重组大肠杆菌表达的枯草芽孢杆菌腺苷磷酸化酶的应用研究

利用枯草芽孢杆茵嘌呤核苷磷酸化酶基因deoD在大肠杆茵BL21(DE3)中表达所得到的蛋白为酶液,催化核苷、2'-脱氧核苷与嘌呤及其类似物之间的反应.结果表明,嘌呤类核苷与嘧啶类核苷相比,前者达到反应平衡的时间较短、产物的得率(或底物的转化率)较高;腺苷磷酸化酶对核苷类的催化活性要比对脱氧核苷类的催化活性强;就碱基而言,对嘌呤和嘌呤类似物的催化活性基本相同.     

姜黄素类似物的合成及其抗氧化活性

姜黄素具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎、神经保护等多种生物活性,但其自身结构使得其生物利用度低。通过对其双羰基结构的改造合成了系列姜黄素类似物,并研究了所合成的化合物对DPPH自由基和ABTS+自由基的清除能力,结果表明,一些姜黄素类似物具有很好的抗氧化能力。     

中低放废物陆地浅埋处置类似物—古墓葬的研究

本文将我国古墓葬和中低放废物陆地浅埋处置在选址、工程结构、设计原理和施工方法等方面进行了类比分析。分析结果表明，我国古墓葬对中低放废物陆地浅埋处置是很好的类似物，古墓及其随葬品长期保存的完好性说明了选择适宜的场址、合理的工程结构和良好的回填材料及科学的施工方法后，中低放废物陆地浅埋处置是安全的。对我国２个墓葬回填材料的测试结果表明，古墓葬材料具有良好的抗渗性，其渗透系数为１．５×１０￣（－８）ｃｍ／ｓ，对Ｃｏ和Ｃｓ吸附能力很强，分配系数分别为１．２×１０￣４和２．１×１０￣４ｍＬ／ｇ，延迟系数分别为４．４×１０￣４和７．７×１０￣４；这些材料良好的性能保证了古墓寿命的长期性，可考虑作为中低放废物陆地浅埋处置工程中的回填材料。     

吡啶—姜黄素光度法测定工业废水铍

在ｐＨ１０氨性溶液中，铍能与吡啶和姜黄素反应生成红色络合物。该反应灵敏度和选择性均较高，摩尔吸光系数ε＝２．２５＋１０＾４Ｌ．ＭＯＬ＾－１．ｃｍ＾－１，ＥＤＴＡ可掩蔽其它金属离子干扰。     

姜黄素显色含水测定钢铁中微量硼

经试验研究制定之本方法免去使用价格昂贵之石英蒸馏器，省去烦冗费时的蒸馏烘干手续。使用普通试剂测定，避免了有毒试剂对工作人员的毒害。分析速度快，重现性好，灵敏度可满足要求。     

Synthesis and high electrocatalytic performance of hexagram shaped gold particles having an open surface structure with kinks

Hexagram shaped gold particles and their analogues enclosed by high index facets with kinks have been successfully synthesized by reducing HAuCl₄ with ascorbic acid (AA) in the presence of poly(diallyldimethylammonium chloride) at room temperature. By using electron microscopy, the surfaces of the hexagram shaped Au particle were found to be {541} planes, which contain high-density steps and kinks. In addition, it was found that hexagonal shield-like and other kind of particles present in the product were analogues of the hexagram shaped Au particles structure, in that they had the same surface structure. In order to confirm the surface structure of all the prepared particles, surface structure sensitive underpotential deposition of Pb was carried out, and the cyclic voltammetric profile was in accordance with the proposed {541} surface. Finally, structure-property relationships of the Au hexagrams were experimentally analyzed by employing the electrocatalytic oxidation of AA as a probe reaction. The electrocatalytic reactions of gold cubes with low-index {100} facets and gold trioctahedra with {221} facets were studied as references. The experimental results showed that the hexagram shaped Au particles and their analogues with exposed {541} facets have the highest catalytic activity among the three kinds of gold particles, owing to the high density of kink atoms. This study should motivate us to further explore methods for the preparation of other well-defined polyhedral metal nanocrystals enclosed by high index surfaces.      

