不同降胆固醇能力的植物乳杆菌烯酰-ACP还原酶基因的mRNA表达分析

为了研究烯酰-ACP还原酶基因在不同降胆固醇能力的植物乳杆菌中的m RNA表达水平,通过提取植物乳杆菌M1和UVs29的总RNA,利用RT-PCR方法克隆了2株菌的烯酰-ACP还原酶基因,利用荧光定量PCR方法分析了烯酰-ACP还原酶基因在2株菌中的m RNA表达水平,结果显示:植物乳杆菌UVS29中烯酰-ACP还原酶基因的m RNA表达量高于植物乳杆菌M1,说明烯酰-ACP还原酶的表达量可能会对植物乳杆菌降胆固醇能力产生影响。     

降胆固醇乳酸菌的生长特性及发酵培养基的优化

为了更好地高效发挥乳酸菌的降胆固醇益生机制,提高降胆固醇能力,对3株具有降胆固醇乳酸菌进行高密度发酵培养。根据菌体密度选择菌株合适的碳源和氮源:选择葡萄糖作为植物乳杆菌117-1和鼠李糖乳杆菌118-1增菌培养基碳源;选择蔗糖作为粪肠球菌M53-2增菌培养基的碳源。选择酵母提取物作为植物乳杆菌117-1、鼠李糖乳杆菌118-1的氮源;选择蛋白胨作为粪肠球菌M53-2的氮源。通过正交试验得出:3株菌的最适培养温度均为37℃。植物乳杆菌117-1的最佳培养条件为p H6.4、接种量4%,鼠李糖乳杆菌118-1为p H6.4、接种量5%,粪肠球菌M53-2为p H6.2、接种量4%。通过单因素试验确定1:5(w:v)作为3株菌株与保护剂的比例,菌液添加量为3 mL。在菌制剂降胆固醇能力测试中,3株菌株菌制剂的胆固醇去除率差异显著且较之前相比有所提升。     

不同初始pH值对保加利亚乳杆菌关键蛋白酶基因表达的影响

由于保加利亚乳杆菌自身不能直接利用外源蛋白,其必须通过蛋白水解体系外源蛋白质,生成供菌体正常生长需要的短肽和游离氨基酸。选择具有高蛋白水解活力的6株保加利亚乳杆菌作为供试菌种。将菌株接种于不同初始pH值的灭菌脱脂乳中,在m RNA转录水平上,应用实时荧光定量PCR技术,探讨保加利亚乳杆菌的蛋白水解体系中关键蛋白酶基因表达情况。结果表明:在脱脂乳体系中,初始pH值对保加利亚乳杆菌蛋白水解关键酶基因的表达存在显著影响,随着初始pH值的升高菌株KLDS 1.0501,1.9201,1.9203和1.0208的各基因表达量均上调,在pH=6.5时,部分基因表达量继续上调,且各菌株间蛋白基因表达有较大差异。     

内蒙古奶豆腐中潜在益生性乳酸菌的筛选

对从内蒙古奶豆腐中分离的16 株乳酸菌进行16S rDNA分子鉴定,其中9 株鉴定为乳酸片球菌、5 株为屎肠球菌、1 株为植物乳杆菌、1 株为鼠李糖乳杆菌。进一步对分离得到的菌株进行模拟人工胃液和胆盐耐受性、疏水性、体外降胆固醇和抗氧化特性研究。结果表明：植物乳杆菌M1-2和鼠李糖乳杆菌M6-1对模拟人工胃液有较高的耐受性;屎肠球菌M7-1、M8-1和M8-2具有较高的胆盐耐受性;植物乳杆菌M1-2和鼠李糖乳杆菌M6-1对甲苯和十六烷的疏水性显著高于其他菌株。体外功能性实验结果表明,屎肠球菌M1-1、植物乳杆菌M1-2、乳酸片球菌M1-3和M2-1的体外降胆固醇能力较高,胆固醇降解率均超过30%;鼠李糖乳杆菌M6-1对过氧化氢的耐受性、羟自由基（•OH）和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基的清除能力最高。综上所述,植物乳杆菌M1-2和鼠李糖乳杆菌M6-1具有较好的益生特性,可作为今后开发功能性产品的潜在益生菌株。     

