转基因羊奶表达重组人溶菌酶的急性毒性及 过敏性研究

利用乳腺生物反应器生产重组人溶菌酶蛋白,可以解决从天然材料中提取人溶菌酶来源稀少,质量难以保证等问题。为了保证食用安全,本文对转基因羊奶表达的重组人溶菌酶进行了急性毒性和致敏性评价。小鼠经口急性毒性试验结果显示,重组人溶菌酶对小鼠最大耐受剂量＞5000 mg/kg.BW,属实际无毒。体外模拟胃肠道消化试验结果显示,重组人溶菌酶在模拟胃液中2-30min内全部消化;在模拟肠液中15s－2min内全部消化;体外热稳定性试验结果显示,重组人溶菌酶在100℃加热60 min不会降解。综上所述,该重组人溶菌酶的毒性与过敏性风险较低,可以安全应用于食品行业。     

转高赖氨酸融合蛋白基因水稻蛋白消化稳定性

以我国自主培育的转高赖氨酸融合蛋白基因水稻(简称转GL基因水稻)为材料,参考中华人民共和国国家标准,通过体外模拟胃/肠液消化实验,研究转GL基因水稻蛋白的消化稳定性。结果表明：质量浓度为5g/L的总蛋白在胃液中2min内完全消化,质量浓度为2g/L的总蛋白在肠液中15s～2min内完全消化;而以5倍于国标规定的质量浓度进行消化时,总蛋白在模拟胃液中60min仍可观察到未降解片段,在模拟肠液中2min内则全部消化;两步法体外模拟消化结果,胃液中极难降解的蛋白片段在经肠液作用5min后,完全被降解。本研究表明,转GL基因水稻蛋白在模拟胃肠液中不具有消化稳定性。     

卵白蛋白体外模拟胃肠道消化产物的抗氧化活性及其结构表征

为探究蛋白经体外模拟胃肠道消化后消化产物的抗氧化活性变化规律,以卵白蛋白为研究对象,测定消化产物的体外抗氧化活性,然后利用H2O2构建Caco-2细胞氧化损伤模型,测定细胞存活率、活性氧(ROS)水平,探究消化产物的细胞抗氧化活性。利用电喷雾轨道阱串联质谱鉴定抗氧化活性最强组分(分子质量1 ku的产物)的抗氧化肽。结果表明:卵白蛋白经体外模拟胃肠道消化后,产物的体外抗氧化活性增强并具有浓度依赖性。其组分分子质量越小,抗氧化活性越强。分子质量1 ku的产物具有最强的抑制细胞氧化损伤和清除活性氧能力。质谱鉴定出的3条肽序列均具有较强的抗氧化活性,序列分别为CFDV、CVSP和MPFR。以上结果显示,体外模拟胃肠道消化对卵白蛋白消化产物的抗氧化活性提高以及抗氧化活性肽段的释放具有积极作用。     

乳源性多肽体外模拟胃肠消化实验及其对淋巴细胞增殖的影响

用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色法筛选乳源性多肽,进一步采用体外模拟胃肠道消化的方法,检测经过胃蛋白酶和胰酶酶解后的合成多肽对小鼠脾脏淋巴细胞体外增殖的影响,并采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(U-PLC-Q-TOF-MS)分析模拟消化后的产物。结果表明,QEVPL具有较好的刺激淋巴细胞增殖能力,经体外模拟消化,终产物促进淋巴细胞增殖的能力下降至原来的93.71%,但没有显著差异。质谱分析结果显示,QEPVL体外模拟消化的终产物为QEPV。进一步的验证实验表明,消化产物QEPV的刺激指数为1.1466,仍具有促进淋巴细胞增殖能力。     

