牛乳中乳铁蛋白的分离纯化

采用强阳离子交换色谱梯度洗脱法,对牛乳中的乳铁蛋白进行分离和纯化,并利用SDS-PAGE定性检测.结果表明:采用强阳离子交换色谱梯度洗脱法可较好地分离提取出乳铁蛋白,分离出的乳铁蛋白显示为单一区带,每毫升牛乳能提取乳铁蛋白0.23 mg.纯度为95%.     

响应面法优化去内毒素乳铁蛋白纯化工艺的研究

通过采用离子交换色谱法来去除乳铁蛋白中的内毒素,通过鲎试剂来检测内毒素的含量,并使用响应面法优化了乳铁蛋白的纯化工艺.结果表明:去内毒素后乳铁蛋白中内毒素从原来的18.26 EU/mL降低为0.77 EU/mL,在洗脱剂pH值为4.83,洗脱速度1.21 bV/h,洗脱剂浓度0.05 mol/L醋酸钠缓冲溶液条件下,蛋白得率可达到最大值62.87％.     

强阳离子交换色谱法从牛初乳中分离纯化乳铁蛋白的研究

本实验研究了离子交换色谱技术大规模纯化乳铁蛋白的色谱条件。选用的SP Sepharose Fast Flow离子交换剂对乳铁蛋白有很好的吸附选择性,洗脱速度可达到2L/h。以pH值为7.7～8.0,10mmol/L的磷酸盐为起始缓冲液,通过改变离子强度进行分步洗脱。先采用0.5mol/L的NaCl溶液选择性洗脱分泌型免疫球蛋白A和乳过氧化物酶组分,再采用1mol/L的NaCl洗脱LF组分。经SDS-PAGE测定,所得乳铁蛋白组分显示为单一区带,相对分子质量为80400Da。经等点聚焦测定,所得乳铁蛋白的等电点为8.65。中试生产的精制品中乳铁蛋白的纯度和回收率分别为94.20%和75.45%。     

干酪乳清中乳铁蛋白分离纯化的研究

采用超滤、阳离子交换层析方法从热钙法处理过的干酪乳清中分离纯化乳铁蛋白。结果表明,经预处理后的干酪乳清加入经过磷酸盐缓冲液(pH值为8.0)平衡的树脂中,分别用浓度为0.3 mol/L和0.8 mol/L的NaCl进行阶跃洗脱,所得乳铁蛋白经SDS-PAGE和免疫印迹法(Western Blotting)检测,纯度达93.6%。     

膜分离牛初乳中乳铁蛋白的工艺参数研究

研究采用膜分离技术分离牛初乳中乳铁蛋白的工艺条件,并摸索出膜污染的解决办法。以牛初乳为原料,采用单因素试验和二次通用旋转组合设计法优化膜分离乳铁蛋白的工艺条件,并进行响应面分析,比较水法、碱法和水法结合碱法清洗膜的方法。结果显示:提取乳铁蛋白的最适温度38℃、操作压力0.19 MPa、pH 6.9。在此条件下得到膜通量53.2 L/m2.h,膜效能0.79 g/m2.min。膜清洗采用水洗10 min,0.5 mol/L NaOH与4%NaClO混合液清洗15 min,膜通量恢复率可以达到95%以上。     

乳清中乳碱性蛋白的分离与纯化

利用离子交换和葡聚糖凝胶层析等技术从制作干酪的副产物乳清中提取乳碱性蛋白。分别以洗脱速度、洗脱温度、洗脱液浓度为因素,进行L9(34)正交试验,最终得出各因素对离子交换树脂提取效果的影响主次顺序依次为洗脱速度＞洗脱温度＞洗脱液浓度;采用D072 强酸性阳离子交换树脂提取乳碱性蛋白的最佳洗脱条件为洗脱速度2.50mL/min、洗脱温度40℃、洗脱液浓度0.04mol/L。在该条件下的乳碱性蛋白提取率为7.55%。在制得的粗MBP 的基础上,利用Sephadex G-100 型葡聚糖凝胶,蛋白分离范围4000～150000D,对其进行纯化,测得最终纯度为83.55%。     