降胆固醇乳酸菌的益生特性及其作用机理

考察了具有降胆固醇乳酸菌(乳酸乳球菌L14-3、鼠李糖乳杆菌118-1、粪肠球菌M53-2、植物乳杆菌117-1、植物乳杆菌23-1)的益生特性,且初探乳酸菌降胆固醇的作用机理。通过模拟胃液、胰液进行乳酸菌的耐酸耐胆盐测定,并评价了乳酸菌对抗生素的抗性。通过胆固醇、胆盐的共沉淀作用和菌体细胞吸收两种方式去除发酵液中的胆固醇,利用邻苯二甲醛法测定胆固醇的含量,确定胆固醇的去除率。结果表明:通过共沉淀作用和菌体吸收,乳酸乳球菌L14-3和鼠李糖乳杆菌118-1分别去除胆固醇的比例最高。在pH=2.0的人工胃液中,粪肠球菌M53-2和乳酸乳球菌L14-3的活菌数显著高于其他3株菌(P0.05)。粪肠球菌M53-2对pH 3.0的人工胃液有较好的耐受性,存活率显著高于其他4株菌(P0.05)。在pH=8.0人工胰液中,鼠李糖乳杆菌118-1和植物乳杆菌117-1的存活率显著高于其他菌株(P0.05)。植物乳杆菌117-1耐药性最好。因此,研究具有降胆固醇的益生菌具有广阔应用前景。     

3株植物乳杆菌LPL04、LPL05、LPL14的益生特性

对广东省微生物种质资源库保藏的3株野生植物乳杆菌LPL04、LPL05、LPL14进行体外实验,对其耐酸、耐胆盐、抑菌、降胆固醇能力进行探讨,为接下来的菌种优化提供方向。通过活菌计数测定3株植物乳杆菌耐酸、耐胆盐能力,通过抑菌圈法测定3株植物乳杆菌抑菌特性,通过邻苯二甲醛法测定植物乳杆菌的胆固醇降解能力。结果表明,其中植物乳杆菌LPL05耐酸能力最强,p H2.5条件下2 h活菌数达2.0×107 cfu/m L,存活率为72.9%;LPL04耐胆盐能力最好,0.3%胆盐水平下2 h活菌数依然达到2.05×107 cfu/m L水平,存活率为36.6%;LPL04对藤黄微球菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌均有良好的抑制效果;LPL14在体外降解胆固醇量最大,降解量为17.86μg/m L;3株菌均有良好的益生菌潜力。     

一株降胆固醇乳酸菌的筛选、鉴定及在发酵泡菜中的应用

对降胆固醇乳酸菌进行了筛选和鉴定。采用MRS培养平板从泡菜中筛选出99株接触酶试验为阴性、革兰氏染色为阳性、有明显透明钙圈的菌株,并分别测定它们的降胆固醇作用。胆固醇降解率大于30%的有8株,其中I4的降解率为37.3%±1.50%(n=3)。通过生理生化试验和16SrRNA序列分析法,鉴定菌株I4为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。对植物乳杆菌I4进行了耐酸、耐胆盐试验的研究,实验表明植物乳杆菌I4具有很好的耐酸能力和一定的耐胆盐能力。对降胆固醇植物乳杆菌I4菌制剂在发酵泡菜中的应用进行研究。实验表明:与未添加I4菌种的发酵泡菜对比,泡菜成熟时间缩短,亚硝酸盐含量降低,总酸与总氨基态氮没有差异,感官检验没有差异,并进行了微生物指标测定,符合国家GB 2714-2003《酱腌菜卫生标准》。     

植物乳杆菌调节抗体和细胞因子水平缓解食物过敏的机制

食物过敏危害人体健康,利用益生菌特有的抗过敏作用来缓解食物过敏是治疗食物过敏的新方向,然而目前关于益生菌缓解过敏的机制研究还不够深入。本文以前期筛选出的具有抗过敏功能的4株植物乳杆菌为研究对象,利用Balb/c小鼠建立食物过敏模型,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)、荧光定量PCR(RT-PCR)等方法研究植物乳杆菌对Th1/Th2相关细胞因子、抗体分泌的影响。ELISA结果表明,将4株植物乳杆菌与致敏小鼠脾细胞共培养可降低IL-4的分泌水平,增加IFN-γ的分泌水平,而荧光定量结果证实IL-4及其转录因子GATA-3 m RNA表达水平显著降低,IFN-γ及其转录因子T-bet mRNA表达水平显著升高,这一结果与细胞因子分泌水平结果一致。此外,4株植物乳杆菌均可下调致敏小鼠血清中IgE分泌水平,缓解由食物过敏造成的肠道黏膜及肺泡组织损伤。这些结果说明植物乳杆菌通过调节Th1/Th2平衡来缓解食物过敏。     

