不同蛋白酶对小麦蛋白酶解物抗氧化活性的影响

小麦蛋白是小麦淀粉加工的副产物,酶解是提高小麦蛋白溶解性和功能性的有效方式,而酶解用酶种类可能对酶解产物的功能性如抗氧化活性有一定影响。采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶6种常用的蛋白酶分别对小麦蛋白进行酶解,并对酶解4 h后酶解物的多肽得率、分子质量分布、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率、超氧阴离子自由基(O_2~-·)清除率、羟自由基(·OH)清除率等反映水解程度和抗氧化能力的主要指标进行评价。结果表明,风味蛋白酶酶解物中多肽得率最高,达91.44%,且分子质量小于3 000 D的多肽含量达76.9%;酶解物质量浓度为3 mg/m L时,木瓜蛋白酶酶解物对DPPH自由基清除作用最好,清除率为65.12%(P0.01),其次是风味蛋白酶(58.43%)和碱性蛋白酶(55.29%);碱性蛋白酶酶解物对O_2~-·清除率效果最好,清除率为58.68%(P0.01),其次是风味蛋白酶(49.25%);碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解物对·OH清除效果最佳,清除率分别为59.23%和58.16%。结果说明,蛋白酶种类对小麦蛋白酶解物抗氧化活性影响显著,风味蛋白酶对提高蛋白水解程度和生成小分子质量多肽的作用明显,而碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶对提高酶解产物抗氧化活性效果较好。     

响应面法优化秋刀鱼酶解制备抗氧化活性肽的工艺

采用酶解法从秋刀鱼肌肉中提取抗氧化活性肽,以水解度(DH)、TCA-可溶性肽含量、DPPH自由基清除率、Fe3+还原力、·OH清除率以及O2?·清除率为指标,从六种商业用酶中(中性蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、胰蛋白酶)筛选出最适蛋白酶.以料液比、酶添加量、酶解时间、温度、pH五个因素进行单因...     

鸡骨酶解物的抗氧化活性研究

分别选用复合风味蛋白酶、Protamex复合蛋白酶、Alcalase蛋白酶、胰酶、胰蛋白酶、AS.1398中性蛋白酶和木瓜蛋白酶水解鸡骨泥,研究鸡骨酶解物(蛋白质含量3 mg/mL)对DPPH、羟自由基(OH·)的清除能力及其还原性.试验结果表明:Protamex复合蛋白酶酶解鸡骨产物的DPPH清除率最强,即81.44%;复合风味蛋白酶酶解物OH·清除率达30.32%,还原性测定的吸光值为0.3.总之,鸡骨酶解物的DPPH清除能力强于羟自由基清除能力和还原力.在研究不同浓度和水解度对鸡骨酶解物清除DPPH活性的影响时发现,随着酶解物蛋白质质量浓度的增大,酶解物的DPPH清除率升高.复合风味蛋白酶、Protamex复合蛋白酶的鸡骨酶解物蛋白质质量浓度分别为4、6mg/mL时,其DPPH清除率分别达91.49%、97.3%.但DPPH清除率与水解度不呈正相关性,只有在特定水解度下,使抗氧化肽含量最高时,水解物才表现出最强的抗氧化能力.例如复合风味蛋白酶、AS.1398中性蛋白酶、Protamex复合蛋白酶、胰酶的最佳水解度分别为12.59%、23.78%、14.45%、20.04%.     

抗氧化活性林蛙胎卵多肽酶解酶的筛选

以东北林蛙胎卵为原料,以酶解液对DPPH自由基和羟自由基(.OH)清除率为指标,分别研究木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、复合蛋白酶和胰蛋白酶在最佳酶作用条件下酶解时间对酶解液清除DPPH自由基、.OH的影响,筛选出适合生产抗氧化活性林蛙胎卵蛋白肽的碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶,再经过复合双酶酶解林蛙胎卵实验,结果表明,以中性蛋白酶与碱性蛋白酶复合酶解林蛙胎卵3h得到肽液的.OH清除率与DPPH自由基清除率最高,达到80.91%和70.45%。     