姜黄素对转化生长因子-β1诱导的乳腺癌MDA-MB-231细胞基质金属蛋白酶-9表达及其侵袭能力的影响

目的研究姜黄素对转化生长因子-β1(Transforming growth factor-beta 1,TGF-β1)诱导的人乳腺癌MDA-MB-231细胞基质金属蛋白酶-9(Matrix metallopeptidase-9,MMP-9)表达及其侵袭能力的影响,探讨姜黄素在防治TGF-β1诱导的乳腺癌侵袭转移中可能的作用机制。方法采用CCK-8法检测姜黄素对MDA-MB-231细胞的细胞毒性作用。将MDA-MB-231细胞分为阴性对照组(无血清RPMI1640培养基/DMSO)、TGF-β1处理组(无血清RPMI1640培养基/DMSO+10 ng/ml TGF-β1),姜黄素+TGF-β1处理组(无血清RPMI1640培养基+5、7.5、10μmol/L姜黄素+10 ng/ml TGF-β1)。处理24 h后,采用侵袭小室试验观察细胞的侵袭能力;处理不同时间后,采用Western blot法检测细胞MMP-9、p-Smad2、p-ERK1/2以及p-p38的表达,明胶酶谱法检测各组细胞上清液中MMP-9的活性变化;以ERK特异性抑制剂PD98059、p38特异性抑制剂SB202580、姜黄素和/或TGF-β1处理细胞48 h,采用Western blot和明胶酶谱法检测MMP-9的表达。结果低浓度姜黄素(≤10μmol/L)对MDA-MB-231细胞无明显的细胞毒性作用;姜黄素呈剂量依赖性明显减少了TGF-β1诱导的细胞穿膜数量(P<0.001);姜黄素可显著抑制TGF-β1诱导的MDA-MB-231细胞MMP-9、p-Smad2、p-ERK1/2及p-p38蛋白的表达,且呈浓度、时间依赖性(P<0.05);姜黄素随浓度的增加,对TGF-β1诱导的MDA-MB-231细胞MMP-9活性的抑制作用明显增强(P<0.05);PD98059抑制MMP-9蛋白表达及活性的作用与姜黄素相似,而SB202580对MMP-9无明显影响。结论姜黄素可能通过TGF-β/Smad、TGF-β/ERK信号通路下调TGF-β1诱导的MMP-9的表达及其活性,从而抑制肿瘤的侵袭能力。     

人松弛素H2类似物在毕赤酵母中的高效表达及其活性

目的利用毕赤酵母表达系统高效分泌表达人松弛素H2类似物(Human relaxin-2 analogue,HR2),并检测其生物活性。方法通过密码子优化合成HR2基因,构建重组表达质粒pPICZαA-HR2,转化毕赤酵母菌GS115,甲醇诱导表达,并对表达产物进行Tricine-SDS-PAGE和Western blot分析。表达产物经超滤和柱层析纯化后,切除人工C肽,检测其生物活性。结果经双酶切鉴定和测序证实,重组表达质粒pPICZαA-HR2构建正确;Tricine-SDS-PAGE分析显示,表达的重组蛋白相对分子质量约6 500,表达量占菌体总蛋白的47.6%,为451μg/ml,且为分泌表达;Western blot分析显示,重组蛋白具有良好的反应原性;纯化的重组蛋白纯度达96%;经检测C肽切除的重组HR2对THP-1细胞具有刺激活性。结论成功在毕赤酵母GS115中高效分泌表达了重组松弛素H2类似物,并具有一定的生物活性。     

Ⅰ型聚酮类天然产物中利用点突变产生类似物的研究

点突变是指通过聚合酶链式反应（PCR）等方法向目的DNA片段中引入所需变化（通常是表征有利方向的变化）,包括碱基的添加、删除、改变等。通过构建发生突变的质粒利用遗传转移的方法同源重组到野生型基因组中,使得氨基酸改变从而引起蛋白功能发生变化,获得鉴定正确的突变株后发酵筛选结构类似物。聚酮类天然产物在生物合成过程中,其聚酮链会发生若干步氧化还原反应,通过点突变的方法失活该蛋白,从而跳过该步氧化还原反应的作用,产生PKS骨架上的改变,从而得到结构类似物。     

红曲霉提取姜黄素影响因子的设定研究

姜黄素是从姜黄根茎中提取的生物活性物质,具有抗氧化、抗炎、抗凝、降脂等多种功效.利用红曲霉发酵从姜黄粉末中提取姜黄素,通过对发酵过程中不同料液比、营养比、发酵时间、pH的研究,确定最佳工艺条件为:料液比为0.1∶50,营养比为1/4,发酵时间为4d,pH为5.5,培养温度为30℃,转速为70r/min,装液量为50mL/150mL,在此条件下产品得率为1.785％.