植物乳杆菌Zhang-LL耐胃肠道逆环境及降胆固醇特性研究

利用从发酵米粉中筛选出的一株植物乳杆菌Zhang-LL探讨其胃肠道耐受性及体外降胆固醇功效。本实验分别在p H1.5~3.0、胆盐浓度0.1%~0.5%的条件下模拟人体胃肠道环境,采用活菌计数法检测菌株Zhang-LL耐胃肠道逆环境特性及邻苯二甲醛法检测降胆固醇效果。结果表明:初始菌数为1×107CFU/m L的植物乳杆菌Zhang-LL在p H1.5~3.0的环境中3 h后,活菌数仍可达106CFU/m L;在胆盐浓度为0.10%~0.50%环境中8 h,活菌数可达105~107CFU/m L;体外胆固醇降低率在20.69%~35.68%范围。研究表明植物乳杆菌Zhang-LL具有较强的耐胃肠道逆环境特性及良好的降胆固醇能力,为开发研制降胆固醇功能食品及微生态制剂提供了实验基础。     

可降胆固醇的优势乳杆菌筛选

为丰富降胆固醇、降血糖的益生菌资源,以实验室10株潜力益生菌株为实验对象,进行体外降胆固醇能力、胆盐水解酶(BSH)活性及α-葡萄糖苷酶抑制率试验,测定菌株对人工胃液和胆盐的耐受性,评价优势菌株的细胞黏附性能及对抗生素的耐药安全性能。结果表明,植物乳杆菌LH-511、植物乳杆菌10-12、植物乳杆菌10-4对胆固醇的降解率在50%以上,显著高于商业菌株植物乳杆菌299V(p<0.05)。植物乳杆菌10-12、植物乳杆菌SD-H9对α-葡萄糖苷酶的抑制率高达41.7%、40.1%。植物乳杆菌LH-511、植物乳杆菌10-12、植物乳杆菌10-4、植物乳杆菌10-14、卷曲乳杆菌OF48-2pH5这5株菌具有较好的BSH活力、α-葡萄糖苷酶抑制性、抗逆性以及对HT-29细胞的黏附能力。但仅植物乳杆菌LH-511和卷曲乳杆菌OF48-2pH5通过了10种抗生素的安全性试验。综上所述,植物乳杆菌LH-511和卷曲乳杆菌OF48-2pH5具有较好的降胆固醇、降血糖潜力,且通过了抗逆性、黏附性、安全性试验,可用于进一步的开发和应用。     

产胆盐水解酶BSH乳酸菌的鉴定及发酵条件优化

目的:鉴定降胆固醇和产胆盐水解酶的乳酸菌菌株,并通过优化发酵条件提高胆盐水解酶酶活.方法:对初步筛选的乳酸菌菌株Lp-1进行体外降胆固醇试验,采用PCR方法鉴定菌株中的胆盐水解酶基因,用16SrRNA方法鉴定该菌株,并对该菌株发酵培养基和发酵条件进行优化.结果:乳酸菌菌株Lp-1具有体外降胆固醇功能,基因组中含有胆盐水解酶基因,其脱氧核糖核苷酸序列与已发表的胆盐水解酶基因同源性为98.9%;该菌株与已发表的植物乳杆菌16S rRNA同源性为99%;通过发酵条件优化,以葡萄糖为碳源,蛋白胨、酵母粉为氮源,碳氮比1∶1,初始pH 6.5,接种量7%,在37 ℃下培养14 h,胆盐水解酶酶活最高达到11.2 U/mL.结论:鉴定到1株植物乳杆菌Lp-1(Lactobacillius plantarum Lp-1),该菌含有胆盐水解酶基因,并产胆盐水解酶;发酵条件优化后该菌产胆盐水解酶活力比优化前提高6倍.     

