强阳离子交换色谱法从牛初乳中分离纯化乳铁蛋白的研究

本实验研究了离子交换色谱技术大规模纯化乳铁蛋白的色谱条件。选用的SP Sepharose Fast Flow离子交换剂对乳铁蛋白有很好的吸附选择性,洗脱速度可达到2L/h。以pH值为7.7～8.0,10mmol/L的磷酸盐为起始缓冲液,通过改变离子强度进行分步洗脱。先采用0.5mol/L的NaCl溶液选择性洗脱分泌型免疫球蛋白A和乳过氧化物酶组分,再采用1mol/L的NaCl洗脱LF组分。经SDS-PAGE测定,所得乳铁蛋白组分显示为单一区带,相对分子质量为80400Da。经等点聚焦测定,所得乳铁蛋白的等电点为8.65。中试生产的精制品中乳铁蛋白的纯度和回收率分别为94.20%和75.45%。     

牛初乳中乳铁蛋白的分离及纯化

乳铁蛋白(Lactoferrin,简称Lf)作为一种糖蛋白,主要存在于哺乳动物的各种外分泌物中,如乳汁、眼泪、唾液等,乳汁尤其是初乳中Lf的含量很高犤1犦。本文通过盐析法和有机溶剂沉淀法从牛初乳中分离出乳铁蛋白,并应用酶联免疫法鉴定各步骤中分离的乳铁蛋白,获得的乳铁蛋白的相对分子量为75,000Da。     

日本香川地区荷斯坦牛乳与娟姗牛乳营养成分的比较

目的比较日本香川地区荷斯坦和娟姗牛乳中乳清蛋白的总蛋白质含量,乳过氧化物酶(LPO)和乳铁蛋白的一些基本性质。方法以荷斯坦和娟姗牛乳为对象,经酸沉淀除酪蛋白后,通过离心,SP-Sepharose离子交换层析分离纯化得到乳过氧化物酶和乳铁蛋白,利用考马斯亮蓝定量、SDS-PAGE定性、ABTS检测乳过氧化物酶活性、最后通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)确认分子量。结果娟姗牛乳中乳清蛋白的总蛋白质和乳过氧化物酶含量均高于荷斯坦中乳清蛋白中的总蛋白质和乳过氧化物酶含量。娟姗乳清蛋白中的乳过氧化物酶活性(0.870 5 U/ml)高于荷斯坦乳清蛋白中的乳过氧化物酶活性(0.758 9 U/ml)。娟姗乳清蛋白中的乳过氧化物酶和乳铁蛋白分子量分别为786 48.154和831 23.538 k Da,荷斯坦乳清蛋白中的乳过氧化物酶和乳铁蛋白分子量分别为777 64.841和827 65.494 k Da。结论对于乳酪行业,当考虑养殖奶牛品种生产乳酪同时又想最大限度利用需要处理的乳清蛋白和乳铁蛋白的时候,相比于荷斯坦奶牛,娟姗奶牛是更好的选择。     

乳铁蛋白和乳铁素的抗菌活性比较

牛乳铁蛋白是从牛乳中提取出来的一种铁结合性糖蛋白，牛乳铁素是从牛乳铁蛋白N-端水解下来的25个氨摹酸残荩。它们具有多种乍物学功能，其中的广谱抗菌性尤为引人注目。本实验以牛初乳中提取的乳铁蛋白及其水解产物乳铁素为研究对象，选取大肠杆菌为实验菌株，进行铁饱和乳铁蛋白和缺铁性乳铁蛋白、乳铁素对大肠杆菌生长抑制的比较研究。研究结果表明：铁饱和乳铁蛋白、缺铁性乳铁蛋白和乳铁索的最小抑菌浓度分别为6mg／ml、3mg／ml和15μg／ml，乳铁素的最小杀菌浓度为30μg／ml。乳铁蛋白水解后，经纯化获得的乳铁素，其抗菌能力较缺铁性乳铁蛋白增加200倍，较铁饱和乳铁蛋白增加400倍。     

三元公司乳品新技术研究最新进展——乳铁蛋白的制备与应用(续)(连载三)

