酶解牛乳铁蛋白制备乳铁素 B的酶解条件研究

乳铁素B是牛乳铁蛋白经胃蛋白酶酶解后所得到的最重要的抗菌肽，乳铁蛋白酶解生成乳铁素后抗菌活性大大增强。通过正交试验确立了牛乳铁蛋白酶解制备乳铁素B的最佳条件，指出在底物质量浓度为50g／L，酶与底物质量浓度比为1：30(质量比)，酶解时间为60min时所得的乳铁素质量浓度及活性较好。     

鱼胶原蛋白酶解工艺及其活性肽抑制ACE酶的研究

本研究通过单因素实验和正交实验优化胃蛋白酶水解鱼胶原蛋白制备胶原多肽的工艺。采用高效液相色谱法测定海水鱼与淡水鱼胶原多肽血管紧张素转换酶(ACE)的抑制活性来表征其降血压功能。研究表明:胃蛋白酶制备鱼胶原多肽的最佳酶解工艺条件是水解温度为37℃,初始p H为2.5,酶与底物比例为1∶125(w/w),底物质量分数为3%(w/v),水解时间为12 h,此时鱼胶原蛋白溶液的水解度为19.17%。研究发现海洋鱼胶原蛋白和淡水鱼胶原蛋白的酶解上清液均具有较高的ACE抑制活性,半抑制浓度IC50分别为1.34 mg/m L和1.52 mg/m L。利用超滤离心管获得的不同分子量组分中,分子量小于3 ku的海洋胶原多肽CP-Ⅰ和淡水胶原多肽CP-Ⅲ的ACE抑制活性的半抑制浓度IC50分别为0.43 mg/m L和0.60 mg/m L,而相应分子量大于3 ku的海洋胶原多肽CP-Ⅱ和淡水胶原多肽CP-Ⅳ的半抑制浓度IC50分别为1.78 mg/m L和1.69 mg/m L。     

中性蛋白酶水解大豆分离蛋白的工艺优化

以大豆分离蛋白为原料,利用中性蛋白酶水解法制备活性多肽,并对影响中性蛋白酶水解过程的各个因素进行研究.通过测定大豆分离蛋白酶解液氨基态氮含量,确定中性蛋白酶水解大豆分离蛋白制备活性多肽的的最佳工艺条件:最适pH为7.0,最适温度为45℃,最适酶量为0.80%(w/w),最适底物浓度为6.0%(w/w).在此水解条件下水解大豆分离蛋白4 h,酶解液氨基态氮含量达到1761.38 mg/kg.     

响应面法优化鹿骨多肽酶解工艺及其体外抗氧化活性

目的:筛选鹿骨蛋白最适提取温度和最佳酶解工艺并检测其抗氧化活性。方法:根据鹿骨蛋白的蛋白浓度筛选出最适提取温度,根据水解度（DH）通过单因素及响应面实验设计筛选鹿骨多肽的最佳酶解工艺,并通过测定鹿骨多肽对DPPH自由基、羟自由基的清除能力来评价鹿骨多肽的抗氧化活性。结果:最佳提取温度为95 ℃,通过响应面法优化及实际验证确定了胃蛋白酶和胰蛋白酶最佳酶解工艺分别为胃蛋白酶酶用量6200 U/g,温度37.3 ℃,pH2.0,时间3.2 h,此时的水解度为11.23%;胰蛋白酶酶用量6300 U/g,温度37.2 ℃,pH8.1,时间4.0 h,此时的水解度为23.09%。鹿骨多肽对DPPH自由基、羟自由基具有清除能力,其IC₅₀值分别为:3.72、2.24 mg/mL。结论:本实验得到了鹿骨蛋白最佳提取温度并确定鹿骨多肽最佳酶解工艺,且鹿骨多肽对DPPH自由基、羟自由基具有良好的清除能力,说明鹿骨多肽具有良好的抗氧化活性。     

响应面法优化羊胎粉中抗氧化多肽制备工艺的研究

选用胃蛋白酶为水解酶,采用响应面法(RSM)优化羊胎粉水解条件,制备抗氧化多肽。研究反应温度、pH、酶与底物浓度比(w/w)对水解度(DH)和产物还原能力的影响,水解条件不同对水解度和铁还原力都有显著性影响(p<0.05)。结果表明,水解产物还原力最强的工艺条件为:温度36.48℃,pH1.05,酶与底物浓度比(w/w)2.03%。     

