禽类大肠杆菌病的综合防治

1．流行病学 近年来，大肠杆菌病已成为制约养禽业迅猛发展的一大疾病，发病率和死亡率居高不下，给养禽业带来了威胁，造成了严重的经济损失。     

全局转录机制工程法筛选丁醇耐受大肠杆菌及性质

作者旨在采用一种快速有效的方法(全局转录机制工程方法)筛选一株具有较高丁醇耐受性的大肠杆菌。通过对全局转录因子σ~(70)进行随机突变,构建rpoD(编码σ~(70)因子)突变库。并采用高通量筛选的方法筛选获得丁醇耐受突变株E. coli JM109/pHACM~(B8),并对该突变株的性质进行了研究。结果表明:丁醇耐受突变株B8能够耐受体积分数2%丁醇,且对其他有机溶剂也具有较高的耐受性,如体积分数3%异丁醇、体积分数8%乙醇、体积分数4%环己烷和体积分数0.3%甲苯。为进一步阐明了B8菌株丁醇耐受机制,分别对B8菌株和对照菌株E. coli JM109/p HACM~(WT)的生理特性进行了研究。结果显示突变株B8胞内的丁醇含量较对照菌株低55%;且在酸性环境下比对照菌株生长更好;此外Mg~(2+)有助于提高菌株B8的丁醇耐受性。本研究为工业化应用中耐溶剂微生物菌株的构建提供了实验依据和理论基础。     

丁香酚对多重耐药大肠杆菌的抑菌活性及其作用机制研究

为研究丁香酚对多重耐药大肠杆菌(Multidrug-resistant Escherichia coli,MDR E.coli)的抑菌活性,利用微量二倍稀释法和琼脂扩散法确定丁香酚对多重耐药大肠杆菌的最低抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC)和最低杀菌浓度(Minimum bactericidal concentration,MBC),并利用紫外分光光度法、考马斯亮蓝法等方法初步分析其作用机制。结果表明,丁香酚对MDR E.coli的MIC和MBC分别为2.50 mg/mL和5.00 mg/mL;丁香酚可延长MDR E.coli迟缓期进入对数生长期的进程,改变菌体结构,增加菌株可溶性蛋白的含量和胞外核酸的量,增大菌体培养液中的电导率,对MDR E.coli具有较强的抑菌作用,这些作用可能归因于丁香酚对其细胞结构的破坏。本研究为临床有效缓解或解决多重耐药大肠杆菌的耐药、感染和致死率等问题提供新的思路、新途径,并为其在医药和食品开发领域的应用奠定理论基础。     

α-葡萄糖苷酶工程菌发酵条件的研究

工程菌DHS-2携带来自黑曲霉(Aspergillus niger)M-1菌株的高转苷活性α-葡萄糖苷酶基因.对DHS-2的发酵条件进行了优化研究,使其α-葡萄糖苷酶活力由178.53U/mL提高到618.75U/mL,提高了2.5倍.质粒稳定性研究表明,DHS-2在传代100代以内,质粒的保留率为82%以上,表现出较好的稳定性.     

大肠杆菌的脉冲磁场杀菌效果及规律性的研究

以大肠杆菌为研究对象,利用自行研制的脉冲磁场杀菌设备,研究了大肠杆菌不同的生长时期、磁场强度、脉冲数和物料温度对杀菌效果的影响.结果表明:大肠杆菌在对数生长前期对脉冲磁场更敏感;随磁场强度的增加,杀菌效果呈现波动性变化,在场强为3.47T时杀菌效果最好;随脉冲数的增加,细菌残留率会出现一谷值,之后随脉冲数的进一步增加,杀菌效果反而变差,在脉冲数为20个时,杀菌效果最好;物料温度越高,细菌残留率越低,杀菌效果越好,但该温度远低于热致死温度.脉冲磁场对大肠杆菌杀菌的主次因素为磁场强度>脉冲数>物料温度;最佳参数组合为磁场强度3.47T,脉冲数20,物料温度30℃.     

高压脉冲电场静态杀菌系统的研制

高压脉冲电场非热处理技术因处理时间短、温升小、能耗低和杀菌效果明显等优点,已成为目前杀菌工艺中研究最为广泛的技术之一.将其应用到食品杀菌中,可代替传统的热处理方法灭活液体中的病菌,为此研制了高功率脉冲电源,其输出最高电压20kV,最大电流50A.结果表明:在实验参数(脉冲电场强度为13kV/cm、脉冲宽度为15μs、连续作用10s)的条件下,牛奶中大肠杆菌死亡率达99%,对下一步的动态杀菌实验具有技术指导作用.     

不同蜂产品抑菌效果的研究

采用滤纸片法,测定和比较了不同浓度的蜂蜜、蜂王浆、蜂胶、蜂花粉溶液对革兰氏阳性菌(金黄色葡萄球菌)和革兰氏阴性菌(大肠杆菌)的抑菌效果.实验结果表明:蜂蜜、蜂王浆、蜂胶、蜂花粉溶液对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均具有抑菌效果,而且蜂胶在抑制革兰氏阳性菌,蜂花粉在抑制革兰氏阴性菌方面效果比其它蜂产品更好.蜂蜜、蜂王浆、蜂胶、蜂花粉具有很好的抑菌效果,是优良的天然保健品.     

水稻密码子优化的cry2A^＊基因在大肠杆菌中的表达及其表达产物的纯化

通过PCR从克隆载体puC18-3Z/Cry2A*上扩增水稻偏爱型密码子优化的抗虫基因cry2A*,经限制性内切酶Nde I和BamH I双酶切定向插入到原核表达载体pET-28a( ),成功构建了在表达蛋白的N端只带有6个组氨酸标签的融合蛋白表达载体pET-28a( )/Cry2A*,并转入人肠杆菌BL21(DE3)中.通过对其表达条件进行优化,发现在IPTG浓度为0.05mmol/L、诱导时问为3h、诱导温度为20℃的表达条件下目的蛋白大部分以可溶形式进行表达.采用Ni-NTA亲和柱纯化得到高纯度目的蛋白,薄层扫描分析蛋白纯度达到95%.     

失活/存活模型在大肠杆菌0157:H7风险分析中的应用

目的 研究出口分割鸡肉中大肠杆菌0157:H7的控制措施.方法 建立了出口分割鸡肉中大肠杆菌0157:H7在速冻过程中的失活模型和在-18℃下的存活模型,通过风险分析提出控制措施.结果 利用所建模型定量描述了出口分割鸡肉从成品到消费过程中大肠杆菌0157:H7带菌量的变化,得出摄入1份鸡肉感染大肠杆菌0157:H7病的风险.结论 本研究提出的控制措施可提高出口分割鸡肉的安全性.     

重组大肠杆菌产耐高温Fe-SOD（H29A）的发酵条件优化

超氧化物歧化酶在药物和化妆品等工业中具有重要的应用价值。为了提高超氧化物歧化酶的产量,作者运用E.coli BL21(DE3)/p ET28a(+)-SOD重组表达系统,采用单因素实验和正交实验相结合的方法,研究了诱导表达条件和发酵培养基对重组大肠杆菌产超氧化物歧化酶的影响。实验结果表明,在培养基中添加1.20 g/L亮氨酸,30 g/L酵母粉且碳氮质量比为3,诱导剂浓度0.20 mmol/L,诱导温度37℃,诱导时间8 h的条件下,菌体生长量达到最高并且Fe-SOD(H29A)的产量达到全菌体蛋白的49.37%,表达量是LB培养基发酵的1.45倍。