超声波提取灵芝菌丝体中灵芝酸的研究

目的:利用超声波对灵芝菌丝体中灵芝酸的提取工艺进行研究。方法:以单位灵芝菌丝体中灵芝酸的提取量为指标,采用单因素分析和正交实验,对影响灵芝菌丝体中灵芝酸提取的乙醇浓度、超声波浸提时间、浸提pH和料液比四个因素进行研究。结果:乙醇浓度100%,超声波浸提时间90min,pH2·5,加12倍量乙醇浸提为最佳工艺条件,所提取灵芝酸含量达46·7mg·g-1。结论:采用超声波提取技术可以较大幅度提高灵芝酸的提取得率,大大缩短提取时间。     

硒和铈对灵芝多糖和灵芝酸含量的影响

目的:考察在培养液中添加硒和铈对灵芝多糖和灵芝酸含量的影响。方法:向培养液中分别添加不同质量浓度的亚硒酸钠或硝酸铈铵,用液体浅层静置培养法培养灵芝菌丝体,用苯酚-硫酸法测定菌丝体和菌液中的多糖,用冰醋酸-香草醛法测定菌丝体中的灵芝酸。结果:添加40mg/L亚硒酸钠培养的灵芝菌丝体,多糖含量比对照提高42.3%,灵芝酸含量比对照提高10.6%;添加15mg/L硝酸铈铵培养的灵芝菌丝体,多糖含量比对照提高51.1%,灵芝酸含量则有所降低;两种元素还可明显提高菌液中灵芝多糖的含量。结论:向培养液中适量添加硒或铈,可显著提高灵芝菌丝体和菌液中的多糖含量,硒还可同时提高菌丝体的灵芝酸含量,铈则降低灵芝酸含量。生产中可根据实际需要添加硒或铈,以获得品质优良的灵芝菌丝体和菌液。     

灵芝菌丝体中灵芝酸的体外抑菌作用

采用杯碟法试验灵芝菌丝体中灵芝酸对革兰阴性菌(大肠杆菌)、革兰阳性菌f金黄色葡萄球菌),以及芽孢杆菌(枯草芽孢杆菌)的体外抑菌作用.结果表明,灵芝酸组分对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的生长有较明显的抑制作用,而对枯草芽孢杆菌的抑制作用相对较弱;该灵芝酸对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为12.5 mg/mL;而对枯草芽孢杆菌的最小抑菌浓度为50 mg/mL.此外,该灵芝酸的抑菌成分在40℃和60℃下(处理2 h)较稳定,但在80℃和100℃温度下,热稳定性较差.     

pH值控制灵芝发酵产生灵芝酸的研究

研究pH值对灵芝液体深层发酵产生灵芝酸的影响及提高灵芝酸类物质产量的工艺.采用pH值控制法液体深层发酵生产灵芝酸,HPLC法测定灵芝酸,硫酸-苯酚法测定灵芝多糖.胞内灵芝酸的合成与菌丝体生长呈偶联型,胞外灵芝睃彤成与菌丝体生长呈部分偶联型.菌丝体牛长及胞内灵芝酸生成的最适pH值为5.5,胞外灵芝酸产生最适pH值为4.5,本实验按优化的pH值控制条件,胞外灵芝酸产量达到0.86 g/L,比自然发酵工艺提高了34.4%;并提高了胞内灵芝酸的产量,达到0.364g/kg湿菌体.pH值控制发酵法可有效提高灵芝酸的产量.     

灵芝-小麦发酵物开发利用的研究

对利用灵芝菌丝固体发酵培养小麦的发酵物 (即灵芝 -小麦发酵物 )进行了有效成分 -灵芝酸、氨基酸和矿物元素含量的测定 ,检测出 4种灵芝酸 ,灵芝酸总量为 0 .0 6 6 mg/ g,其中灵芝酸 E含量最高 ,为 0 .0 42 mg/ g;检测出 18种常见氨基酸 ,总量为 140 .5 m g / g ,其人体必须氨基酸占 30 % ,对矿物元素的检测结果表明 ,磷 3.0 35 mg/ g、钾3.888mg/ g、镁 1.44 3mg/ g、锶 1.6 2 6 mg/ g、铁 0 .1485 mg/ g、钙 0 .7495 mg/ g、锌 37.8μ g/ g等 2 1种的矿物元素。同时测定了灵芝子实体、小麦中氨基酸和矿物元素的含量     

