三酶法制备罗非鱼鱼皮胶原蛋白抗氧化肽及活性研究

为了探索制备罗非鱼鱼皮胶原蛋白抗氧化肽的最佳工艺,在碱性蛋白酶和胰蛋白酶酶解的基础上,以酶解温度、酶解时间、酶解pH值和酶与底物质量比([E]/[S])为试验因素,以水解度和DPPH自由基清除率为响应值,采用响应面分析法优化Orientase 20A酶的酶解条件。结果表明:最优工艺参数为:酶解温度为41.74℃、pH3.97、酶解时间为6h、[E]/[S]为1.5%,酶解液水解度和DPPH自由基清除率的预测值分别为9.42%和35.01%,验证值分别为9.57%和35.21%。响应面对酶解法制备罗非鱼鱼皮胶原蛋白抗氧化肽的酶解条件的优化是可行的,可以用于实际预测。抗氧化活性实验表明,酶解肽具有较强的清除DPPH自由基和ABTS+.能力,其IC50值分别为10.78mg/mL和8.26mg/mL。     

酶解大鲵皮胶原蛋白制备抗氧化肽工艺研究

为有效利用大鲵加工副产物大鲵皮,研究了大鲵皮胶原蛋白制备抗氧化肽的工艺条件。采用化学发光法,以羟自由基清除率为评价指标,通过单因素试验法,分别研究了酶的种类、酶添加量、酶解pH、温度和时间对大鲵皮胶原蛋白肽抗氧化活性的影响。在单因素试验的基础上,通过正交试验进一步优化了大鲵皮胶原蛋白制备抗氧化肽的工艺,确定了最适工艺条件:即酶添加量7000U/g,pH 8.5,温度55℃,时间4h,在此工艺条件下,大鲵皮胶原蛋白抗氧化肽清除羟自由基的清除率为83.15%。     

酶法制备鱿鱼皮胶原蛋白肽工艺的条件优化

研究了鱿鱼皮胶原蛋白肽的酶解加工工艺条件。在单因素试验基础上,通过正交试验的方法对碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶及风味蛋白酶制备鱿鱼皮胶原蛋白肽工艺进行优化。优化的提取工艺条件如下:先用0.3%蛋白酶在p H10.5、温度47.5℃条件下水解4 h,再用0.4%木瓜蛋白酶复合风味蛋白酶按1∶2(质量比)的比例在p H 7.5、温度50℃的条件下继续水解4.5 h,结果酶解液的水解度可达28.89%、DPPH·清除率为88.24%,多肽转化率为49.74%,同时84.56%的胶原蛋白肽分子量分布介于180 Da~2 000 Da之间。在优化的酶解条件下,可以得到较好品质的胶原蛋白肽产品。     

河豚鱼皮胶原蛋白肽的提取及其抗氧化活性的研究

目的:河豚鱼皮含有丰富的胶原蛋白.胶原蛋白及其肽类有多种生理功能.本文研究河豚鱼皮胶原蛋白肽的最佳提取工艺及此肽的抗氧化性.为河豚鱼皮的深入研究提供一些理论依据.方法:采用木瓜蛋白酶酶解河豚鱼皮胶原蛋白.通过正交试验确定该酶酶解河豚鱼皮胶原蛋白的最佳条件,并对此条件下酶解得到的河豚鱼皮胶原蛋白肽进行超滤分离.得到3个不同分子质量范围的肽段.研究其抗氧化性.结果:木瓜蛋白酶酶解河豚鱼皮胶原蛋白的最佳条件为:温度45℃,时间2 h,酶加量5 000U/g,pH 6.5,底物质量浓度33.6mg/100mL.在此条件下酶解产生的河豚鱼皮胶原蛋白肽具有显著的清除OH·自由基和DPPH·自由基能力,还具有一定的清除02-·自由基的能力和还原能力.结论:随着河豚鱼皮胶原蛋白肽分子质量的减小,其清除OH·自由基、DPPH·自由基、O2-·自由基的能力及还原性增强.其中,河豚鱼皮胶原蛋白肤清除OH·自由基能力最强.     