反相高效液相色谱法快速测定乳铁蛋白含量

目的建立一种反相高效液相色谱法(RP-HPLC)快速测定乳铁蛋白在乳原料及乳制品中含量的方法。方法根据酪蛋白在等电点(p H 4.6)凝聚沉淀特点,采用RP-HPLC法,用p H4.6醋酸盐缓冲液溶解分离乳铁蛋白,用C18色谱柱快速分离,用流动相A为0.1%三氟乙酸水溶液,流动相B为含有0.09%(V:V)三氟乙酸的90%(V:V)乙腈水溶液,进行梯度洗脱,检测波长214 nm,流速0.7 m L/min。结果乳铁蛋白在10~500 mg/L之间呈现良好的线性,相关系数为0.9999,平均回收率为98.0%,RSD=0.8%(n=9)。结论该方法推广性高、快速,简便、准确,可用于乳铁蛋白原料、奶粉、牛奶及保健品等中乳铁蛋白的含量检测。     

乳铁蛋白的分离工艺研究

讨论了从牛初乳中分离乳铁蛋白的工艺。结果表明，牛初乳经过离心脱脂得到脱脂乳，加入带羧甲基的弱酸性阳离子交换剂CM-Sepharose Fast Flow在4℃下进行动态吸附，用去离子水将没有吸附上的杂蛋白冲洗掉，然后使用质量分数为1．5％和5％的NaCl溶液进行阶跃洗脱；经过两步阶跃洗脱得到的乳铁蛋白纯度可达95％以上。     

牛乳中乳铁蛋白的分离纯化研究

牛乳经酸沉淀除酪蛋白后,通过超滤、离子交换法分离纯化得到乳铁蛋白,利用考马斯亮蓝、SDS-PAGE电泳定性定量检测。结果表明:每毫升牛乳能提取乳铁蛋白0.22mg,纯度为95%。     

大孔吸附树脂对乳铁蛋白抗菌肽脱盐作用的研究

研究了乳铁蛋白抗菌肽在DA201-C大孔吸附树脂吸附和解吸过程中的脱盐作用.通过静态吸附实验,得到了吸附的动力学曲线及方程、吸附等温线和最佳洗脱液浓度.对于10mg/mL的乳铁蛋白抗菌肽,吸附速率方程为Y=0.5035X-0.3971(R2=0.9045);其浓度为30mg/mL时,吸附速率方程为Y=0.4887X 1.0815(R2=0.9412).动态吸附实验结果表明:在采用85%乙醇为洗脱剂时,DA201-C对乳铁蛋白抗菌肽的脱盐率超过97%,回收率达到92%.     

阳离子交换树脂静态吸附法特异性分离乳清中乳铁蛋白的关键技术

乳铁蛋白(lactoferrin,Lf)是一种对婴幼儿有重要生理功能的活性乳蛋白,掌握Lf特异性分离技术对打破国外技术垄断、降低成本、促进我国婴幼儿配方奶粉发展具有重要意义.该研究以乳清为原料,基于最大吸附量、吸附率、特异吸附为指标,对不同吸附剂做了筛选,探讨了工艺参数对吸附效果的影响及洗脱液离子浓度对洗脱效果的影响,...     

大豆卵磷脂中二亚油酰磷脂酰胆碱的分离纯化

以大豆粉末磷脂为原料,采用95%乙醇溶液提纯得到卵磷脂,再采用反相制备色谱系统分离纯化得到二亚油酰磷脂酰胆碱（DLPC）。探讨了洗脱剂种类、洗脱流速、上样量对分离纯化DLPC的影响。结果表明：以甲醇溶液作为洗脱剂进行洗脱时,在甲醇体积分数95%、洗脱流速28 mL/min、上样量0.5 g（以40 g C18柱填充材料为基准）时,DLPC纯度可达91.2%,得率为21.5%;以乙醇溶液作为洗脱剂进行洗脱时,在乙醇体积分数80%、洗脱流速28 mL/min、上样量0.75 g（以40 g C18柱填充材料为基准）时, DLPC纯度可达92.6%,得率为20.1%。从DLPC的纯度考虑,以乙醇溶液作为洗脱剂优于甲醇溶液。     

浅谈乳铁蛋白在肉类保鲜中的应用

乳铁蛋白作为一种天然的、具有许多特殊生理功能的糖蛋白,已经引起国际上广泛关注。本文叙述了乳铁蛋白的抗菌机制,包括:乳铁蛋白的结构特性、抗菌作用、抗菌机制等,并对其在肉类保鲜中的应用前景作了展望。     

Comparison of lactoferrin content in colostrum between different cattle breeds

Lactoferrin content of colostrum obtained from cows within 24 h after parturition was measured using a single radial immunodiffusion test and was compared among cows of two dairy breeds (Holstein-Friesian, Jersey) and two beef breeds (Japanese Black and Japanese Brown). Average lactoferrin content in colostrum of dairy breeds was 2 mg/ml and in colostrum of beef breeds was .5 mg/ml. Lactoferrin content of colostrum due to lactation number was also different among breeds. In dairy breeds, multiparous cows had lactoferrin content two to three times higher than that of primiparous cows; beef breeds showed no obvious differences between lactation years. Lactoferrin content also varied considerably within breed. In beef breeds, half the cows had values of nearly zero. Transferrin content in colostrum was fairly constant (.9 mg/ml) and was not as variable among and within breeds. There was no correlation between lactoferrin and transferrin contents in colostrum. Examination of cows lacking lactoferrin suggested that transferrin plays an important role as an iron carrier from a cow to her newborn calf.     