2种蛋白酶酶解曲拉干酪素条件优化及抗氧化性比较

以曲拉干酪素为原料、水解度为指标,在酶解时间、酶解温度、pH值、曲拉干酪素质量浓度、酶添加量单因素试验基础上,采用响应面试验对碱性蛋白酶和胰蛋白酶酶解工艺条件进行优化,并对2 种酶解液的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、超氧阴离子自由基、羟自由基清除率,Fe2＋、Cu2＋螯合能力和还原力等抗氧化性指标进行比较。结果表明,碱性蛋白酶和胰蛋白酶分别在酶解时间3.8、2.5 h,酶解温度49.8、47.8 ℃,曲拉干酪素质量浓度60、35 g/L,pH 8.5、7.5,酶添加量140、2 900 U/g时水解度最大,为24.25%和13.57%。碱性蛋白酶解液超氧阴离子自由基清除率、Fe2＋螯合能力显著低于胰蛋白酶解液（P＜0.01）;羟自由基清除能力高于胰蛋白酶解液（P＞0.05）;2 种蛋白酶酶解液在酶解液质量浓度1～5 mg/mL时,Cu2＋螯合能力、DPPH自由基清除率和还原力随质量浓度均呈上升趋势,Cu2＋螯合能力低于Fe2＋螯合能力（P＞0.05）,DPPH自由基清除率和还原力二者差异显著（P＜0.01）。2 种蛋白酶对酶解物抗氧化性指标影响不同,碱性蛋白酶酶解物抗氧化性相对较优。     

二步酶解法制备鱼鳞明胶抗氧化肽及其抗氧化活性研究

通过碱性蛋白酶进行第一步酶解,胰蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶和胃蛋白酶分别进行第二步酶解制备鱼鳞明胶抗氧化肽。结果表明,二步酶解法能有效提高酶解物的水解度,降低水解物的分子量,碱性蛋白酶—胰蛋白酶水解物具有显著的自由基清除能力和Fe~(2+)螯合能力。通过响应面优化的胰蛋白酶最佳二步酶解工艺为:底物浓度100 mg/mL、pH 7.8、温度53℃、时间50min,该条件下制备的水解物的Fe~(2+)螯合率为65.72%,清除DPPH·、·OH和O_2~-·的IC_(50)值分别是7.39,0.68,1.84mg/mL。     

双酶酶解制备黑小麦麸皮抗氧化肽

采用双酶法分步酶解黑小麦麸皮蛋白制备抗氧化肽,以水解度、肽得率及总抗氧化活性为指标,通过单因素试验及正交法优化其最佳工艺条件。第一步采用碱性蛋白酶酶解的最佳条件为pH 9,时间2 h,温度50℃,酶添加量18000 U/g;黑小麦麸皮蛋白水解度为11.46%,肽得率为38.33%,总抗氧化活性为6.65μmol/g。第二步采用风味酶酶解的最佳条件为pH 6,温度50℃,时间2 h,酶活添加量10000 U/g;此时水解度为22.74%,肽得率为52.36%,总抗氧化活性为8.47μmol/g。     

鳙鱼鱼肉不同酶解产物的加工特性及抗氧化性

为了研究酶解时间、pH值及酶解产物分子质量大小对鳙鱼(Aristichthys nobilis)鱼肉蛋白酶解产物加工特性及抗氧化性的影响,本研究采用碱性蛋白酶和风味蛋白酶对鳙鱼鱼肉进行酶解,对其酶解产物进行加工特性和抗氧化性分析。结果表明:2种蛋白酶酶解产物在pH 4条件下的溶解性和热稳定性均低于pH 7。其中,碱性蛋白酶和风味蛋白酶酶解产物分别在酶解4.0 h和1.0 h具有较优的溶解性及热稳定性。碱性蛋白酶酶解产物具有较优的亚铁离子螯合能力,而乳化性、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率及还原力则是风味蛋白酶酶解产物更优。酶解产物的加工特性及抗氧化性受蛋白酶种类、酶解时间、pH值及酶解产物分子质量大小的影响。     