双酶分步水解制备鱿鱼皮胶原蛋白肽的工艺条件优化

通过单因素试验和正交试验对鱿鱼皮胶原蛋白肽的双酶分步提取工艺进行优化。碱性蛋白酶与木瓜蛋白酶分步提取的最佳工艺条件:先用0.3%碱性蛋白酶于p H10、50℃条件下水解4 h,再用0.2%木瓜蛋白酶于p H8、55℃条件下水解2 h。在此最佳水解条件下得到的鱿鱼皮胶原蛋白肽水解度为24.32%,DPPH清除率为90.34%,多肽转化率为58.68%。采用SDS-PAGE电泳初步分析所得胶原蛋白肽分子量范围,结果表明,其分子量基本小于3000 u。     

酶法水解真鲷鱼皮和鱼鳞制取胶原蛋白肽

以真鲷鱼鱼皮、鱼鳞为材料,研究了酶法制取胶原蛋白肽工艺。以水解度为指标,研究蛋白酶种类、酶解条件对水解度的影响,并采用正交试验对鱼皮、鱼鳞胶原肽制备工艺进行优化。结果表明,采用胰蛋白酶水解鱼皮,在加酶量950 U/g,pH 7.0,温度55℃,料液比1︰8,酶解反应6 h的优化条件下,胶原蛋白时水解度最高,达到29.73%;高压液相色谱(HPLC)分析表明,水解液中甘氨酸含量最高,不含色氨酸,符合胶原蛋白氨基酸特征。     

鱿鱼肌肉蛋白肽的制备工艺优化及其抗氧化活性

以鱿鱼肌肉为原料,先考察了酶解时间、温度和加酶量对鱿鱼蛋白肽清除羟自由基的影响,再采用BoxBehnken实验设计和响应面分析对鱿鱼肌肉酶解工艺条件进行优化。同时采用清除自由基和小鼠体内抗氧化活性对抗氧化肽的抗氧化活性进行了研究。结果表明:酶解时间、加酶量对羟自由基清除率影响最为显著(p0.01),最佳工艺条件为:酶解时间6 h,加酶量0.07 g/10 g,酶解温度55℃。在该条件下,羟自由基清除率的验证值为90.31%±0.54%。鱿鱼抗氧化肽对DPPH·、OH·和O-2·的EC50分别为8.8、16.5和10.3 mg/m L。鱿鱼抗氧化肽高低剂量组的小鼠体内SOD活性分别比空白组高19.2%和14.2%。抗氧化肽高低剂量组小鼠体内的GSH比空白组提高了23.4%和14%。鱿鱼抗氧化肽具有较强的抗氧化活性。     

松仁肽的制备及抗氧化活性研究

以松子分离蛋白为原料,水解度为评价指标,通过单因素和响应面法优化松仁肽的酶解工艺,并以羟自由基清除能力和DPPH清除率评价松仁肽的抗氧化活性。试验结果表明,松仁肽制备的最佳工艺条件为酶解温度52℃、底物浓度3.2%,pH 9.1,酶解时间3 h、加酶量9 000 U/g。在此酶解条件下,水解度可达0.329 7。制备的松仁肽在浓度24 mg/mL时能清除全部羟自由基;在10 mg/mL时对DPPH的清除率达到75%。此时的松仁肽表现出一定的抗氧化活性。     

响应面法优化软枣猕猴桃蛋白水解及多肽的抗氧化研究

以酶解产物清除羟基自由基能力为指标,选用碱性蛋白酶为水解酶,利用响应曲面法优化软枣猕猴桃蛋白最佳酶解工艺条件并制取抗氧化肽。考察其水解度和清除率的相关性。结果表明：碱性蛋白酶最佳酶解工艺为温度50℃、pH9、加酶量4000U/g、酶解时间3h,此时水解度达到最大值为25.08%。在此条件下将软枣猕猴桃蛋白分别水解1、2、3、4、5h得到肽混合物进行抗氧化活性分析,得到其对羟自由基清除率分别为18.69%、24.67%、28.04%、25.82%、26.65%。当酶解时间为3h时,此时抗氧化肽的羟自由基清除率最高。     