补料方式对灵芝菌丝体液态深层发酵合成灵芝三萜的影响

在50 L发酵罐中采用4种补料培养方式对灵芝菌丝体液态深层发酵合成灵芝三萜进行比较。结果表明,通过补料可以明显地促进灵芝菌丝体的生长和灵芝三萜的合成,同时,不同的补料方式对菌丝体生长和灵芝三萜合成有不同的影响。采用指数补料方式可获得较高的菌丝体干质量,并提高灵芝三萜含量,与传统的发酵方式相比,采用此补料策略取得了较好的效果。发酵终点灵芝菌丝体干质量达到17.68 g/L,灵芝三萜含量达到4.58 g/100 g干菌丝体,分别比分批发酵提高了65.70%和100.88%。     

灵芝酸的分子结构与生物活性的关系

用量子化学半经验方法 (AM 1)计算了从发酵生产的灵芝菌丝体中纯化得到的灵芝酸组分M 1和M 2的分子轨道和电子结构 ,结果表明 :M 1和M 2的分子轨道组成及电子结构较为相似 ,但在前线轨道上存在差异 (M 1的LUMO能量较低 ) ,它们的生物活性相近但又有差别 ,与灵芝酸M 1和M 2抑菌试验的结果相符 .此外 ,从理论上探讨了灵芝酸分子结构与生物活性间的关系     

3 种不同产地灵芝子实体主要化学成分比较

为探讨不同产地灵芝子实体（安徽1号、吉林1号和吉林2号）主要化学成分的差异,采用多种分析方法对其基本物质组成、微量元素、多糖、灵芝酸、氨基酸和脂肪酸进行分析。结果表明,不同产地灵芝子实体中蛋白质、氨基酸、脂肪酸、微量元素和三萜类化合物含量差异较大;3 种灵芝子实体中均有较高含量的Ca、Mg、Fe微量元素,以及较高含量的必需氨基酸和不饱和脂肪酸,氨基酸和脂肪酸总量由高到低依次均为安徽1号＞吉林2号＞吉林1号;3 种灵芝子实体水溶性粗多糖含量相近,但碱溶性粗多糖含量、纯化多糖的单糖组成差异较大;在3 种灵芝子实体样品中,安徽1号的灵芝酸A和灵芝酸B总含量（5.62 mg/g）最高。这些结论将为进一步完善灵芝子实体的质量标准提供技术支持。     

灵芝子实体、菌丝体和孢子粉化学成分的比较

为探讨灵芝子实体、菌丝体和孢子粉中化学成分的差异,主要对3种材料中的蛋白质、氨基酸、葡萄糖、糖醇、核苷以及三萜等成分含量进行测定,并对三萜的HPLC指纹图谱进行相似度分析。结果发现,灵芝孢子粉中蛋白质质量分数最高为11.1%,而菌丝体中蛋白质质量分数最低为7.1%。灵芝子实体中灵芝三萜含量高,种类全,而菌丝体中的三萜种类少,含量低,同时未破壁的孢子粉中基本测不到灵芝三萜。糖醇含量也有差别,菌丝体中有较高含量的阿糖醇,而在未破壁孢子粉和子实体中,都是甘露醇含量较高。同时发现3种材料所含核苷的类别、含量均不同。实验结果表明,灵芝子实体、菌丝体和孢子粉3种材料的化学成分差异大,在保健品使用上应区分使用。     

HPLC-ELSD测定灵芝及其孢子粉中胆碱质量分数

建立了一种运用高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)测定灵芝及其孢子粉中胆碱含量的方法。实验采用Agilent公司ZORBAX 300-SCX阳离子交换色谱柱(4.6 mm×250mm,5μm),柱温30℃,流动相为乙腈-乙酸铵溶液,等度洗脱,流量为1.0 mL/min,进样量为10μL;蒸发光散射检测器检测,漂移管温度为60℃,喷雾器为模式加热,雾化气为净化空气,气体压力为172.4 kPa。研究结果表明,该方法精密度、重复性、稳定性和回收率均良好,在6.25~200μg/mL范围内胆碱具有良好的线性关系,检出限为6μg/mL,定量限为12μg/mL,是一种快速高效检测灵芝及其孢子粉中胆碱的方法。     

