测试片法在食品菌落总数检测中的应用研究

目的探究菌落总数测试片法检测食品中菌落总数的可行性。方法用菌落总数测试片法和国家标准方法同时对制备的菌悬液、自然污染食品样品和人工污染食品样品的菌落总数进行检测,采用t-检验分析2种方法检测结果的差异,采用Pearson相关分析确定2种检测方法之间的相关性。结果菌悬液和自然污染食品样品菌落总数测试片法的变异系数为0.16%~3.76%,人工污染食品样品的变异系数为0.78%~8.61%;菌落总数测试片与国家标准方法在不同类型食品样品检测结果之间没有显著性差异(P<0.05),2种方法的检测结果呈正相关(r2>0.976,P<0.001)。结论菌落总数测试片法的检测效果与国家标准方法相当,可作为替代方法,用于检测食品中的菌落总数。     

测试片法快速检测乳品中的菌落总数

通过用快速菌落总数测试片法与国标方法进行对比,从而对快速菌落总数测试片的准确性、特异性、灵敏度、稳定性等各项性能进行评估,并验证了快速菌落总数测试片与国标方法(GB 4789.2-2010)检测结果的一致性。结果表明,快速菌落总数测试片计数更简单、操作简便,缩短了检测时间,24 h即可对样品进行菌落计数。     

3M PetrifilmTM快速菌落总数测试片的评价

在食品菌落总数的检测中,评估3M Petrifilm~(TM)快速菌落总数测试片的准确性和适用性。以国家标准GB 4789.2—2016为参考方法,测试5类15种具有代表性的食品,评估测试片方法的线性和准确度;同时评估测试片的耐变性和批间变异;并开展实验室间的协同实验。结果表明,3M Petrifilm~(TM)快速菌落总数测试片方法和国家标准方法比较,检测结果无显著性差异,说明该测试片能够满足食品检测的要求。     

AOAC 991.14 PetrifilmTM大肠菌群测试片法与GB4789.3大肠菌群计数法的比较研究

将AOAC 991.14 PetrifilmTM大肠菌群测试片与我国国家标准GB4789.3进行比较并做验证试验。在20个国家和食品企业实验室对生肉、熟肉、水产品、调味品、冰品、原奶和奶粉7大类食品进行试验与分析。试验结果表明,用PetrifilmTM方法与国标GB4789.3法检测这7类食品样品中的大肠菌群,所得结果高度一致,说明使用PetrifilmTM大肠菌群测试片法检测食品中的大肠菌群等效于国标GB4789.3方法。     

平板计数法与纸片法检测食品微生物菌落总数的比较研究

目的找出平板倾注法与纸片法2种检测食品菌落总数方法之间的相关性,判断2种方法有无显著性差异。方法样品处理按GB 4789.2-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》进行处理,平板倾注法取样品稀释液接种平皿倾注琼脂、纸片法取样品稀释液接种细菌计数纸片。用上述2种方法对市场上随机抽取30份饼干及糕点和2份质控样品进行菌落总数检测,最后做统计学分析(t-test)。结果倾注法与纸片法检测结果无显著差异(P0.05)且对不同菌落数区间(0～100CFU/g、100～1000CFU/g、1000～10000 CFU/g)都适用。2份质控样品评价结果为满意。结论纸片法可用于食品菌落总数的快速检测,缩短检测流程,提高工作效率。     

食品中菌落总数测定不确定度的评定

目的:评定食品中菌落总数测定的不确定度。方法:依据GB 4789.2-2016分别对单一样品和一组样品进行菌落总数的重复检测。结果:经过本次试验,本实验室进行单一样品菌落总数重复检测的扩展不确定度为0.074。结论:微生物检测结果的发散性较大,与其相比,其他所有不确定度来源都可以忽略不计,因此仅考虑由重复性测量的分散性引起的测量不确定度即可。     

能力验证菌落总数测定结果不确定度的评定

目的对实验室能力验证样品菌落总数进行不确定度评定。方法能力验证菌落总数依据GB4789.2-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》以及能力验证计划参试指导书来进行测定和结果判断,再根据JJF 1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》的规定,对测定过程中引入的不确定度分量进行评定,然后采用合成的方法来计算和评定菌落总数的不确定度。结果菌落总数测定结果合成不确定度为0.05042,扩展不确定度为0.1008(以对数计)。结论本研究建立的方法可以对能力验证样品的菌落总数进行不确定度评定,此方法适合于类似检测条件下菌落总数不确定度的评定。     