乳铁蛋白（Lactoferrin，LF）是乳汁中一种重要的非血红素铁结合糖蛋白，主要由乳腺上皮细胞表达和分泌。乳铁蛋白最初于1939年由Sorensen等在动物乳中发现，1960年首先由Groves从牛乳中分离获得，由于乳铁蛋白与铁结合形成的复合物呈红色，故称之为“红蛋白”，1961年，Blanc和Isliker将从人乳中分离获得的此种蛋白命名为乳铁蛋白。大量的研究证明，乳铁蛋白具有促进铁吸收、抗微生物、抗肿瘤及病毒等多种生物功能，并能通过调节多种细胞因子参与机体抗感染和免疫过程，为机体抵御病源微生物的入侵提供了第一道也是最重要的防线，因此乳铁蛋白的研究开发和应用，已经成为科学研究的焦点。     

日本开发含牛奶成分的番茹

日本农水省生物资源研究所等单位，最近开发出一种基因重组番茄。该番茄能产生母乳中所含的多功能蛋白质——乳铁蛋白。乳铁蛋白具有提高免疫机能和防感染的作用，并具有增加铁质的功效。日本农水省生物资源研究所等单位将人的乳腺中产生乳铁蛋白的基因组入了番茄品种“秋王”之中，实践表明，番茄“秋王”的果实，叶、根的部分能生成乳铁蛋白。在其果实中，每100g可生成2．5～3．3mg的乳铁蛋白。     

Aspergillus ficuum菊粉酶的分离纯化与鉴定

Aspergillus ficuum菊粉酶系经硫酸铵分级沉淀、透析脱盐、DEAE-Cellulose离子交换色谱、Sepharose CL-6B凝胶过滤色谱和制备电泳技术分离纯化,获得五个电泳纯酶:三个外切菊粉酶组分Exo-I、Exo-II、Exo-III和两个内切菊粉酶组分Endo-I、Endo-II。SDS-PAGE分析测得五种酶的分子量分别为:Exo-I:69961Da,Exo-II:39973Da,Exo-III:45561Da,Endo-I:33574Da,Endo-II:30769Da。     

预分离初乳中乳铁蛋白的超滤工艺

采用超滤法从初乳中初步分离乳铁蛋白。研究了错流方式的板式膜组件的切向流速、时间、压力、温度等对渗透通量的影响。采用切向流速为4L／min，膜透压为0.15MPa，温度为40－42℃的操作条件，可获得质量分数为26％，纯度为29．8％的乳铁蛋白粗品。     

乳铁蛋白热稳定性及热变性动力学的研究

通过对乳铁蛋白在不同温度加热条件下活性残存率的测定，分析了乳铁蛋白的热稳定性及热变性动力学。结果表明，乳铁蛋白的热变性反应级数是1．9。在65，70，75，80，85，90及95℃的加热条件下，Lf变性的D值分别为32．68，26．81，23．98，8．18，6．07，2．90和2．21min，在此温度范围内的Z值为23．1℃，表观活化能Ea=125.07kJ／mol。     

牛乳中乳铁蛋白的分离纯化

采用强阳离子交换色谱梯度洗脱法,对牛乳中的乳铁蛋白进行分离和纯化,并利用SDS-PAGE定性检测.结果表明:采用强阳离子交换色谱梯度洗脱法可较好地分离提取出乳铁蛋白,分离出的乳铁蛋白显示为单一区带,每毫升牛乳能提取乳铁蛋白0.23 mg.纯度为95%.     

Ovine lactoferrin: isolation from colostrum and characterization

Highly purified lactoferrin was isolated from ovine colostrum by sequential purification on CM-Sephadex C-50 and Blue-Sepharose, with overall yield of 55%. The ovine lactoferrin was characterized by SDS-PAGE, its amino acid composition and N-terminal sequence to residue 30. Homology with bovine and human lactoferrins was greater than 80 and 50% respectively. Antibodies to ovine lactoferrin were raised in rabbits and used to develop an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The antiserum was not cross reactive with other colostrum proteins.     

竹叶天然抗菌肽的分离纯化与抗菌活性研究

利用PBS浸提、硫酸铵梯度盐析、弱阴离子交换色谱DEAE-A50,从竹叶中分离纯化出一种新的抗菌肽。该活性多肽经纯化后在SDS-PAGE上显示为两条带,分子量分别为49 888 Da和45 604 Da。此竹叶多肽对大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)以及枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)表现出良好的抑菌活性。     

Expression and purification of goat lactoferrin from Pichia pastoris expression system