灵芝酸对人体糖代谢调节作用的研究

研究了灵芝酸对试验小鼠肝脏糖耗量的影响,结果表明灵芝发酵液、菌丝体以及从发酵液中提取的灵芝酸均能提高糖耗量。分析了糖代谢酶活性和中间代谢产物的变化,己糖激酶活性显著增加,乳酸脱氢酶和乳酸含量均有不同程度降低,丙酮酸含量增加,丙酮酸羧化酶和苹果酸脱氢酶活性显著增强,细胞色素氧化酶活性显著增强,灵芝酸主要通过增加糖的好氧代谢提高糖耗量,为灵芝酸广泛的药理活性提供了新的理论参考。     

灵芝孢子粉多糖的PMP-HPLC指纹分析

采用部分酸水解耦合PMP柱前衍生反相高效液相色谱法对15个不同灵芝(赤芝)孢子粉样品中多糖进行检测和指纹表征,研究建立灵芝孢子粉多糖的HPLC指纹图谱。标定了19个共有特征指纹峰,同一产地不同批次产品间的相似度均大于0.97,不同产地产品间的相似度大于0.8;赤芝孢子粉与其他不同部位及不同品种的灵芝类产品的多糖指纹图谱显示出较大的差异。这些相似性和差异可作为灵芝孢子粉产品质量监控、与其他不同部位和不同品种的灵芝类产品的区别鉴定以及灵芝孢子粉的真伪与掺假检测的主要依据之一。     

胞外灵芝酸发酵培养基的优化

通过对碳源、氮源的筛选,结果表明,含有酮基的碳源、氮源要优于不含酮基的,因此推测在灵芝酸发酵过程中酮基的存在有利于灵芝酸的合成。碳氮源浓度实验表明,只有在一定的浓度范围内才能较好地合成灵芝酸。正交优化试验确定了灵芝酸深层发酵的最佳培养基组成为蔗糖4%,豆饼粉1.5%,KH2PO4 0.15%,MgSO4 0.15%,验证试验表明菌丝体干重和胞外灵芝酸含量较优化前分别增加了19%和16.5%。     

灵芝菌丝体总三萜超声辅助提取工艺优化

以灵芝菌丝体为原料,在单因素试验基础上,通过正交试验和Box-Behnken响应面设计法优化超声辅助提取灵芝菌丝体总三萜工艺。结果表明,超声辅助提取灵芝菌丝体总三萜正交试验最佳工艺为:超声功率90 W、超声时间50 min、pH 8、料液比1∶40(g/mL),在此条件下灵芝菌丝体三萜平均提取率为0.76%;超声辅助提取灵芝菌丝体总三萜响应面试验最佳工艺为:超声功率90 W、超声时间42 min、pH 8、料液比1∶30(g/mL),在此条件下,灵芝菌丝体总三萜平均提取率为1.09%,与最大预测值1.13%相差0.04%。这两种方法得到的提取工艺参数可靠,可为灵芝三萜工业化生产提供技术参考。     

灵芝功能成分酸奶营养品质与风味物质分析

以灵芝酸、灵芝多糖和脱脂乳为原料,制备灵芝多糖酸奶和灵芝酸酸奶,采用固相微萃取-气相色谱-质谱（solid-phase micro extraction-gas chromatography-mass spectrometry,SPME-GC-MS）联用技术对不同灵芝功能成分添加的酸奶的挥发性风味物质进行分析。结果表明,与空白对照酸奶相比,灵芝多糖酸奶和灵芝酸酸奶乳酸活菌数分别增加3.1 倍和1.5 倍,灵芝多糖可显著促进嗜热链球菌、植物乳杆菌增殖生长。经SPME-GC-MS测定,空白对照酸奶中检测出24 种挥发性风味化合物,质量分数0.12%灵芝多糖酸奶中检测出37 种挥发性风味化合物,质量分数0.09%灵芝酸酸奶中检测出30 种挥发性风味化合物,3 种酸奶的风味特征为酮、醛、酸、醇、酯类等化合物综合作用结果。与空白对照酸奶相比,灵芝多糖酸奶中酮类、醛类、醇类相对含量降低14.15%、3.00%、10.35%,酯、烃类相对含量提高14.01%、10.42%;灵芝酸酸奶中酮、酸、醇类化合物相对含量分别降低4.78%、2.22%、8.93%,醛、酯类相对含量增加5.31%、10.61%。结果表明灵芝酸、灵芝多糖酸奶中风味物质种类增加,功能品质提高。     