合成甜味剂对牛乳铁素抗菌活性的影响

乳铁素B是牛乳铁蛋白经胃蛋白酶酶解后得到的最重要的抗菌肽,具有很强的抗菌活性。选取大肠杆菌为实验菌株,进行了合成甜味剂对乳铁素抑菌活性影响的研究。研究表明,在牛肉膏蛋白胨培养基中,pH7.0,菌浓为107CFU/ml的条件下,纯化乳铁素B对大肠杆菌的最小抑菌质量浓度为20μg/ml;阿斯巴甜、甜蜜素、糖精钠在0～5mg/ml的质量浓度范围内,对乳铁素B的抗菌活性都有削弱的作用;而安塞蜜在0～5mg/ml的质量浓度范围内,对乳铁素B的抗菌活性没有太大的影响。     

酶解制备苦荞蛋白抗氧化肽及其分离纯化研究

以苦荞麦粉为原料,提取苦荞蛋白,分别采用碱性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶对蛋白进行酶解,采用DPPH法比较不同酶解产物的抗氧化活性,从而筛选水解制备苦荞蛋白抗氧化肽的最适酶。以水解度为指标,利用单因素试验和响应面法优化酶解工艺条件。结果表明,不同蛋白酶酶解产物的抗氧化活性大小为:胃蛋白酶胰蛋白酶碱性蛋白酶,其中胃蛋白酶酶解产物的DPPH自由基清除率最高,为68.47%。胃蛋白酶最佳水解工艺条件为:时间2.5 h、温度38℃、pH 2.0,在此条件下苦荞蛋白水解度为32.68%。采用超滤对苦荞蛋白水解物进行分离纯化,结果表明,分子量3 kDa的水解物具有显著的抗氧化活性;经凝胶过滤色谱进一步分离得到3个峰,小分子量峰组分显示出最强的抗氧化活性。     

鮰鱼皮明胶抗氧化肽的制备工艺研究

通过测定鮰鱼皮明胶蛋白酶解物对Fenton 体系产生的羟自由基的清除效果,筛选得出胰蛋白酶和胃蛋白酶酶解物具有较高的清除羟自由基(·OH)的活性;用正交试验L9(34)对胰蛋白酶的水解条件进行优化,确定最佳的水解条件为温度40℃、pH7.5、酶与底物质量浓度比(E/S)3.5%、底物质量浓度2.5g/100mL、酶解时间3h。此外,本研究还采用胰蛋白酶和胃蛋白酶进行了复合酶解试验,确定复合酶解的最佳水解条件为先用胰蛋白酶酶解3h,然后用胃蛋白酶酶解3h,此时得到的酶解液自由基清除率最高,达到47.38%。     

碱性蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽研究

以水解度为指标,对碱性蛋白酶酶解魔芋飞粉蛋白条件进行优化;测定不同酶解阶段及不同分子质量魔芋多肽的ACE抑制活性,筛选具有高ACE抑制活性的降血压多肽。结果表明:在底物质量分数2.25%,加酶量3 500 U/(g底物),温度55℃,pH 7.82的条件下酶解270 min,酶解产物的ACE抑制率达到最大值94.6%,此时水解度9.97%,多肽得率12.26%;酶解液经浓缩、干燥得到的魔芋多肽粉呈淡黄色,多肽含量52.62%,粗蛋白含量62.30%;用葡聚糖凝胶G-25和葡聚糖凝胶G-15串联柱分离得到2个具有高ACE抑制活性的多肽组分,其分子质量分别为1 500和1 000 Da,半抑制质量浓度分别为0.12 mg/mL和0.088 mg/mL。     