酶解异育银鲫制备不同分子量段抗氧化肽的研究

以异育银鲫(Carassius auratus gibelio)蛋白为原料,以酶解产物的DPPH自由基清除率为评价指标,从酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、风味蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶8种蛋白酶中筛选出风味蛋白酶作为最佳酶解用酶,并通过单因素试验和正交试验确定风味蛋白酶酶解的最佳工艺条件为:加酶量3 000 U/g、底物浓度7%、酶解pH 7.5、酶解温度55℃、酶解时间4 h。在该条件下对异育银鲫的水解度为46.78%,酶解产物的DPPH自由基清除率为90.12%、羟自由基清除率为82.31%、超氧阴离子自由基清除率为79.45%;在此基础上对酶解液进行硫酸铵盐析、活性炭脱腥、超滤膜分段、透析脱盐、浓缩和干燥,得到不同分子量段酶解产物。     

斑鰶鱼蛋白控制酶解及其酶解物抗氧化活性研究

以斑鰶鱼(Clupanodom punchtatus)为原料,采用食品级的风味蛋白酶、复合蛋白酶、碱性蛋白酶、胰酶和木瓜蛋白酶酶解斑鰶鱼蛋白,制备具有DPPH自由基清除活性的富肽酶解物;对酶解物在化学反应体系和亚油酸氧化体系中的抗氧化活性进行综合评价。研究结果表明:碱性蛋白酶为斑鰶鱼蛋白制备抗氧化肽的最适酶,最优制备条件是:温度55℃,酶解时间5h,料水比1∶3,加酶量0.2%,pH 7.5,此时酶解物(蛋白质量浓度10 mg/mL)DPPH自由基清除率为89.54%;在化学反应体系中,酶解物的DPPH自由基清除能力、还原力和亚铁离子螯合力都随着蛋白质量浓度的增加而增强。在蛋白质量浓度为5 mg/mL的条件下,DPPH自由基清除率为78.26%;酶解物的还原力为0.372(低于抗坏血酸);亚铁离子螯合率为46.81%。在亚油酸氧化体系中,酶解物(蛋白质量浓度10 mg/mL)对亚油酸过氧化物的抑制率为59.61%。     

地鳖虫酶解液体外抗氧化作用的研究

通过正交试验得出Arazyme蛋白酶酶解地鳖虫的最佳工艺条件为加酶量300 U,酶解时间5 h,料水比1:20.并分析了其酶解液对羟自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O2-·)、二苯代苦味酰基自由基(DPPH)的清除作用以及对亚油酸自氧化反应的抑制作用.结果表明:地鳖虫酶解液对·OH、O2-·、DPPH三种自由基的最高清除率分别为75.15%(浓度为50 g/L)、31.72%(浓度为2.5 g/L)、74.88%(浓度为80 mg/L);在肽含量为2.0 mg时,对亚油酸自氧化反应的抑制率为95%.     

牡蛎酶解产物的ACE抑制活性和清除自由基活性研究

研究了牡蛎蛋白质分别经537酸性蛋白酶和Alcalase碱性蛋白酶作用所得酶解产物的ACE抑制活性以及对DPPH·、·OH、O2·三种自由基的清除作用。结果表明,两种酶的作用产物都具有一定的ACE抑制活性和清除自由基活性。综合评价工艺条件以及功能实验结果得出,采用537酸性蛋白酶可以简化工艺,对于水解度为16％的酸性蛋白酶酶解产物,蛋白浓度为1mg/mL时,对ACE的抑制率为71.71％;20mg/mL时,对DPPH·、O2·自由基的清除率分别为76.23％、24.36％;8mg/mL时,对·OH自由基的清除率为8947％。相对分子质量分布结果表明,体系主要存在2肽到5肽的多肽类物质,HPLC图谱中对应峰面积约占总面积的76.99％。     