速冻草莓菌落总数检验中不确定度的评定

目的对速冻草莓中菌落总数检验结果进行不确定评定,确保检测结果准确可靠。方法依据GB4789.2-2010《食品安全国家标准食品微生物检验菌落总数测定方法标准》和依据JJG1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》,对速冻草莓样品中菌落总数进行了测定,建立数据模型,对引起检测结果的不确定因素进行了分析,并对其不确定度进行了评定,最终得到标准不确定度和扩展不确定度。结果扩展确定度为0.0824,k=2.13。结论菌落总数检测过程中,分散性对结果不确定贡献较大,因此测定结果的不确定度采用检测结果的分散性进行评定。     

糕点中菌落总数测量结果的不确定度的评定

目的对糕点中菌落总数的测量结果进行不确定度评定。方法依据GB 4789.2-2016 《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》对糕点中菌落总数进行测定,建立数学模型,分析检验结果的影响因素,对不确定度因素的影响进行评价。结果通置信水平为95%,包含因子k=2,得10批样品的扩展不确定度分别为:0.2156、0.1194、0.1267、0.1293、0.1298、0.1163、0.1293、0.1155、0.1181、0.1243。结论糕点菌落总数检验中重复性检验和培养基的菌落生长率对不确定度影响最大,需要在检测过程中进行注意。     

猪肉菌落总数检验中不确定度的评定

目的建立猪肉中菌落总数检测结果的不确定度评定方法。方法依据JJF 1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》和GB4789.2-2010《食品微生物学检验菌落总数测定》以及相关统计学方法,对样品不确定度进行评定。结果依据所采用的方法,对同一样品测定10次菌落总数的扩展不确定度为0.090,k=2。结论本研究可以对单个样品的菌落总数检测结果的不确定度作出较好的估计,可适用于日常工作中菌落计数的不确定度评定。     

加权平均法表述菌落总数测定的数学模型与 测量不确定度的评定

摘 要 目的:建立食品菌落总数测定的通用数学模型和测量不确定度的评定方法。方法：按照加权平均的算法对菌落总数计算公式进行推导,建立了菌落总数计数方法的通用数学模型。以某橙汁饮料菌落总数的测定过程为例,从三个方面分析并量化了各不确度的分量,分别为：不同稀释度平板上菌落数的分布（以同一稀释度上两个平板计数结果的相对相差表示）,样品移取和稀释过程（以各量具的容量允差及稀释过程对稀释倍数贡献的相对不确度表示）,数字修约（以修约间隔引入的粗大误差表示）。按照均方根法则,将各计数平板的测量不确度进行加和,即为总测量不确度。结果：本例中该橙汁饮料菌落总数的扩展不确度U=0.2×104 CFU/mL, k =2。结论：建立了简便准确的食品菌落数测量不确定度的评定方法。     

不确定度评定在赤砂糖菌落总数检验中的应用

通过不确定度评定对赤砂糖中菌落总数测量结果临界值进行判断。采用GB 4789.2-2010《食品微生物学检验菌落总数的测定》对某一特定样品和同类样品进行不确定度分析。某品牌赤砂糖中菌落总数的扩展不确定度为0.030,取值范围为lg X±0.030;20份赤砂糖的扩展不确定度为0.186,取值范围为lg Xj±0.186。样品平行测量结果取对数的方法表示菌落总数的测定可用于检测数据处于临界值时的判定;合并样本标准差的评定方法比单一样本平均值标准差评定方法实用性更强,更适合于每一个样本的检测结果。     

Screening and enumeration of lactic acid bacteria in milk using three different culture media in Petrifilm Aerobic Count plates and conventional pour plate methodology