ABSTRACT:  The recombinant goat lactoferrin (rGLF) was expressed in the methylotropic yeast Pichia pastoris using pGAPZαC vector, GAP as promoter, and Zeocin as the selective marker. After transformation of the GLF-pGAPZαC into Pichia pastoris X-33 expression host, the GLF-pGAPZαC vector was integrated into the GAP promoter locus of Pichia pastoris X-33 chromosome. The rGLF was expressed and secreted into the broth using α-factor preprosequence. SDS-PAGE and PAS staining analysis indicated that the rGLF could be purified to electrophoretic homogeneity by heparin-Sepharose 6 Fast Flow affinity chromatography and glycosylated by the expression host. The yield of purified rGLF was approximately 2.0 mg/L of culture broth. The N-terminal sequence was identical to the native goat lactoferrin (nGLF). The iron-binding behavior, papain-inhibiting property, and thermal stability of the purified rGLF were comparable to nGLF. This is the 1st report of intact goat lactoferrin expression using the P. pastoris system.     

Antimicrobial properties of pepsin-digested lactoferrin added to carrot juice and filtrates of carrot juice

The objective of this study was to determine the antimicrobial activity of pepsin-digested lactoferrin added to carrot juice and filtrates prepared from carrot juice. Lactoferrin isolated from raw skim milk was digested by pepsin for 4 h at pH 3. The digest of lactoferrin was lyophilized, and the antimicrobial activity of the digests was determined in peptone-yeast-glucose broth, carrot juice, permeate from carrot juice, and the dialysate of carrot juice permeate using Escherichia coli (American Type Culture Collection strain 35343) as the test organism. Growth of E. coli and the inhibitory effect of the peptide were greater in peptone-yeast-glucose broth at pH 7 than at pH 4. The peptic digest of lactoferrin did not have antimicrobial properties in carrot juice at concentrations of less than 10 mg/ml of juice. Carrot juice was filtered through a membrane with a molecular weight rejection of 10,000 or 500 Da, and the permeate was dialyzed against distilled water. Growth of E. coli was delayed in the filtrate by 5 mg but not by 1 mg of the peptic digest of lactoferrin per ml of filtrate. Bacterial counts of the control and experimental samples were not significantly different after 24 h of incubation. The peptic digest of lactoferrin at a concentration of 5 mg of digest per ml of dialysate was bacteriostatic toward E. coli after 24 h of incubation at 23 degrees C. Dialysis of permeate caused a percentage reduction in cation concentration in the permeate ranging from 69.23% (Co) to 99.32% (Na). The antimicrobial activity of lactoferrin added to carrot juice was probably inhibited by cations.     

大豆多肽的分离纯化及其体外降血脂功能研究

通过HepG2肝癌细胞构建高胆固醇细胞模型,以大豆蛋白为对照组,分析了大豆多肽的体外降血脂活性,并通过凝胶过滤层析法和纳米技术-高效液相色谱-串联质谱（Nano-HPLC-MS/MS）技术对大豆多肽进行了初步纯化和鉴定。结果表明,大豆多肽对HepG2细胞内甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）的产生具有一定的抑制作用,对HepG2细胞内高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）的产生和超氧化物歧化酶（SOD）活力具有促进作用,且大豆多肽对HepG2细胞内TG、LDL-C的抑制作用及对HDL-C和SOD活力的促进作用均强于对照组,具有良好的体外降血脂活性。大豆多肽经分离纯化,最终鉴定并筛选出5个多肽,分别编号为LLDTN、FLEHAF、DFGKFF、LVGLKLY和LIDSVLDVVRK,相应的分子质量分别为574.30 Da、762.37 Da、759.36 Da、804.51 Da和1 255.75 Da。     

油菜内生菌BY-2的脂肽类抑菌物质的分子结构鉴定

对油菜内生枯草芽孢杆菌BY-2（Bacillus subtilis）的细胞外分泌型抗菌性纯化物进行双缩脲反应、茚三酮反应、高效液相色谱仪（HPLC）分离、质谱分析和异硫氰酸苯酯（PITC）柱前衍生HPLC分析。结果显示：BY-2的胞外分泌型抑菌物质含肽键,具有环状分子结构。在甲醇/水的流动相条件下,1.969min出现1个抑菌成分峰值;在三氟乙酸/甲醇流动相条件下,抑菌成分形成了6个峰值。组成分析结果表明：该抑菌物质由分子量分别为995Da、1009Da、1023Da、1037Da、1051Da和1087Da六种成分构成,其4种氨基酸比例为：天冬氨酸∶谷氨酸∶缬氨酸∶亮氨酸=1∶1∶1∶1.5。该抑菌物质可归类为环脂肽类抗生素（Cycle lipopeptide）中的枯草菌表面活性素（Surfactin）,其中的1087Da大分子同系物尚未见报道。