植物酵素急性毒性与亚慢性毒性的研究

目的:通过急性毒性试验和亚慢性毒性试验研究植物酵素的安全性。方法:急性毒性试验以小鼠为研究对象,测定小鼠经口灌胃给予植物酵素的最大耐受剂量;亚慢性毒性试验以SD大鼠为研究对象,大鼠经口灌胃给予植物酵素90d后,观察对大鼠一般状况,肝、肾功能及脏器病理变化的影响。结果显示,急性毒性试验小鼠最大耐受剂量超过108mL/(kg·BW),相当于人体推荐口服剂量60mL/(人·d)的108倍;亚慢性毒性试验高、中、低剂量下,大鼠一般状况良好,正常生长,未出现中毒症状,无死亡,脏器系数及组织学检查无异常,对大鼠肝脏和肾脏无毒性作用。结果表明,植物酵素一日内给小鼠大量灌胃,无急性毒性反应,亚慢性毒性。     

烹饪参数对米饭消化性能的影响

采用体外模拟消化试验,探究人体摄入米饭后,胃肠道中葡萄糖的释放速率,以考察不同烹饪参数对米饭体外消化率的影响.结果 表明:在无压烹饪模式下,以初始65℃的水烹饪30 min可制备慢消化米饭,其中包括3 min浸泡,6 min升温加热至沸腾,18 min持续沸腾,3 min焖饭.该烹饪方式相较于初始温度25℃烹饪,制备的...     

苦荞10 kD过敏原的重组表达及部分性质分析

以苦荞种子灌浆期cDNA文库中获得的苦荞10 kD过敏原基因序列TBAP10（tartary buckwheat 10 kD allergenprotein,TBAP10;GenBank登录号JK729379.1）为基础,构建重组表达载体pET47b-TBAP10,重组蛋白在大肠杆菌BL21 Star（DE3）中以包涵体形式表达。经包涵体复性和钴离子螯合层析纯化目的蛋白,并对其过敏活性、热稳定性及在模拟胃肠环境中的稳定性进行了分析。Western blotting显示该蛋白与苦荞16 kD过敏蛋白Fag t2存在免疫交叉反应。竞争性ELISA证明重组蛋白TBAP10具有与荞麦过敏患者血清IgE特异的结合活性;TBAP10具有强的热稳定性,能耐受15 min的沸水浴;模拟胃肠环境的消化结果显示TBAP10对胃蛋白酶具有强的耐受性,但对胰蛋白酶无耐受性。     

蛋清、重组溶菌酶酶学性质及其对小鼠肠道菌群和血清生化指标的影响

目的:研究蛋清、重组溶菌酶酶学性质,探讨两种溶菌酶最佳应用条件;通过小鼠口服试验,研究溶菌酶对小鼠肠道菌群和血清生化指标的影响。方法:在不同温度、pH、人工胃肠液及金属离子条件下,以微球菌为底物,用比浊法测定溶菌酶酶活变化;在小鼠饮水口服溶菌酶(蛋清溶菌酶和重组溶菌酶酶活分别为2500,5000U/mL)后无菌取肠道内容物,通过微生物培养测定肠道菌群的变化;测定不同试验时间的血清总蛋白、尿素氮、甘油三酯、胆固醇的浓度。结果:蛋清溶菌酶最适温度40℃,最适pH6.0;重组溶菌酶最适温度45℃,最适pH6.0;两种溶菌酶在温度超过50℃后活性迅速下降,其中重组溶菌酶下降较快;两种溶菌酶在室温、pH6～9溶液中60min,酶活力均保持在80%以上;在人工胃肠液中,溶菌酶活性迅速下降;Fe3+,Ca2+,K+,Mn2+,Zn2+,Mg2+,Al3+,Cu2+均不同程度地抑制两种溶菌酶活性;动物试验结果表明,两种溶菌酶均能不同程度地降低小鼠肠道金黄色葡萄球菌和粪肠球菌数量,促进双歧杆菌和乳酸杆菌生长,但重组溶菌酶对大肠埃希菌群抑制作用明显(P<0.05),蛋清溶菌酶不明显(P>0.05);不同浓度的两种溶菌酶均能提高血清总蛋白含量,降低尿素氮和胆固醇含量,其中以重组溶菌酶(5000U/mL)饲喂小鼠21d后血清总蛋白、尿素氮、胆固醇同对照组差异显著(P<0.05)。结论:蛋清、重组溶菌酶均具有调节机体肠道菌群,影响血清指标的作用,其中重组溶菌酶的效果更明显,但使用过程需要注意温度、pH、胃液肠液、金属离子对酶活的影响。     

