 C18色谱柱分离,采用电喷雾正离子的多反应离子监测模式,茶叶基质匹配标准溶液。结果显示：16 种真菌毒素在各自浓度范围内呈良好线性关系（R＞0.999）;在茶叶基质中3 个不同添加水平下的加标回收率在63.4%～109.7%之间,相对标准偏差为1.7%～11.3%,方法检出限为0.03～7.00 μg/kg。选取了121 份陈年老茶样品进行检测,1 份乌龙茶样品检出黄曲霉毒素B1,含量为34.0 μg/kg,1 份红茶样品检出赭曲霉毒素A,含量为1.6 μg/kg。本方法稳定、准确、灵敏、快速,能够满足各种茶叶样品中多毒素残留分析的需求。     

超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱快速测定乳及乳制品中21种真菌毒素

建立利用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱联用技术同时测定乳及乳制品中21种真菌毒素的方法。乳及乳制品经酸化乙腈提取后,采用Captiva-EMR Lipid净化柱净化,以C₁₈色谱柱进行色谱分离,质谱采用全扫描/数据依赖的二级扫描模式（full scan data-dependent MS/MS acquisition mode,FullMS/ddMS2）分别在正、负离子模式下检测,外标法定量。21种真菌毒素在一定浓度范围内均具有良好的线性关系,相关系数(r)均大于0.99,定量限范围为1.0~93.8 μg/kg,在三个加标水平下,平均回收率为60.3%~107.0%,相对标准偏差（RSD）为0.4%~14.4%。应用本方法对市售粉状和液态乳及乳制品进行检测,一个水果添加酸奶样品检出黄曲霉毒素B₂。该方法快速、准确,适用于乳及乳制品中多真菌毒素的快速测定,并可用于真菌毒素风险的高效筛查。     

免疫亲和柱结合超高效液相色谱-串联质谱法测定牛奶中的16种真菌毒素比较研究

目的 通过比较5种不同商品化多合一免疫亲和柱的可检测目标毒素种类、回收率和稳定性,筛选性能最优的免疫亲和柱,建立免疫亲和前处理-超高效液相色谱串联质谱（ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry, UPLC-MS/MS）测定牛奶中16种真菌毒的方法。方法 牛奶样品分别经5种不同多毒素免疫亲和柱进行净化富集,用优化后的超高效液相色谱-串联质谱法,在多反应监测模式下测定,同位素内标法定量,筛选覆盖牛奶中真菌毒素污染种类全面、回收率和稳定性最佳的免疫亲和柱,并进行免疫亲和柱性能评价和方法学验证,最终将方法应用于实际样品检测。结果 免疫亲和柱A对牛奶中16种真菌毒素在低、中、高三个添加水平均具有良好的准确度和精密度,加标回收率83.6%~126.8%之间, 相对标准偏差(relative standard deviations,RSDs)为0.2%~18.4%。柱A内各毒素残留水平低于仪器检出限,柱容量在21.8~1317ng之间。使用免疫亲和柱A富集净化样品,各目标毒素在线性范围内线性有良好,相关系数（r）均大于 0. 998,定量限（limits of quantification,LOQs）为0.0010 ng/g~0.2000 ng/g。应用该方法对牛奶质控样品和实际样品进行检测,质控样品测定值均在标示范围内;实际样品中能够检出较低水平的AFM1,DOM-1和FB1。结论 本研究验证筛选免疫亲和柱A应用于牛奶中16 种真菌毒素的测定,其柱残留和柱容量能够满足牛奶中真菌毒素污染的测定;经方法学验证该方法准确可靠,灵敏度高,适用于牛奶中16种真菌毒素的日常检测。     

