食品生物防腐剂产生菌门间远缘细胞融合研究

乳酸链球菌素(Nisin)和ε-聚赖氨酸是由微生物产生的安全的天然防腐剂,分别由乳酸链球菌和白色链霉菌产生。这两种生物防腐剂的抑菌效果不同,存在互补性。为了获得具有更广谱抑菌作用的优良性状的菌株,探索远缘细胞融合的可行性,以自主分离的ε-聚赖氨酸产生菌白色链霉菌YB12和Nisin产生菌NZ9700作为亲本菌株,通过原生质体融合技术将两个菌株进行门间的细胞融合;通过抗药性筛选、形态学观察、SRAP-PCR分子鉴定,成功获得两株稳定遗传的融合菌株。同时对融合菌株的抑菌活性进行了检测。     

柑橘原生质体融合技术简述

原生质体融合技术能打破柑橘传统育种中常遇到的问题,如远缘杂交不亲和、雌或雄性器官败育以及珠心胚干扰等问题的限制,实现核基因和胞质基因重组,为柑橘遗传育种提供了一条新的途径。柑橘作为原生质体融合技术中最为成功的作物之一,值得其他作物借鉴。本文详细阐述了柑橘原生质体在电场诱导作用下,采取"叶肉原生质体+胚性愈伤组织原生质体"的对称融合模式再生植株的整个技术过程,对于原生质体操作技术的初学者有一定借鉴作用。     

絮凝剂产生菌KJ-10原生质体的制备及再生条件研究

从活性污泥中筛选出具备较高絮凝活性的菌株KJ-10.对菌株KJ-10原生质体的制备和再生的影响因素进行了考察.结果表明,KJ-10原生质体制备和再生的优化务件为:以1%接种量在CM液体培养基中活化12 h,酶解前加入5 mol·L<'-1>甘氨酸预处理12 h,酶浓度为0.1 mg·mL<'-1>,37℃水浴酶解120...     

产漆酶疣孢漆斑菌Ws2-6原生质体制备条件的研究

通过对酶的种类、酶的组合、酶液浓度、酶解时间、酶解温度、渗透压稳定剂等因素的研究获得了制备疣孢漆斑菌原生质体的有效条件.采用浓度为0.7mol/L氯化钠为渗透压稳定剂,在pH 6的磷酸缓冲体系中,以15mg/mL溶壁酶、5mg/mL纤维素酶R-10和10mg/mL蜗牛酶的混合酶液处理培养18h的菌丝体,30℃、80r/min振荡酶解6h,原生质体产生量达到最大值为7.83×106个/mL.此外,对原生质体释放的跟踪观察发现,疣孢漆斑菌原生质体释放有顶端、侧端释放2种方式.     

应用基因组重排技术提高普那霉素产量

将普那霉素产生菌——始旋链霉菌ND-23的孢子和原生质体经紫外线诱变后获得高产突变菌株,其中高产突变株SP-S73的产量达到356 mg/L,比出发菌株提高了31%.在上述增产突变株中选取4株作为基因组重排的出发亲本,对它们进行了4轮基因组重排育种,筛选得到了高产重排菌株,其中1株重排菌株G-211的普那霉素产量为832 mg/L,比产量最高的亲本菌株提高了134%,比原始出发菌株ND-23(272 mg/L)提高了206%.通过研究高产菌株和出发菌株ND-23在5 L罐上的发酵过程,发现普那霉素产生菌的生物合成属于非生长耦合型;其高产菌株G-211在合成产物的时期对还原糖和氨基氮的消耗量均大于原始菌株ND-23,这些结果将为高产菌株发酵条件优化和发酵放大研究提供有价值的参考.     

Expression of green fluoscrescent protein gene in Sclerotinia sclerotiorum

Protoplasts of the pathogenic plant fungus,Sclerotinia sclerotiorum,were transformed using the pPGF plasmid,which contains green fluorescent protein gene,under the control of Aspergillus nidulans regulatory sequences. The pPGF plasmid was introduced by PEG/CaCl2 treatment. Positive transformants were harvested with hygromycin B (HYG) resistance as selective marker,and then were observed with green fluorescence phenomena in response to blue light,which suggested that GFP gene was cloned into genome DNA of S. sclerotiorum. The transformants were verified mitotically stable by Southern blotting analysis and passage culturing. This study is developed as an initial step for further research into infection mechanisms of S. sclerotiorum to plants and interactions with bio-control fungus.     

蒽降解遗传重组菌的构建及其对蒽污染水体修复的研究

为了提高外源蒽降解菌An降解蒽的能力和存活能力,采用原生质体电融合技术,在蒽降解菌An和土生菌Tu之间实行原生质体电融合,并从再生的融合子中筛选到具有特定性状的后代菌株。经研究原生质体制备和再生的最优条件、融合子降解蒽的性能以及存活能力的特性,结果表明,融合子既具有较好降解蒽的能力,100 h内融合子F和亲本An对蒽的降解转化率分别为73%、68%;融合子又具有土生菌Tu存活能力高的特性,到降解后期,An菌的数量大大下降,而融合子保持较稳定的数量。     

Genome Shuffling Enhanced e-poly-L-lysine Production of a Recombinant Streptomyces sp. Feel-1

利用Genomeshuffling技术对1株融合重组菌Streptomycessp．Feel-1产ε-聚赖氨酸（8-PL）进行了育种研究。首先对Feel-1进行了甲基磺酸乙酯（EMS）诱变,以甘氨酸（Gly）和S-2-氨乙基-L-半胱氨酸（AEC）作为抗性指标进行筛选,得到4株正向突变株,ε—PL摇瓶产量分别为1．78g／L、1．89g／L、1．85g／L、1．86g／L,比原始菌株Feel-1（1．60g／L）分别提高了11．3％、18．1％、15．6％、16．3％;然后将这4株产量提高株作为出发菌库,采用双亲灭活法进行了3轮递推式原生质体融合（Genome shuffling）,最终得到了3株产量大幅提高的重组菌,摇瓶产量分别为2．42g／L、2．35g／L和2．37g／L,比原始菌株分别提高了51．3％、46．9％和48．i％;选择其中1株（G3—67）进行补料分批发酵,192h时ε-PL产量达到32．2g/L。     

N~+离子注入-紫外复合诱变选育纤维素酶高产菌株

对产纤维素酶菌株Rhizopus sp.TY1原生质体进行N+离子注入-紫外复合诱变,以期获得高产菌株。以原生质体形成率和再生率为指标,确定最佳酶解时间3h;以致死率和正突变率为指标,确定最佳N+离子注入剂量为2.0×1015ions/cm2、最佳紫外照射时间为90s。实验筛选得到一株高产菌株Rhizopus sp.TY1.2,液态发酵终点时滤纸酶活力(FPA)和羧甲基纤维素酶活力(CMC)分别达到5.1、20.9U/mL,与出发菌株相比,FPA和CMC分别提高了75.9%和175.0%。传代实验结果显示Rhizopus sp.TY1.2产纤维素酶性能稳定,该结果表明N+离子注入-紫外复合诱变所产生的变异是可遗传的变异。     

有关啤酒酵母改良方面的探讨

啤酒酵母质量的优劣直接关系到啤酒发酵和啤酒质量,因此啤酒酵母的改良育种工作至关重要。本文着重介绍并讨论了优良啤酒酵母的特性、几种主要的啤酒酵母改良育种方法及固定化酵母技术。