鮟鱇皮胶原蛋白肽最佳制备工艺及自由基清除活性研究

研究提取鮟鱇(Lophius litulon)胶原蛋白肽的最佳制备工艺,测定鱼皮基本成分和多肽的氨基酸组成,探讨鮟鱇胶原肽组分体外对自由基的清除效果。研究结果表明,鱼皮中粗蛋白占28.1%,胃蛋白酶添加量1%,料液比1:20(g/m L),酶解时间6 h,酶解温度5℃时,提取的鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽的Hyp(羟脯氨酸)提取率为11.46%;鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽中Gly(甘氨酸)占36.61%,Pro(脯氨酸)和Hyp总含量占16.86%,Phe(苯丙氨酸)、Cys(半胱氨酸)、His(组氨酸)三者含量不及1%;鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽具有较强的还原能力且对O_2-·(超氧阴离子自由基)、·DPPH(二苯基苦酰肼自由基自由基)、·OH(羟自由基)自由基具有清除效果,且自由基清除能力随着鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽的浓度升高而增强,鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽浓度为10 mg/m L时对·OH,DPPH·,O_2-·的清除率和还原力分别为70.48%,68.78%,42.53%和0.676%。     

猪皮胶原多肽的体外抗氧化特性研究

以猪皮胶原多肽为原料,研究其羟自由基清除能力、还原能力、对Fe2+诱导的脂质过氧化抑制能力以及对猪油氧化的抑制效果,考察其体外抗氧化特性.结果表明:在10mg/mL～50mg/mL浓度范围内,猪皮胶原多肽具有一定的羟自由基清除能力、还原能力和对Fe2+诱导的脂质过氧化抑制能力,且随着浓度的增加抗氧化作用也增强,当浓度为50mg/mL时,对羟自由基的清除率为56.38％,还原力为0.909,对Fe2+诱导的脂质过氧化抑制率为43.34％;不同添加量的猪皮胶原多肽对猪油氧化均有明显的抑制作用,当添加量为2％时,抗氧化效果优于0.02％的叔丁基羟基茴香醚(BHA).猪皮胶原多肽具有一定的体外抗氧化作用.     

鮟鱇鱼肝抗氧化肽的酶法制备及对羟自由基的清除作用

以脱脂鮟鱇鱼肝为原料,以水解度及对羟自由基的清除活性为考察指标,用木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶及胰蛋白酶进行单酶解筛选试验。以水解度及对羟自由基的清除作用为指标,应用二次正交旋转组合设计试验研究加酶量、酶解时间、pH值及温度对制备鮟鱇鱼肝抗氧化肽工艺的影响。综合考虑水解度和对羟自由基的清除活性因素,最终确定碱性蛋白酶酶解鮟鱇鱼肝制备抗氧化肽的最佳工艺条件是:加酶量3000U/g,酶解时间6h,pH8.5,酶解温度55℃。该条件下制备的鮟鱇鱼肝抗氧化肽产物水解度和对羟自由基的清除分别为69.52%、76.74%。     

牛骨股原蛋百肽体外清除自由基活性的研究

对经碱性蛋白酶Alcalase 2.4L水解的牛骨胶原蛋白肽清除自由基活性进行了研究。根据对羟基自由基、超氧阴离子自由基、二苯代苦味酰基自由清除能力的测定,以及还原能力、脂质抗氧化能力等抗氧化活性指标的测定,确定了水解度为7.9%左右的胶原蛋白肽清除自由基的综合效果最好,此时酶解产物的平均分子量为2025Da,含15个左右的氨基酸。在此条件下,超氧阴离子(O2-·)的清除率为63.86%,羟基自由基(·OH)的清除率为99.55%,二苯代苦味酰基自由基(DPPH·)的清除率为27.03%,对大豆卵磷脂过氧化作用的抑制率为74.78%。     