蛋白酶水解鸡枞菌制备酶解液工艺优化及抗氧化活性

以鸡枞菌为原料,以DPPH·、ABTS^+·、O2^-·清除率及水解度为指标,采用蛋白酶对鸡枞菌进行水解,制备酶解液。以碱性蛋白酶为水解酶,以DPPH·清除率和水解度为参考值,采用单因素和正交试验分析法研究料液比、加酶量、pH、温度、时间对酶解效果的影响。结果表明:应用碱性蛋白酶制备的鸡枞菌酶解液抗氧化效果最佳,酶解条件为料液比1∶25(g/mL),加酶量3500 U/g,pH 7,酶解温度45℃,酶解时间2.5 h。此条件下所得酶解液的DPPH·清除率为73.23%,水解度为44.6%,酶解液对DPPH·、ABTS^+·和O2^-·3种自由基均有清除作用,其IC50分别为0.25,0.39,1.09 mg/mL,但清除能力明显低于同浓度Vc的清除能力。     

鱼糜废水回收蛋白制备抗氧化肽的工艺优化

目的 采用胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、复合风味蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶对白鲢鱼鱼糜加工废水回收蛋白进行酶解制备抗氧化肽。方法 通过单因素试验筛选出最佳蛋白酶和反应条件, 以1, 1-二苯基-2-三硝基苯肼(1, 1-diphenyl-2-picrylhydrazyl, DPPH)自由基清除率为指标, 通过响应面试验对酶解条件进行了优化。结果 在pH值为6.6、温度为52 ℃条件下, 复合风味蛋白酶与中性蛋白酶比例为1.23:1(酶活单位比)、底物浓度为3.15%、酶添加量为4000 U、酶解时间为4.2 h时, 回收蛋白酶解产物自由基DPPH清除率最高为73.41% (σ=1.61%)。结论 采用酶解法对鱼糜加工废水回收蛋白进行酶解, 可制备具有较高抗氧化活性的淡水鱼类来源的活性肽。     

罗非鱼肉蛋白酶解液的抗氧化活性

采用胰蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、罗非鱼胃蛋白酶和罗非鱼肠蛋白酶分别酶解罗非鱼肉蛋白,研究并比较不同酶对罗非鱼肉蛋白的酶解效果及产物的抗氧化特性。结果表明:7种酶的酶解液都显示了一定的抗氧化性,其中木瓜蛋白酶酶解液水解度(DH)最高,为20.85%,对DPPH自由基、O2-.清除率均最佳,分别为75.74%、34.35%;罗非鱼胃蛋白酶酶解液的DH为17.03%,对.OH清除率和还原力均最高,分别为60.51%、0.653。整体的抗氧化性能显示:罗非鱼胃蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解罗非鱼肉蛋白得到的酶解液的抗氧化活性优于其他酶。     

刺参不同酶解产物的抗氧化活性分析

为了探究刺参不同酶解产物的抗氧化活性,外源添加了3种蛋白酶（碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶）酶解鲜活刺参。测定了不同蛋白酶组的水解度、分子量分布、3种自由基（DPPH∙、O2-∙、∙OH）的清除率。结果表明：空白组水解度随着酶解时间的延长没有明显差异,蛋白酶组的水解度与酶解时间呈正相关关系,不同蛋白酶组水解度高低顺序为,中性蛋白酶>碱性蛋白酶>木瓜蛋白酶,中性蛋白酶组最高为19.4%,木瓜蛋白酶组最低为16.1%;酶解后大分子量片段减少,<200 u的氨基酸片段增加;碱性蛋白酶组,酶解时间1 h,粗肽得率最高达到64.2%。酶解时间2 h内,蛋白酶酶解后酶解液的抗氧化能力比未处理的样品明显提高,并且与酶解液浓度呈正相关关系;质量浓度为5 mg/mL的中性蛋白酶组（酶解0.5 h）,DPPH∙清除率可达到79.64%;碱性蛋白酶组3 h,∙O2-清除率为49.58%,0.5 h∙OH清除率最高为21.78%。综上所述,在抗氧化活性方面,中性蛋白酶酶解产物在外源添加的三种蛋白酶中效果最好,外源添加蛋白酶是提高刺参蛋白利用率的有效方式。     

碱性蛋白酶降解小麦面筋蛋白制备抗氧化产物的工艺优化

以DPPH自由基清除率为指标,采用碱性蛋白酶降解小麦面筋蛋白,考察了酶解温度、pH值、酶解时间以及底物量对小麦面筋蛋白酶解产物抗氧化活性的影响,在正交试验的基础上,得到碱性蛋白酶解小麦面筋蛋白的最佳工艺条件为:酶解温度50℃,pH 8.0,酶解时间25 min,底物量5.0 g.在此条件下小麦面筋蛋白酶解液的DPPH自由基清除率可达70.41%.     