This study aimed to compare Petrifilm Aerobic Count (AC) plates and the conventional pour plate methodology using de Mann-Rogosa-Sharpe (MRS), Kang-Fung (KF) and Kang-Fung-Sol (KFS) culture media for screening and enumeration of lactic acid bacteria (LAB) in milk. Suspensions of 10 LAB species in reconstituted powder skim milk and 30 raw milk samples, without experimental inoculation, were tested. For selective enumeration, all samples were previously diluted in MRS, KF and KFS broths and then plated in Petrifilm AC and conventional pour plate methodology, using the same culture media with added agar. All plates were incubated at 37 degrees C for 48 h in anaerobic conditions. Differences in the counts were observed only for raw milk samples using KFS in conventional methodology, when compared with the counts obtained from MRS and KF (P0.05). The results showed excellent correlation indexes between both methodologies using the three culture media for LAB suspensions (r=0.97 for MRS, KF and KFS). For raw milk samples, the correlation indexes were excellent (r=0.97, for MRS) and good (r=0.84 for KF, and r=0.82 for KFS), showing some interference in Petrifilm AC when supplements were added, especially lactic acid. These results indicate the possibility of using Petrifilm AC plates for enumeration of LAB in milk, even with the use of selective supplements.     

Technical note: Enumeration of mesophilic aerobes in milk: Evaluation of standard official protocols and Petrifilm aerobic count plates

Enumeration of mesophilic aerobes (MA) is the main quality and hygiene parameter for raw and pasteurized milk. High levels of these microorganisms indicate poor conditions in production, storage, and processing of milk, and also the presence of pathogens. Fifteen raw and 15 pasteurized milk samples were submitted for MA enumeration by a conventional plating method (using plate count agar) and Petrifilm Aerobic Count plates (3M, St. Paul, MN), followed by incubation according to 3 official protocols: IDF/ISO (incubation at 30°C for 72 h), American Public Health Association (32°C for 48 h), and Brazilian Ministry of Agriculture (36°C for 48 h). The results were compared by linear regression and ANOVA. Considering the results from conventional methodology, good correlation indices and absence of significant differences between mean counts were observed, independent of type of milk sample (raw or pasteurized) and incubation conditions (IDF/ISO, American Public Health Association, or Ministry of Agriculture). Considering the results from Petrifilm Aerobic Count plates, good correlation indices and absence of significant differences were only observed for raw milk samples. The microbiota of pasteurized milk interfered negatively with the performance of Petrifilm Aerobic Count plates, probably because of the presence of microorganisms that poorly reduce the dye indicator of this system.     

以无纺布为载体的菌落总数测试片的研究

本文通过研究菌落总数测试片中无纺布的种类,加工工艺,冷水可溶性凝胶与培养基配比及质构特性,应用于需氧菌计数测试片,对其检测性能进行评价。对菌落总数测试片中冷水可溶性凝胶与培养基在不同比例配比情况下质构特性进行测定,当凝胶与培养基比例为3:7时,硬度、脆性、粘着性、弹性、内聚性、胶着性、回弹性与1%琼脂培养基无显著性差异,并选取60 g/m~2的水刺无纺布为载体,采用浸入培养基加入方式,菌落生长情况良好,清晰可见,菌落计数方便。基于本研究以无纺布为载体测定5种试验菌株的菌落总数并与国标需氧菌平板计数法比较,可达到相同水平的检测限2 CFU/mL和灵敏度(100%);准确度较高,线性相关系数R~2达到0.996。水刺无纺布可作为菌落总数测试片的良好载体。     

3M PetrifilmTM快速测试片用于饮料中菌落总数的测定

使用3M PetrifilmTM快速测试片法（3M测试法）和滤膜法对饮料中的菌落总数进行定量测定,分析两种方法的一致性程度。选用大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、爱媛类芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、Asia Siamensis、白色念珠菌和黑曲霉七种菌,对饮料样本进行人工接种并测试。实验结果显示,对于不同菌株及不同污染水平的测试,3M测试法和滤膜法的线性拟合度较好（决定系数R2均>0.95）。且3M测试片法结果回收率均>70%,RSD值（2.9%~34.3%）也均在2020《中国药典》的规定范围内,说明3M测试片法的准确度及精密度较好。对于细菌、真菌分别污染的专属性检验和不同批次的3M测试片的重复性测试中,3M测试片法的回收率>70%,且RSD值（3.6%~34.3%）均在可接受范围之内,表现出良好的专属性和重现性。使用相对正确度和精度剖面分析方法对3M测试片法和滤膜法的结果进行分析,结果显示两种方法具有较好的一致性和等效性。综合以上分析结果,3M测试片法可等效于滤膜法,进行饮料中的菌落总数测定。     