高效液相色谱-串联质谱法同时测定小麦粉中28种真菌毒素

建立了高效液相色谱-串联质谱（ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry）同时测定小麦粉基质中28种真菌毒素的方法。样品经乙腈/水/甲酸（80:18:2,v/v/v）提取,C18色谱柱分离,采用多反应监测（multiple reaction monitoring,MRM）模式进行检测,使用外标法定量。结果表明,在高、中、低三个加标浓度水平下进行方法学验证,28种真菌毒素回收率范围在60%~120%之间、相对标准偏差小于11%,满足国家标准GB/T 27404-2008中的实验室质量控制规范的要求。利用本方法对市售小麦粉样品进行检测,结果显示呕吐毒素及其衍生物、伏马毒素的检出率最高。部分样品中的呕吐毒素含量超出我国限量标准（＜1000 μg/kg）。本方法可实现小麦粉中28种真菌毒素的同时样品前处理及检测,并可应用于真菌毒素风险的高效筛查。     

高效液相色谱法测定食用植物油中6种真菌毒素

建立了基于分散液液微萃取技术（DLLME）的高效液相色谱法同时测定食用植物油中6种真菌毒素的方法。样品经石油醚脱脂，乙腈-水-乙酸（体积比84∶ 15∶ 1）超声提取，CHCl3为萃取剂液液萃取净化及柱前衍生化后，以Agilent XDB-C18色谱柱（4.6 mm×150 mm, 3.5 μm）分离，梯度洗脱，经荧光检测器检测。结果表明：食用植物油中6种真菌毒素的线性关系良好，相关系数均大于0.999，方法检出限为0.2~0.5 μg/kg，样品的平均加标回收率为75.88%~105.25%，相对标准偏差为0.5%~9.5%。该方法可用于食用植物油中黄曲霉毒素（AFB1、AFB2、AFG1、AFG2）以及赭曲霉毒素（OTA、OTB）6种真菌毒素的同时检测。     

白酒酒醅中真菌毒素的检测

该实验建立了白酒生产原料酒醅中31种真菌毒素的液相色谱-串联质谱检测方法。样品使用乙腈与1%的甲酸水混合溶液（85∶15,V/V）提取,经QuEChERS法净化后,采用多反应监测模式（MRM）检测,可同时对31种真菌毒素进行定性定量分析。结果表明,该方法的相关系数R2为0.991～0.999,线性关系良好,检出限和定量限分别为0.1～5.0 μg/kg和0.4～16.5 μg/kg,平均回收率为83.1%～108.7%,回收率实验结果的相对标准偏差（RSD）为2.5%～9.6%。对10个随机抽取的酒醅样品进行检测,检出的真菌毒素分别有：黄曲霉毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其衍生物、T-2毒素、新茄病镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素、杂色曲霉素。该方法的灵敏度、准确度和精密度良好,可满足白酒生产原料中31种真菌毒素的检测。     

高效液相色谱-串联质谱法同时测定酿酒原料中10种真菌毒素

建立酿酒原料中10种真菌毒素的高效液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测方法。样品经84%乙腈提取后,采用黄曲霉毒素免疫亲和柱净化、外标法定量4种黄曲霉毒素;使用多功能柱净化、同位素内标法定量样品中另外6种真菌毒素。结果表明,10种真菌毒素在各自的线性范围内线性关系良好,相关系数不低于0.998,10种化合物检出限为0.0022~1.79μg/L,定量限为0.075~5.95μg/L;加标回收率为61%~116.2%,相对标准偏差为0.88%~8.61%。该方法具有灵敏度高、稳定性好、定量准确的特点,适用于不同酿酒原料中多种真菌毒素的定量检测。     

全碳标记稳定同位素内标-超高效液相色谱-串联质谱法测定粮食中16种真菌毒素

考察高效液相色谱-串联质谱-全碳标记的稳定同位素内标法精确测定小麦和玉米中16种真菌毒素方法的适用性。样品经提取稀释、加入内标,高效液相色谱-串联质谱测定。结果表明,16种真菌毒素线性相关系数大于0.997,3个水平的添加回收率为83%~114.3%,相对标准偏差为0.9%~13%,定量限为0.5~200μg/kg,通过检测FAPAS04223质控样品和小麦、玉米样品验证了方法的准确性和适用性,能够快速、批量、准确的测定小麦和玉米中16种真菌毒素,为我国粮食真菌毒素污染监测提供便利。     