多酚化合物体外模拟消化的稳定性分析

选取7 种不同种类的酚类化合物,研究体外模拟胃肠道消化对其稳定性的影响。结果表明：不同酚类化合物在胃肠道消化过程中的稳定性不同。高效液相色谱分析结果显示,胃消化过程对酚酸类化合物的影响较小,其含量无显著变化,但类黄酮化合物在胃消化过程中稳定性较差,儿茶素含量下降了16.6%、表儿茶素含量下降了约6%。经模拟肠液处理后,除阿魏酸、对羟基苯甲酸外,其他酚类化合物含量均显著降低,此外,绿原酸在肠液消化过程中生成了新的物质。体外模拟胃肠液消化对混合标准品的作用结果有所不同,模拟胃液消化对混合标准品含量均无显著影响,模拟肠液消化后,仅表儿茶素、没食子酸含量分别降低为76.96%和50.30%,其他酚类化合物含量均无显著变化。     

潮霉素磷酸转移酶的致敏性评价研究

潮霉素磷酸转移酶基因广泛用于转基因生物的基因转化过程中,该基因(hpt)编码的蛋白属于无食用和食物过敏史的处源目的蛋白。根据IFBC-ILSI 制定的转基因食品致过敏性评价方法,进行了与已知的过敏蛋白的氨基酸序列相似性比较、消化稳定性实验以及动物模型实验。结果表明,未发现连续8 个氨基酸序列相同;该蛋白在80℃加热10min 左右时已全部降解,不具有热稳定性;体外模拟消化实验表明,消化20min 时,SDS-PAGE 和WesternBlotting 已检测不出Hpt 蛋白。实验采用BN 大鼠作为过敏模型,ELISA 检测特异IgG、IgE 以及组胺水平,Hpt 蛋白与阳性存在显著性差异(p ＜ 0.05),与阴性无显著性差异。综合结果表明,Hpt 蛋白潜在致敏性很低。本研究可为进一步开展以hpt 基因为标记性基因的作物上市前安全性的评价提供基础数据。     

酰化茶多酚的急性毒性与遗传毒性试验研究

目的:评价酰化茶多酚作为食品抗氧化剂的毒理学安全性。方法:按照我国卫生部《食品安全毒理学评价程序和检验方法规范》的要求进行小鼠急性经口毒性试验与遗传毒性试验(Ames试验、小鼠骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸形试验)的毒理学研究。结果:该酰化茶多酚对雄性ICR小鼠的急性经口毒性半致死剂量(LD50)为3.69g/kg,雌性小鼠急性经口LD50为6.81g/kg,根据急性毒性分级标准的规定,该受试物属低毒级;而三项遗传毒性试验结果均为阴性。结论:在本实验条件下,酰化茶多酚的小鼠急性经口毒性属低毒级,未见遗传毒性作用。     

祛斑保健品急性毒性和遗传毒性试验研究

研究祛斑保健品的急性毒性和遗传毒性。采用小鼠急性经口毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和小鼠精子畸形试验对祛斑保健品进行常规安全性实验分析。急性经口毒性实验结果表明,雌雄小鼠经灌胃给予祛斑保健品,其最大耐受剂量(MTD)均大于15g/kg,该样品属无毒级。Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性。祛斑保健品在人体推荐摄入剂量3.6g/d范围内是安全可靠的。     

杞茸酒的急性毒性、遗传毒性试验研究

研究杞茸酒的急性毒性和遗传毒性。采用小鼠急性经口毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和小鼠精子畸形试验对杞茸酒进行常规安全性实验分析。急性经口毒性实验结果表明,雌雄小鼠经灌胃给予增强免疫力保健酒,其LD50大于107.5ml/kg,表明该样品属无毒级。Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性,表明该样品未见遗传毒性作用。杞茸酒在人体推荐摄入剂量0.833m L/kg BW/d范围内是安全可靠的。     