对GB 19301-2010《生乳》中蛋白质和菌落总数的指标验证和建议

目的完成"GB 19301-2010《生乳》跟踪评价项目"。方法 对陕西省7家乳企使用的原料生乳进行了7次采样,样本量为111份,其中夏季51份,冬季60份,采用GB 5009.5和GB 4789.2分别对样本中的蛋白质和菌落总数进行了测定。结果 所有样本的蛋白质含量都是合格的,冬季、夏季生乳蛋白质含量分别均不低于3.6 g/100 g、2.8 g/100 g,其中16%的夏季生羊乳蛋白质检测值为2.8 g/100 g,是"生乳蛋白质指标"的界限值。所有样本中,只有夏季4份样本的菌落总数超过了2.0×106CFU/m L的指标界限值,冬季、夏季生乳菌落总数平均值分别低于1.0×105CFU/m L、1.0×106CFU/m L。结论 GB 19301规定的生乳蛋白质、菌落总数指标值是科学合理的,建议将夏季生羊乳的蛋白质指标修订为≥2.6 g/100 g。     

鸡蛋壳表面细菌数量及种群多样性分析

采用GB 4789.2-2010菌落总数计数及Miseq测序分析物种多样性及群落结构的方法,对蛋鸡场鸡蛋壳表面细菌数量及种群结构进行研究。结果检测8组样品的菌落总数为3.79±0.67~5.06±0.75 Log CFU/eggshell±SD;获得的163214条优化序列分属于变形菌门(Proteobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)、放线菌门(Actinobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、梭杆菌门(Fusobacteria)及蓝菌门(Cyanobacteria)。8组样品普遍存在假单胞菌属(Pseudomonas)、埃希氏-志贺氏菌属(Escherichia-Shigella)、泛菌属(Pantoea)、芽孢杆菌属(Bacillus)、肠球菌属(Enterococcus)细菌;而各样品分别以假单胞菌属(Pseudomonas)、埃希氏-志贺氏菌属(Escherichia-Shigella)、不动杆菌属(Acinetobacter)、芽孢杆菌属(Bacillus)、寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)以及肠球菌属(Enterococcus)的相对丰度最大,依次为67.89%、36.15%、68.08%、40.12%、21.59%和26.98%。试验结果表明鸡蛋壳表面细菌数量大、种群多,不同样品间存在相似性差异。鸡蛋腐败变质可能与鸡蛋壳表面细菌种群有关,有待进一步研究。     

2016~2018年广东省膨化食品微生物污染状况分析

目的 了解广东省膨化食品受卫生指标菌(菌落总数、大肠菌群)污染状况, 为防控食源性疾病提供依据。方法 按照GB 4789.2-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》、GB 4789.3-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》中的方法对广东省2016~2018年共1672批次膨化食品进行检验。结果 2016~2018年监督抽检中, 膨化食品卫生指标菌不合格率分别为2.29% (2016年)、4.08% (2017年)、6.31% (2018年), 其中不合格样品生产单位所在地市不合格率最高连续3年均为潮州市。结论 2016~2018年广东省膨化食品受微生物污染的程度有逐年加重的趋势, 尤其潮州市的生产企业, 监管部门应强化膨化食品安全监督力度, 督促落实企业主体责任, 确保食品卫生安全。     

控制图法评定食品中菌落总数检测的不确定度

目的运用控制图法对食品中菌落总数项目进行不确定度评定。方法依据GB 4789.2-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》检测方法,在保证精密度的条件下进行菌落总数的测定,基于控制图法对积累的数据进行统计和分析。结果通过建立测量值X与EWMA的叠加图及MR图,表明测量结果仅受随机效应的影响,结果符合正态性和独立性假设,计算得到扩展不确定度结果 U=0.10 lgCFU/mL。结论控制图法评定菌落总数不确定度将不确定度评估与实验室内部质量控制工作相结合,简便且易于操作,适合实验室内应用。