宁夏不同品种干红葡萄酒中辅色素的构成及定量分析

利用高效液相色谱法(HPLC)对宁夏贺兰山东麓赤霞珠、蛇龙珠、梅辘辄、西拉及黑比诺5个品种的干红葡萄酒进行辅色素的定性定量分析,研究宁夏不同单品种红葡萄酒中初始辅色素的构成及含量。结果表明,在色谱条件为:ZORBAXSB C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相A:水∶乙酸=98∶2(v/v),流动相B:乙腈;梯度洗脱程序:0~10 min,16%B;10~25 min,20%~40%B;25~30 min,40%~0%B;柱温箱温度为30℃;流速为1.0 m L/min,进样量为10μL,检测波长为280 nm条件下各个单体酚在30 min内得到了较好的分离。5种干红葡萄酒均被检测出没食子酸、安息香酸、儿茶素、香豆酸、丁香酸、水杨酸、阿魏酸、咖啡酸、芦丁和槲皮素10种重要辅色素,其中,赤霞珠和梅辘辄10种辅色素总含量很接近,都在1300 mg/L左右;其余3个品种的含量都在950 mg/L左右。对不同干红葡萄酒中的辅色素进行主成分分析,确定了葡萄酒中不同辅色素的贡献率,并得到3个主成分和10种辅色素的线性组合关系。     

不同灵芝菌种液体发酵条件研究

用液体摇瓶法对6个灵芝品种进行单因素试验,探索其发酵条件,结果表明:大盖G9、泰山仙芝、灵芝444在培养基Ⅰ中80r/min、28℃培养其菌丝体干重量达到最大,分别为0.7635g/100mL、1.0124g/1000mL、0.5635g/100mL;灵芝44在培养基Ⅰ中120 r/min、24℃培养菌丝体干重量最大为0.5197g/10mL:灵芝265在培养基Ⅰ中160 r/min、28℃培养菌丝体干重量最大为0.9954g/100mL;而灵芝267在培养基Ⅳ中160 r/min、32℃培养菌丝体干重量最大为0.9302 g/100mL;且胞外多糖的最大产生量的条件与菌丝体最高得率的条件不同.     

灵芝超微粉理化特性研究

采用超微粉碎技术,得到了灵芝超微粉。对超微粉与常规粉(过60目筛得到)、超细粉(粒径≤30μm,相当于550目)的表征,显微镜观察和粗多糖溶出特性检测结果表明,灵芝超微粉粉体粒度分布在2.92~6.03μm(相当于5 654目),体积平均粒径为3.18μm,100%的粉体颗粒粒径(D100)小于9.96μm,呈对称的单峰分布,均匀性好;其比表面积为3.63μm/g,分别是常规和超细粉的15倍和2倍。同时超微粉细胞破壁完全,主要功效成分灵芝多糖在20 min时的浸出率与超细粉2 h时的浸出率相当,显示生物利用度得到有效提高。     

不同品种灵芝固态发酵菌丝体多糖和三萜含量的比较

以多糖和三萜含量为指标,探讨了8种灵芝菌株固态发酵菌丝生物活性物质含量的差异。结果表明,不同菌株间固态发酵菌丝得率、多糖和三萜含量的差异较大,紫芝菌丝得率最高,达到了21.66%;云芝单位菌丝体多糖含量最高,为8.16%;赤芝和树舌灵芝单位菌丝体三萜含量最高,分别为1.13%和1.08%。8种灵芝菌株中紫芝单位培养基的多糖产量最高,达到了0.996%,赤芝单位培养基的三萜产量最高,为0.173%,因此紫芝适合于固态发酵生产灵芝多糖,而赤芝适合于固态发酵生产灵芝三萜。     

灵芝酸发酵工艺条件的优化

研究了培养基组成和发酵条件对灵芝酸产量的影响,在单因素试验的基础上通过正交试验确定了提高灵芝酸产量的最佳培养基组成和最佳发酵条件.获得胞外灵芝酸的最佳发酵工艺条件为蔗糖40g/L,豆饼粉1.5g/L,KH2PO4 1.5g/L,MgSO4 1.5g/L,起始pH值为6.0,转速150r/min,装液量100mL,温度30℃;在优化后的条件下菌体生物量和灵芝酸产量分别为9.15g/L和0.441g/L.