柚皮苷/柠檬苦素微胶囊的制备、结构分析及特性研究

为提高柚皮中柚皮苷和柠檬苦素的生物利用度,降低其苦味,拓展其在食品开发中的应用,本研究以海藻酸钠-壳聚糖-氯化钙体系为壁材,采用锐孔造粒法微胶囊化柚皮苷/柠檬苦素,并以柚皮苷/柠檬苦素包埋率为响应值,通过单因素实验和响应面试验优化柚皮苷/柠檬苦素微胶囊的制备工艺。进一步通过扫描电镜（SEM）、傅里叶变换红外光谱仪（FTIR）、电子舌、热稳定性分析以及体外模拟消化试验对柚皮苷/柠檬苦素微胶囊的微观形态、分子结构、相对苦味强度、热稳定性及胃肠消化特性进行了研究。结果表明,微胶囊化最佳工艺条件为壁芯材比为8:3、壳聚糖质量分数为0.9%,氯化钙质量分数为3%,此时包埋率可达88.2%,与理论值的88.68%相对误差小于5%,说明该工艺准确可靠;扫描电镜证实海藻酸钠-壳聚糖-氯化钙体系组成的微胶囊结构能高效且紧实包裹柚皮苷和柠檬苦素,并且微胶囊表面无裂缝、孔洞和凹陷的现象。热稳定性和电子舌试验表明,柚皮苷和柠檬苦素的微胶囊化可以明显提高柚皮苷和柠檬苦素的稳定性,并且有效降低其苦味强度;体外模拟胃肠道消化缓释试验表明,微胶囊在模拟胃液中消化6 h后总体释放率才达31%左右,在模拟肠液中消化45 min时累计释放率已经超过75%,表明微胶囊化能有效促进柚皮苷/柠檬苦素在肠道内的生物转化与吸收,提高其利用率。本研究结果可为拓展柚皮苷/柠檬苦素在食品和医药领域的高值化利用提供依据。     

超高压加工胡萝卜汁的小鼠体内安全性评价

目的:评价超高压处理胡萝卜汁对小鼠的安全性.方法:利用小鼠急性毒性试验和小鼠30d喂养试验,对各胡萝卜汁样品进行毒理学研究.考察200、400和600 MPa处理10 min的胡萝卜汁对小鼠生长发育及血液理化指标的影响.结果:急性毒性试验表明:超高压处理胡萝卜汁对雌、雄小鼠急性经口最大耐受量(MTD)均大于21 500.00 mg/kg bw,其半数致死量(LD50)也大于21 500.00 mg/kg bw,说明受试物属无毒级物质.30 d喂养试验结果表明:各组小鼠的体重、组织生长发育及血液理化指标等与对照组相比无显著差异,胡萝卜汁对小鼠无明显不良影响.结论:采用超高压技术加工的胡萝卜汁是安全的.     

防治奶牛乳房炎基因药物的安全性试验

用乳腺特异表达人溶菌酶(hLYZ)基因的重组质粒作为防治奶牛乳房炎的基因药物,初步试验结果表明具有良好的治疗效果.为了证明该基因药物临床使用的安全性,本研究用纯化的重组质粒注射小鼠、奶牛犊和奶牛,对质粒注射动物的临床表现、质粒在牛乳中的残留时间、在实验动物消化道内的降解动态及转化肠道细菌的可能性进行了观察和检测,结果表明重组质粒注射对小鼠、奶牛犊和患乳房炎奶牛均无不良反应,注入乳池的重组质粒的PCR扩增阳性时间达10天,重组质粒在小鼠胃内完全降解的时间小于1分钟,从灌服重组质粒小鼠的粪便中未分离到质粒转化细菌.这些初步试验结果表明,该重组质粒不存在生物安全隐患,可以作为防治奶牛乳房炎的新型药物加以开发.     