降胆固醇乳酸菌的筛选及其鉴定

对19株乳杆菌进行体外实验,研究它们在MRS-CHOL培养基中对胆固醇的降解量,进而分析各菌株降胆固醇的能力。结果表明,所有试验菌株均有降解培养物中胆固醇的能力,去除率在3.84%～42.28%之间。其中有2株试验菌对培养物中胆固醇的降解率大于40%,这2株菌对胆固醇的脱除效力也较高。这2株菌WE43-1-2和WE57-1经形态学、生理生化反应以及糖类发酵试验被鉴定为敏捷乳杆菌(Lactobacillus agilis)和干酪乳杆菌干酪亚种(Lactobacillus casei subsp casei)。     

朝鲜族辣白菜中益生性乳酸菌的筛选及其功能特性

从辣白菜中挑出105株菌株,革兰氏染色后筛选出18株杆菌,其余为球菌。经耐受性试验初步筛选8株疑似乳酸杆菌,做后续功能特性研究,包括菌株黏附性、抗氧化、降亚硝酸盐、同化胆固醇等。结果表明,A11,A16具有很强的胃酸耐受性(存活率大于75%);A15,A16耐胆盐能力较强(存活率大于64%)。A15对蛋白黏着力较强,疏水性较高。体外功能性试验表明,A16抗氧化性能较高,A1降亚硝酸钠能力强(清除率大于75%),A16胆固醇清除能力远优于其它,清除率大于57%。综上所述,A1,A11,A15,A16是相对优势菌株,益生功能较强,经16S r RNA的PCR产物鉴定A1,A11,A15是植物乳杆菌,A16是唾液乳杆菌。     

1 株产γ-氨基丁酸植物乳杆菌谷氨酸脱羧酶基因的克隆与表达

以1 株产γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid,GABA）植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）BC114谷氨酸脱羧酶为研究对象,通过聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）技术获得该酶基因,对其进行生物信息学分析,并转入大肠杆菌BL21（DE3）中实现异源表达。采用实时荧光定量PCR、聚丙烯酰胺凝胶电泳和高效液相色谱分别测定重组菌不同发酵时间点谷氨酸脱羧酶基因的表达量、蛋白表达量以及产GABA能力。结果表明：植物乳杆菌中谷氨酸脱羧酶基因大小为1?410?bp,编码469?个氨基酸,蛋白二级结构由α-螺旋（32.2%）、β-折叠（11.5%）和无规则卷曲（56.3%）构成,完成了该酶的三维结构同源建模;成功构建了重组谷氨酸脱羧酶大肠杆菌,谷氨酸脱羧酶基因在诱导6?h相对表达量最大,而蛋白表达量较基因在转录水平表达量有一定滞后,在8?h达最大值,此时GABA产量也达最高,为2?387?mg/L。     

降胆固醇和耐酸耐胆盐益生菌的筛选研究

本研究通过含有胆固醇胶束的MRS-胆固醇液体培养基从五株益生菌中筛选出降胆固醇能力较强的益生菌,接着对筛选出的益生菌进行耐酸、耐胆盐试验。结果表明,五株益生菌都有降胆固醇的功能,其中干酪乳杆菌LCA-1、鼠李糖乳杆菌LR-D和植物乳杆菌LP-C的胆固醇去除率较高,分别为25.26%、22.18%和20.03%;LR-D能够短时耐受低p H值环境,在p H 2.5的发酵液中培养2h的存活率能够达到14.39%,但是耐胆盐能力较差;LP-C能够长时间耐受低p H值的环境,具有较强的胆盐耐受能力,在高胆盐环境(0.5%)中培养2 h的存活率高达133.75%,培养24 h的活菌数仍保持在1.13×105 cfu/m L,此时其余两株菌的活菌未检出,说明LP-C能够耐受高胆盐环境。植物乳杆菌LP-C具有较高的胆固醇去除率,能够耐受低p H值和高胆盐环境。因此,可用于进一步研究与开发。     

植物乳杆菌降胆固醇Lp10菌株的rhaD基因敲除株的构建

以转录组数据为依据推测植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)中rhaD基因参与胞外多糖(exopolysaccharide,EPS)合成代谢中的鼠李糖代谢过程,从而通过调节胞外多糖合成并利用其吸附作用达到降胆固醇效果。为了进一步验证rhaD基因的功能,本论文研究利用同源重组技术,构建rhaD基因敲除载体,采用电击转化方法将构建的敲除载体导入植物乳杆菌Lp10菌株感受态细胞,并在抗性平板上筛选转化子,以转化子的基因组DNA为模板进行PCR及测序鉴定,再利用邻苯二甲醛法测定突变株与初始菌株的降胆固醇能力。结果表明,敲除载体pNZ5319-rhaD被成功构建,测序结果显示rhaD基因被成功敲除;敲除菌株的降胆固醇能力略有上升。本论文研究结果不仅为植物乳杆菌基因敲除载体的构建提供了实验技术支持,同时为植物乳杆菌降胆固醇相关功能基因的验证分析奠定了理论依据。     