茶树籽蛋白质微波辅助酶解制备多肽的研究

以碱提酸沉法制备茶树籽蛋白质,并用微波辅助酶解法制备茶树籽多肽。研究了胃蛋白酶用量、酶解温度、酶解时间、酶解液pH值等工艺因素对酶解产物的蛋白质水解度和多肽浓度的影响,并采用正交试验法优化微波辅助酶解的工艺条件。结果表明,产物的蛋白质水解度和多肽浓度随着加酶量提高和水解时间延长呈稳定上升后趋于平缓的趋势,而随着水解温度提高和酶解液pH值升高呈先上升后下降趋势,酶解液pH值对结果有显著影响。微波辅助酶解工艺可显著缩短蛋白质酶解进程、提高酶解液中多肽的含量,在胃蛋白酶用量6,000 u.g-1、酶解温度50 ℃、酶解时间15 min、酶解液pH值3.5等的优化条件下,酶解产物的蛋白质水解度为13.65%、多肽浓度为13.18 g.L-1。     

瑞士乳杆菌蛋白酶水解酪蛋白制备血管紧张素转化酶抑制肽的条件优化

本研究以酪蛋白为原料,对瑞士乳杆菌蛋白酶水解酪蛋白产生血管紧张素转化酶(angiotensin I-convertingenzyme,ACE)抑制肽工艺条件进行研究。通过单因素分析和响应面试验设计,确定酪蛋白酶解制备ACE 抑制肽的最佳工艺条件为：底物浓度6%(W/W), 酶解温度39.64℃、pH 8.94、酶与底物的比0.92%(W/W),底物预处理温度90℃、酶解时间8h,其对ACE 抑制率可达92.67%。     

酶法制备汉麻籽蛋白抗氧化肽

采用不同蛋白酶酶解汉麻籽蛋白,确定Alcalase 2.4L碱性蛋白酶是酶解汉麻籽蛋白制备抗氧化肽的优良酶源。通过单因素和响应面回归分析,得到Alcalase 2.4L碱性蛋白酶酶解汉麻籽蛋白的优化条件为:底物浓度50 mg/mL、水解时间2 h、温度50℃、加酶量2.2%、pH 9.4。优化酶解条件下,水解度约为20%,10 mg/ mL酶解产物的DPPH自由基清除率为82.65%,显示出较好的抗氧化活性。     

固定化瑞士乳杆菌蛋白酶酶解乳清蛋白生产ACE抑制肽的条件优化

以乳清浓缩蛋白WPC-80为原料,研究固定化瑞士乳杆菌蛋白酶酶解WPC-80生产血管紧张素转化酶（angiotensinⅠ-converting enzyme,ACE）抑制肽的工艺条件。通过单因素试验和响应面方法研究了酶解温度、酶解pH值、底物与酶质量比（[S]/[E]）、酶解时间对固定化瑞士乳杆菌蛋白酶制备ACE抑制肽的影响,确定了酶解乳清蛋白制备ACE抑制肽的最佳工艺条件为：温度37 ℃、pH 7.5、[S]/[E]＝15%、酶解时间8 h。在此条件下,酶解产物的水解度为（6.05±0.36）%,ACE抑制率为（59.54±0.61）%。     

乳清分离蛋白酶解制备抗氧化和ACE抑制活性产物

以乳清分离蛋白为原料,通过对肽浓度、游离氨基酸含量及水解度的研究,探讨了碱性蛋白酶Alkaline、中性蛋白酶NPU、肽酶AX和风味蛋白酶Flavourzyme对乳清蛋白酶解的影响。在优化碱性蛋白酶Alkaline水解条件的基础上,考察了中性蛋白酶NPU、风味酶Flavourzyme添加时间,获得了复合酶分步酶解工艺:酶解温度55℃,加入1.5% Alkaline([E/S]),维持pH8.5酶解10 min,待pH7.2时加入1% NPU([E/S]),酶解240 min,加入1% Flavourzyme([E/S])继续酶解20 min。在此条件下,肽浓度达到60 g/L以上,游离氨基酸含量为4348 mg/kg。获得的酶解产物基本无苦味。酶解物分子量主要分布在<1 kDa(69.62%)。酶解产物具有ABTS自由基清除和ACE抑制活性,IC₅₀值分别为1.02(0.377 μmol Trolox当量/mg)和1.38 mg/mL。综上,采用复合酶酶解乳清分离蛋白可获得具有抗氧化活性和ACE抑制活性产物,为乳清酶解物在功能食品或保健品领域的运用提供科学参考。     