超高效液相色谱串联-质谱法同时测定香辛料中7种真菌毒素

建立了同时测定香辛料中7种真菌毒素的超高效液相色谱-串联质谱分析方法(UPLC-MS/MS)。选用香辛料中的辣椒、花椒和八角为研究对象,粉碎后的样品用70%甲醇水溶液提取,6合1免疫亲和柱净化,ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱分离,超高效液相色谱-串联质谱测定,电喷雾正离子(ESI+)多反应离子监测方式监测,外标法定量。结果表明,7种真菌毒素在各自的线性响应范围内线性关系良好,相关系数均不低于0.995,7种真菌毒素的定量限为0.5~20 μg/kg。低、中、高3个加标水平平均回收率(n=6)为67.25%~113.47%,相对标准偏差(RSD)为1.07%~10.20%。该方法具有前处理简单、净化效果好、灵敏度高和高通量检测的优点,适用于香辛料中多组分真菌毒素残留的分离和检测。     

免疫亲和柱净化-液相色谱-串联质谱法同时测定水产品中8种霉菌毒素

目的:建立免疫亲和柱净化-液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)同时测定水产品中8种霉菌毒素残留。方法:样品经乙腈水溶液(84:16,V:V)提取,多毒素免疫亲和柱净化。色谱柱为Agilent Proshell 120 SB·C₁₈(2.1 mm×100 mm,2.7μm),流动相为甲醇-5 mmol/L乙酸铵(含0.1%甲酸),梯度洗脱,流速为0.4 mL/min,柱温为40℃。采用电喷雾离子源正负离子同时扫描,多反应监测模式(MRM)进行质谱检测。结果:8种霉菌毒素在1.0～50.0 ng/mL范围内线性关系良好(R²>0.992),方法检出限在0.05～0.50μg/kg之间,定量限在0.17～1.65μg/kg之间;8种霉菌毒素加标回收率在75.6%～106.3%之间,相对标准偏差(RSD)为3.5%～9.3%。结论:该方法操作便捷、灵敏度高、准确可靠,能满足水产品中多种霉菌毒素残留快速检测需求。     

同位素内标UPLC -MS/MS法测定婴儿配方奶粉中性激素苯甲酸雌二醇残留

建立测定婴儿配方奶粉中性激素苯甲酸雌二醇的超高效液相色谱-串联质谱方法。样品前处理采用酶解、甲醇提取,经LC-C18和LC-NH2基固相萃取柱净化。苯甲酸雌二醇由超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)分离、在正离子电离模式(ESI+)及多反应监测模式(MRM)下,以氘代诺龙-d3为内标进行定量检测。方法对婴儿配方奶粉中苯甲酸雌二醇的检出限(LOD)0.39μg/kg,定量限(LOQ)为0.95μg/kg。在4μg/kg和10μg/kg两个加标水平下,婴儿配方奶粉中苯甲酸雌二醇的回收率在76.5%～86.3%的范围内,相对标准偏差在9.7%～15.2%范围内。     

花生油和玉米油中多组分真菌毒素高效液相色谱-串联质谱检测方法的建立

建立花生油和玉米油中黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、单端孢霉烯族化合物等13种真菌毒素的高效液相色谱-串联质谱检测方法。样品经乙腈-水提取、Multi Sep 226多功能净化柱净化后,分别用电喷雾正离子模式和负离子模式检测。经优化,正离子模式流动相为含2 mmol/L甲酸铵的0.1%甲酸-甲醇溶液,负离子模式流动相为0.1%氨水-乙腈溶液。该方法对花生油和玉米油中13种真菌毒素的检出限为0.05~3.00μg/kg,定量限为0.10~10.00μg/kg,平均加标回收率为66.6%~114.9%。所建方法操作简单、灵敏度高、重复性好,可用于花生油和玉米油中多组分真菌毒素的协同测定。     