响应面优化藏羊皮胶原蛋白肽超声辅助提取工艺及其体内抗氧化活性分析

为明确超声辅助提取对藏羊皮胶原蛋白肽含量及功能活性的影响。试验采用响应面法研究了料液比、超声功率和超声时间3个因素,确定了胶原蛋白肽最佳超声辅助提取工艺;并对藏羊皮胶原蛋白肽进行了抗氧化能力分析,模拟消化过程中的还原力和·OH清除能力研究。结果表明：超声辅助处理能明显提高胶原蛋白肽含量,最佳超声提取工艺为料液比1:18、超声功率220 W,超声时间27 min,藏羊皮胶原蛋白肽含量为30.21%±1.67%。超声波辅助提取后胶原肽的还原力和·OH清除率为0.49和83.2%,与超声前的胶原肽相比分别提高了4%和38.3%,经胃肠消化后还原力和·OH均有一定程度的下降,但仍然具有较好的抗氧化活性。超声辅助提取藏羊皮胶原蛋白肽具有提高胶原蛋白肽含量和增强体内抗氧化活性的优势,为功能性产品的开发提供了数据参考。     

基于Plackett-Burman设计和响应面法优化羊肝抗氧化肽的制备工艺

以羊肝为原料,分别测定5种蛋白酶酶切羊肝所得的酶解液的羟基自由基清除率和肽得率。结果表明,风味蛋白酶羟自由基清除率（84.50%）和肽得率（22.49%）最好。在单因素试验基础上,以羟基自由基清除率为评价指标,采用响应面法优化最佳酶解条件。结果表明,羊肝抗氧化肽制备的最佳酶解条件为料液比1∶3（g∶mL）、加酶量2 400 U/g、酶解温度50 ℃、pH7.50、酶解时间2.8 h。在此优化条件下,测得实际羟自由基清除率为93.70%,与模型理论值相接近。羊肝酶解产物中总氨基酸含量为57.23 g/100 g,其中疏水性氨基酸和必需氨基酸占总氨基酸含量分别为46.47%和41.63%,表明以风味蛋白酶酶解羊肝产物具有较高的抗氧化活性和营养价值。     

Radical scavenging properties of protein hydrolysates from Jumbo flying squid (Dosidicus eschrichitii Steenstrup) skin gelatin

Gelatin extracted from Jumbo flying squid skin was hydrolyzed with serials of protease. The scavenging effects of gelatin hydrolysates on superoxide and hydroxyl radical were assessed by chemiluminescence analysis. Properase E and pepsin have shown efficient hydrolysis of squid skin gelatin to obtain high radical scavenging activity peptides. The conditions chosen for enzymic hydrolysis of squid skin gelatin with properase E were pH 9.0, 45 °C, 3 h reaction time, and enzyme‐to‐substrate ratio of 1:50. Hydrolysates combining properase E and pepsin showed the best radical scavenging activity. For fragmented hydrolysates by ultrafiltration, fractions UF‐2 (M_w < 2000 Da) had high yield and radical scavenging activity. Copyright © 2006 Society of Chemical Industry     

鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽的抗氧化活性

选取铁离子还原体系和3 种自由基体系为指标,研究鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽体外清除自由基效果和抗氧化作用。采用超滤膜分离鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽组分,筛选出体外清除•OH活性最好的组分,再建立小鼠衰老模型,将分离得到活性最好的组分采用灌胃法,测定小鼠皮肤中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、过氧化氢酶（catalase,CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）及丙二醛（malondialdehyde,MDA）和羟脯氨酸（hydroxyproline,Hyp）的含量,研究鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽体内抗氧化和清除自由基作用。结果表明：鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽具有较强的还原能力且对O－2•、DPPH自由基、•OH具有清除效果,质量浓度为10 mg/mL时对•OH、DPPH自由基、O－2•的清除率和对Fe3+ 的还原能力分别为70.48%、68.78%、42.53%和0.676;分子质量小于2 000 D的鮟鱇皮胶原蛋白肽组分对•OH具有较好的清除效果,IC50为15.7 mg/mL;剂量为100 mg/（kg•d）时,显著提高了皮肤中SOD、GSH-Px、CAT的活性,较模型组分别增加20.9%、41.3%和58.1%,且显著抑制MDA的形成。     