Limited hydrolysis of β‐casein by cell wall proteinase and its effect on hydrolysates's conformational and structural properties

Optimisation of enzymatic hydrolysis of β‐casein with cell envelope proteinase (CEP) from Lactobacillus acidophilus JQ‐1 to produce the angiotensin‐I‐converting enzyme (ACE) inhibitory peptides using response surface methodology (RSM). Under optimal conditions (enzyme‐to‐substrate ([E]/[S]) ratio (w/w) of 0.132 and pH of 8.00 at 38.8 °C), the ACE inhibitory activity of hydrolysates was 72.06% and the total peptides was 11.75 mg mL^?1. Scanning electron microscopy (SEM) micrographs indicated that the tightness of the β‐casein surface structure was gradually weakened and small holes appeared after enzymatic treatment, while Fourier transform infrared spectroscopy (FTIR) spectra indicated remarkable changes in the chemical composition and macromolecular conformation of β‐casein after enzymatic hydrolysis. Differential scanning calorimetry (DSC) analysis indicated that the corresponding hydrolysates had higher thermal stability. The enzymatic hydrolysis also led to an increase in the free sulfhydryl content of β‐casein hydrolysates compared with raw β‐casein, which led to the increase in the antioxidant activity of β‐casein hydrolysates.     

瑞士乳杆菌蛋白酶水解乳清蛋白制备A C E 抑制肽的条件优化

目的：本实验以WPC-80 乳清浓缩蛋白为原料,对瑞士乳杆菌蛋白酶水解乳清蛋白产生血管紧张素转移酶(ACE)抑制肽工艺条件进行研究。方法：通过单因素条件和响应面方法研究水解pH 值、水解温度、酶与底物比、底物浓度和水解时间对水解度和ACE 抑制率的影响。结果：研究发现,五个工艺条件对ACE 抑制肽的产生都有影响,通过响应面法分析,确定瑞士乳杆菌蛋白酶酶解乳清蛋白的最佳水解条件为：[E]/[S] 0.6%、底物浓度6%、pH9.18、温度38.90℃,时间8.0h,在此条件下水解,产物ACE 抑制率达到92.21% ,IC50 为0.375mg/ml,水解度为18.76%。结论：应用响应面方法优化水解工艺条件是可行的。     

胰蛋白酶制备鹰嘴豆抗氧化肽的条件优化

以碱溶酸沉法制备的鹰嘴豆分离蛋白为酶解底物,以超氧阴离子自由基清除率为响应值,采用响应面法优化胰蛋白酶制备鹰嘴豆抗氧化活性肽的条件。结果表明：在整个酶解过程中,所制备的鹰嘴豆抗氧化肽具有显著的抗氧化活性,胰蛋白酶制备鹰嘴豆抗氧化肽的最佳酶解条件为：底物质量分数2%、加酶量（[E]/[S]）1 800 U/g、温度32 ℃、pH 7.0、时间35 min。此条件下所制备的鹰嘴豆抗氧化肽的超氧阴离子自由基清除率为67.59%。鹰嘴豆分离蛋白水解液经超滤膜系统纯化获得了截留相对分子质量1 kD以下的水解液,并通过液相色谱-质谱联用分析,发现了一种相对分子质量为668.40、序列为RQLPR的亲水性五肽。     

螺旋藻蛋白水解产物对ACE抑制活性的研究

采用胃蛋白酶和胰蛋白酶水解螺旋藻藻胆蛋白制备ACE 抑制肽,通过体外实验测定其ACE 抑制率,以ACE 抑制率为指标确定两种蛋白酶的水解条件。结果表明：胃蛋白酶水解条件为：水解温度37℃,酶与底物比1:50,pH3.0,底物质量分数5%,水解产物的ACE 抑制率为82.16%,其IC50 值为0.104mg/ml;胰蛋白酶水解条件为：水解温度42℃,酶与底物1:50,pH8.0,底物质量分数6%,水解产物的ACE 抑制率为93.54%,其IC50值为0.017mg/ml。此外,胃蛋白酶水解产物再用胰蛋白酶水解,其产物的IC50 值为0.087mg/ml。