超高效液相色谱-三重四极杆质谱法快速测定煎炸过程用油中的苯并[a]芘

建立快速检测煎炸过程用油中苯并[a]芘的超高效液相色谱-三重四极杆质谱联用(UPLC-MS/MS)分析方法。样品用乙腈提取后,经EMR-Lipid脂质增强型固相萃取柱净化,以乙腈和水作为流动相进行梯度洗脱,在RRHD SB-C₁₈柱上实现分离,大气压化学电离(APCI)-三重四极杆质谱正离子多反应监测(MRM+)方式检测,以苯并[a]芘-d₁₂作为内标的稳定同位素稀释法定量。结果表明,方法的线性范围为1~200 μg/kg,决定系数R2=0.9997,检出限为0.2 μg/kg,定量限为0.6 μg/kg。平均加标回收率为94.0%~98.7%,相对标准偏差为2.1%~5.6%。20批样品中均检出苯并[a]芘,含量在1.76~6.81 μg/kg之间。该方法前处理简单、基质干扰少、定性定量准确、灵敏度高,适用于煎炸过程用油中苯并[a]芘的测定。     

Quantification of mycotoxins in vegetable oil by UPLC-MS/MS after magnetic solid-phase extraction

ABSTRACT

The detection of mycotoxin contamination in foodstuffs is highly significant for public health. Herein we report an analytical method based on magnetic solid-phase extraction (MSPE) and UPLC-MS/MS for the simultaneous determination of mycotoxins, including fumonisins B₁ (FB₁), zearalenone (ZON) and ochratoxin A (OTA), in vegetable oil. Magnetic nanoparticles coated with double layers of silicon dioxide were synthesised and found to be an effective MSPE adsorbent for mycotoxins. The proposed MSPE procedure serves not only for sample clean-up but also for mycotoxin enrichment that enhances greatly the assay’s sensitivity. Under the selected MSPE conditions, linear matrix-matched calibration curves were obtained for mycotoxins in a concentration range from 0.178 to 625 μg kg^–1. The limits of detection were 0.210 μg kg^–1 for FB₁, 0.0800 μg kg^–1 for OTA and 1.03 μg kg^–1 for ZON. The proposed MSPE UPLC-MS/MS method was applied for the determination of mycotoxins in vegetable oil samples, including maize oil, rapeseed oil and soybean oil. ZON was detected in a maize oil at 101 μg kg^–1, which is below the European Union limit of 200 μg kg^–1 in foodstuffs.     

红枣及其制品链格孢毒素的QuEChERS-UPLC-MS/MS检测方法建立及其污染分析

为进一步掌握红枣中链格孢毒素的污染水平,本研究以市售红枣及其制品为研究对象,探索以QuChERS为核心的真菌毒素提取方法,建立超高效液相色谱-串联质谱的红枣5种链格孢毒素分析技术,并分析了红枣及其制品中链格孢毒素的污染水平。结果表明:采用QuChERS方法提取固体样品中链格孢毒素回收率在74.89%~98.04%;采用固相萃取法提取液体样品中链格孢毒素回收率在68.35%~99.63%,相对标准偏差均小于10%。对阿克苏、喀什、和田三个地区的骏枣原料中5种链格孢毒素进行测定,共检出细交链孢菌酮酸（TeA）、交链格孢酚（AOH）2种毒素,其中喀什地区红枣中TeA最高,达到5.12~10.76 μg/kg。在11种红枣制品中检出TeA、AOH、ALT 3种链格孢毒素,其中红枣酒中TeA达到127.08 μg/kg,仅紫晶枣中检出AOH,含量在34.76~98.61 μg/kg;在冻干枣片、香酥脆枣、紫晶枣中检出ALT,含量在2.04~399.64 μg/kg。本文建立的UPLC-MS/MS方法可满足不同形态红枣样品中链格孢毒素的测定要求,为红枣的食用安全提供理论依据。