金属螯合色谱分离提取初乳免疫球蛋白和乳铁蛋白

对金属螯合色谱分离提取初乳免疫球蛋白和乳铁蛋白的新工艺进行了研究,并采用SDS-PAGE电泳分析法测定了分离得到的免疫球蛋白和乳铁蛋白的含量。试验结果表明,采用金属螯合色谱可较好地分离提取免疫球蛋白,其纯度可达89%。同时还可分离得到副产品乳铁蛋白,但含量较低,仅为33%。另外还对影响螯合色谱分离的因素进行了初步的探讨。     

大孔树脂法纯化茶皂素研究

为了提高茶皂素的纯化效率以实现工业化生产,采用静态吸附试验与动态吸附试验相结合的方法筛选合适的大孔树脂,并在单因素试验的基础上,采用正交试验优化工艺参数.重点考察了上样速度、溶剂乙醇体积分数、上样液质量浓度对动态吸附率的影响以及洗脱剂乙醇体积分数、洗脱剂流速、洗脱剂体积对动态解吸率的影响.优化出D4020大孔树脂的动态吸附工艺参数为:上样速度0.9 mL/min,溶剂乙醇体积分数20％,上样液质量浓度27 mg/mL;动态解吸工艺参数为:洗脱剂乙醇体积分数60％,洗脱剂流速1.8 mL/min,洗脱剂体积2.0 BV.     

锦橙中β-葡萄糖苷酶的提取纯化及其结构表征

本文以锦橙为原料,对其果皮与果肉中的β-葡萄糖苷酶进行了提取纯化以及结构表征。实验结果显示,果皮中0.35 mol/L NaCl洗脱液中的β-葡萄糖苷酶的平均酶活为(6.57±4.27)×10-3 U/g,其活性显著高于0.4 mol/L NaCl洗脱液中的β-葡萄糖苷酶活性和果肉中的0.35 mol/L和0.4 mol/L NaCl洗脱液中的酶活(p<0.05),且0.35 mol/L NaCl洗脱液中的蛋白质浓度最高,达0.154 mg/mL。在该条件下纯化得到的β-葡萄糖苷酶的分子量略高于170 kDa,且该酶的最大荧光吸收峰为582 nm,其粒径范围为5~25 nm。     

黑莓天然维生素E纯化技术研究

目的建立一种硅胶柱层析纯化黑莓种籽油中天然VE的方法。方法采用单因素实验的方法,以维生素E的含量为考察指标,对洗脱剂种类、洗脱剂配比、硅胶用量、洗脱剂用量进行优化。结果黑莓天然VE的最优纯化工艺参数为:硅胶与维生素E粗提物的质量比3?1;乙醇?正己烷(8?1,V/V)为洗脱剂,洗脱剂用量为粗提物的15倍。在此条件下,纯化物中维生素E的含量可以达到(51.5±0.530)%。结论采用硅胶柱层析方法可以有效纯化黑莓天然维生素E。     

聚酰胺分离纯化黄栌叶漆黄素工艺研究

以漆黄素吸附率、洗脱率为指标,研究聚酰胺树脂分离纯化黄栌叶漆黄素的工艺。从静态吸附和动态吸附两个方面,考察上样流速、样品浓度、洗脱剂浓度及用量对漆黄素纯化工艺的影响。确立了聚酰胺分离纯化黄栌叶漆黄素的最佳工艺条件:上样流速1mL/min,样品浓度0.535 8mg/mL,上样量2BV,洗脱剂为70%的乙醇,洗脱剂用量4BV。黄栌叶粗提物在最佳条件下精制3次后漆黄素含量由粗品的10.30%升高到了79.82%,纯度提高了6.75倍。     

乳铁蛋白的抑菌作用及其机制

叙述了乳铁蛋白和乳铁蛋白多肽的抗菌机制。包括:乳铁蛋白的结构特性、抗病毒、抗菌功能、抗菌机制、影响抑菌活性的因素等,并对其应用前景作了展望。