降胆固醇乳酸菌的筛选与鉴定

目的:从传统食品中筛选具有降胆固醇功能的乳酸菌菌株,并鉴定。方法:以碳酸钙-MRS培养基从传统食品中筛选乳酸菌。应用改良的降胆固醇筛选培养基,筛选具有较高降胆固醇能力的乳酸菌菌株,并结合菌落形态学、过氧化氢酶试验、明胶液化试验和糖发酵试验鉴定菌株。结果:从传统泡菜中筛选出两株乳酸菌Lp T1和Lp T2,其胆固醇降解率分别达到49.11%和50.03%,经鉴定均为植物乳杆菌。结论:筛选的植物乳杆菌具有较高的胆固醇降解率,为其进一步开发应用奠定了良好基础。     

基于iTRAQ蛋白组学的植物乳杆菌镉吸附及耐受特征分析

植物乳杆菌是在食品工业中广泛应用的一种益生菌,不同植物乳杆菌对重金属镉的吸附及耐受能力存在显著的菌株差异。为了探究植物乳杆菌的镉吸附机制,通过筛选得到两株镉吸附能力有显著差别的植物乳杆菌(强吸附菌株CCFM8610和弱吸附菌株CCFM595),采用基于同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)方法的比较蛋白组学分析手段,研究两株菌间的差异表达蛋白。在两菌株中共鉴定得到1 690个蛋白,其中有109个丰度差异表达蛋白,以及89个仅在强镉吸附菌株CCFM8610检测到的蛋白。通过对这些差异蛋白进行功能注释、代谢通路重构以及互作网络解析,阐明植物乳杆菌CCFM8610与CCFM595的镉吸附及耐受机制可能为:表达更多的参与细胞壁及胞外聚合物合成的蛋白,从而加强镉离子的隔离和吸附;CCFM8610一直处于低压力的状态,表现为压力应答相关蛋白在CCFM8610中低表达;CCFM8610具有独特的能量节省的代谢模式,表现为TCA循环通路蛋白的整体较低水平;CCFM8610具有更强的金属外排转运能力,表现为cadA等镉外排泵也在CCFM8610具有更高丰度;CCFM8610的疏水性氨基酸的表达增加,可增强细胞的表面疏水性,还能通过表达调节渗透压及胞内结合镉的氨基酸来应对镉毒性。     

山西老陈醋源植物乳杆菌173对II型糖尿病大鼠的降血糖机制

本文主要研究了山西老陈醋源植物乳杆菌173对II型糖尿病大鼠的降血糖机制。试验结果表明菌株173可以显著改善糖尿病大鼠的血糖、血脂和激素水平。荧光定量PCR结果显示植物乳杆菌173可通过调节肝脏PPARs和GLUT4基因的表达,促进葡萄糖稳态和提升胰岛素敏感性。植物乳杆菌173促进了肠道中短链脂肪酸产生菌的生成。短链脂肪酸发挥降糖作用主要是通过活化肠道G-蛋白受体基因（如GPR43,GPR41）进行的。另外,还证明了植物乳杆菌173可以显著上调肠道紧密连结蛋白ZO-1、Claudin、Occludin及黏蛋白MUC2基因的表达,从而增强肠道黏膜屏障功能,发挥降糖功能。     

四川牦牛奶和曲拉中九株乳酸菌的分子鉴定

为准确鉴定分离自我国四川鲜牦牛奶和曲拉中9株乳酸菌到种水平,作者运用16S rDNA序列分析、recA基因特异扩增和hsp60-RFLP等多种分子技术对分离自我国四川地区鲜牦牛奶和曲拉中的9株乳酸菌进行分类鉴定。结果证实,16S rDNA序列分析法可将9株乳酸菌初步归类为植物乳杆菌群(4株),肠膜明串珠菌(4株),瑞士乳杆菌(1株)。由于16S rDNA序列分析法不能区分植物乳杆菌和戊糖乳杆菌,为了进一步鉴定植物乳杆菌群中的4株菌,继续采用recA基因特异扩增和hsp60-RFLP技术对其细分,结果表明recA基因特异扩增和hsp60-RFLP的方法均能很好地把植物乳杆菌群中的4株菌鉴定到种水平,且均为植物乳杆菌。