响应面优化鱿鱼须脱皮液胶原肽酶解工艺及抗氧化活性

目的：研究秘鲁鱿鱼须脱皮液胶原肽酶解工艺及抗氧化活性。方法：以水解度和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除率为指标,利用单因素试验和响应面法对其酶解工艺进行优化,并采用2,2’-联氮-二（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐（2,2’-azinobis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)diammonium salt,ABTS）自由基与•OH清除率及亚铁还原能力评价其酶解产物抗氧化活性以及通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）和凝胶排阻色谱分析其分子质量分布。结果：最适酶解工艺为酶解温度50 ℃、初始pH 7.4、底物蛋白质质量分数3.2%、酶解时间3.7 h、酶添加量3 000 U/g。在此条件下,水解度和酶解产物DPPH自由基清除率分别为（37.23±0.08）%和（43.61±0.09）%,对ABTS＋•和•OH清除率的IC50分别为0.37 mg/mL和0.41 mg/mL,且表现出较强的亚铁还原能力;SDS-PAGE显示最适酶解工艺下,蛋白质基本被水解为小分子多肽;凝胶排阻色谱分析可知,酶解产物分子质量在1～5 kD之间。结论：酶解产物具备较强的抗氧化活性,可作为抗氧化活性物质基料,充分开发利用。     

鸡膝软骨胶原蛋白肽的超声辅助酶提工艺优化及抗氧化性

研究超声波辅助酶提取鸡膝软骨胶原蛋白肽的工艺,确定最佳实验用酶为碱性蛋白酶。以料液比、超声功率和酶提时间为试验因素,胶原蛋白肽得率为响应值,利用Box-Behnken试验和响应面法分析试验,确定最佳提取工艺条件。结果表明：最佳提取工艺参数为料液比1∶26（m/V）、超声功率253 W、酶提时间4 h,此时鸡膝软骨胶原蛋白肽得率可达到42.83%,与模型理论预测值（43.32%）较为接近,相对误差仅为0.49%;对经过优化工艺得到的鸡膝软骨胶原蛋白肽成品进行抗氧化性能测定,其2,2’-联氮-双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)阳离子自由基清除能力和羟自由基清除能力的半抑制质量浓度分别为8 mg/mL和8.5 mg/mL,还原能力低于VC,但具有较好的金属离子螯合能力。     

响应面法优化南极磷虾亚铁螯合肽制备工艺及其理化性质

以南极磷虾为原料,酶解制备亚铁螯合肽。以亚铁螯合率为主要指标,水解度为辅助指标,在单因素实验基础上,利用响应面优化制备南极磷虾亚铁螯合肽(Antarctic krill iron-chelating peptides,AKIP),并对其理化性质进行分析。结果表明:Alcalase 2.4 L是南极磷虾酶解的最适用酶,最佳酶解条件为:酶解温度57.6 ℃,加酶量5.5%,pH8.8,酶解时间5 h,在此条件下酶解液的亚铁螯合率为77.77%±0.72%,水解度为23.22%±0.16%,实测结果与预测值符合良好。氨基酸组成分析表明,南极磷虾亚铁螯合肽具有良好的亚铁螯合活性位点。AKIP的相对分子质量主要分布在180~1000 Da之间,约占89.28%。体外抗氧化实验表明,AKIP对DPPH自由基和羟自由基均有良好的清除能力(IC₅₀分别为1.92、2.09 mg/mL),且呈现较好的量效关系,在食源性螯合肽和天然抗氧化剂领域具有一定的开发利用价值。