基于ESR体系的海参肠酶解物自由基清除活性研究

以中性、木瓜、碱性、风味蛋白酶为工具酶,研究4种海参肠酶解物的自由基清除活性。分别采用分子排阻色谱法和高效液相色谱法对海参肠酶解物进行分子质量分布及氨基酸组成分析,应用电子自旋共振法(ESR)检测羟基(·OH)自由基、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基的清除活性。结果表明,4种酶解物的分子质量均主要分布在10 ku以下,且3 ku以下组分含量在78%以上。酶解物中含有与抗氧化活性密切相关的氨基酸,精氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸及赖氨酸的相对含量总和约为35%;在质量浓度为6~20 mg/m L范围内,4种海参肠酶解物均具有明显的清除·OH和DPPH自由基的能力。依据半抑制率(IC50),各酶解物对·OH和DPPH自由基的清除能力排序为木瓜≈碱性≈风味中性,中性碱性木瓜风味。该研究结果表明,海参肠酶解物具有潜在的开发价值。     

酶解麦胚制备风味活性肽的研究

为提高小麦副产物综合利用附加值,研究采用风味蛋白酶酶解麦胚制备风味活性肽,以感官评分和麦胚肽得率为衡量指标优化酶解工艺,测定酶解物中风味物质含量、肽分子量分布及其体外抗氧化活性。结果表明,麦胚最佳酶解条件为pH7,底物浓度2%,酶解温度50℃,酶添加量4%。此时,麦胚肽得率为（8.17±0.70）%,酶解物具有一定咸鲜滋味并伴有清淡香气。麦胚酶解物中挥发性物质以烃类、酸类和醇类物质为主;呈鲜物质主要为天冬氨酸、5''-鸟嘌呤核苷酸和琥珀酸;肽分子量主要分布小于3 000 Da,其DPPH自由基清除率、ABTS＋自由基清除率和羟自由基清除率的IC50值分别为10.327、0.448、0.574 mg/mL,具有较好的体外抗氧化活性。     

海蜇低分子肽制备及体外抗氧化活性

目的 优化海蜇低分子肽制备工艺,评价其抗氧化活性及分析氨基酸组成。方法 海蜇利用碱性和中性蛋白酶双酶分步酶解制备海蜇肽, 以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl, DPPH)自由基清除率为指标, 响应面实验优化酶解工艺条件。采用超滤技术,获得分子量≤3.5 kDa 海蜇低分子肽（low molecular weight peptide from Rhopilema esculentum Kishinouye, RKLP）。通过测定DPPH自由基、2,2’-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸[2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS]自由基及超氧阴离子（O2-）自由基的清除率, 评价RKLP抗氧化活性。氨基酸分析仪分析RKLP氨基酸组成。结果 酶解制备海蜇抗氧化肽的最佳工艺条件为：酶解温度50 °C、3%碱性蛋白酶pH 7.5酶解2 h、1%中性蛋白酶pH 7.0酶解2 h,所得的DPPH自由基清除率为71.52%±0.59%,接近与预测值70.57%。RKLP水解度为62.1%±0.57%,具有较强的DPPH自由基、ABTS自由基及O2-自由基的清除能力,表明RKLP具有较好的抗氧化活性。RKLP氨基酸种类丰富,必需氨基酸含量达29.87%,蛋白质营养价值较高,且含有较多的与抗氧化活性密切相关的疏水氨基酸、酸性氨基酸、碱性氨基酸和芳香族氨基酸。结论 优化海蜇酶解工艺条件,超滤制备的RKLP具有较强的抗氧化活性及较高的水解度,初步阐释其抗氧化活性机制,为海蜇高值化应用提供一定的理论依据。