羟基红花黄色素A体外消化特性与体内代谢规律研究

目的 研究羟基红花黄色素A（hydroxysafflor yellow A,HSYA）体外模拟胃肠道系统中的稳定性,口服后小鼠组织中的分布,以及HSYA跨小肠上皮细胞膜运输能力。方法 体外模拟胃肠道消化实验采用紫外分光光度法检测体外模拟胃肠道消化分别为1h和2h后的HSYA的全光谱特性以及HPLC (high performance liquid chromatography, HPLC)法测定HSYA的含量、动物实验包括三种不同摄入方式：腹腔注射,灌胃及长期饲喂。腹腔注射给药和灌胃给药方式分别有两个时间点为1h和2h、剂量为0.01 mL/g灌胃1h和2h,长期饲喂方式含有2.5%红花小花饲喂10周,后采集小鼠组织,样品处理采用6%高氯酸和甲醇沉淀蛋白法,利用高效液相色谱法定量HSYA在样本中的含量。细胞实验,HSYA与小肠上皮细胞共培养不同时间后,吸取培养液,把细胞裂裂解后,通过HPLC测定培养液和裂解后的HSYA的含量。结果 体外消化实验结果表明,胃、肠道消化后的HSYA结构未被破坏,HSYA在胃肠道的稳定性较好;腹腔注射红花水提物后HSYA在小鼠血清、肝脏、肾、肺中的含量随着时间延长而下降,只有肌肉中HSYA的含量随着时间的延长而升高,而脾、睾丸、脑、心中均未检测到HSYA。灌胃和长期饲喂红花水提物后小鼠组织和血清中未检测到HSYA,表明HSYA无法经口服被吸收入血。通过细胞实验进一步证明了HSYA无法透过小肠上皮细胞而实现跨膜转运。结论 本研究证明了HSYA的胃肠道中的稳定性较好但口服后不能跨过肠道屏障被吸收入血,HSYA以注射方式入血后在组织中的分布存在一定差异。     

体外人胃肠模拟系统在食物消化行为研究中的应用进展

人体胃肠道在食物消化和营养物质的吸收过程中具有非常重要且关键的作用,在对人体胃肠道功能进行研究过程中常存在伦理问题,而体外人胃肠模拟系统可有效解决该问题,对促进胃肠道功能的研究和食物消化行为的研究也起着非常重要的作用。该文对体外人胃肠模拟系统的研究现状、研究局限性等进行了综述,并对体外人胃肠模拟系统的应用研究进行展望,提出一些发展建议和意见,以期促进体外人胃肠模拟系统在食物消化行为研究方面的工作。     

鄂尔多斯钝顶螺旋藻毒性评价

为探讨鄂尔多斯钝顶螺旋藻（Spirulina platensis）毒性状况,评价其摄入的危险性,该研究开展了钝顶螺旋藻急性毒性试验、小鼠骨髓细胞微核试验、Ames试验和小鼠精子畸形试验。结果表明,鄂尔多斯钝顶螺旋藻对雌雄小鼠经口最大耐受剂量（MTD）均大于20 g/kg体质量,小鼠未发生突变,小鼠骨髓嗜多染红细胞的微核率没有出现明显变化,对小鼠精子畸形发生率也未产生明显影响,检测结果均呈阴性,可以证明鄂尔多斯钝顶螺旋藻无急性毒性。     

核桃饼粕蛋白提取、多肽制备条件优化及其酶解液的抗氧化性研究

本研究以去除多酚的核桃粕为原料,利用均匀试验优化核桃粕碱溶性蛋白提取条件,利用二次通用组合旋转设计优化双酶法制备核桃粕多肽制备条件,结合项目组前期建立的模拟胃肠道消化体系及模拟胃肠道消化体系+混合乳酸菌两种体系,制备核桃粕蛋白酶解液,采用体外实验对比三种体系制备核桃粕蛋白酶解液的抗氧化活性。核桃粕蛋白质最佳提取条件为:提取溶液的pH11、料液比为1:21 (g/mL)、提取温度65 ℃、提取时间70 min,提取2次,在此条件下提取液蛋白含量为221.6233 mg/g。双酶法制备核桃粕多肽工艺条件分为两个阶段,第一阶段胃蛋白酶酶解阶段,其最佳条件为:底物质量浓度为1 g/100 mL、pH2.4、加酶量为133.53 U/g、温度为40 ℃、时间139 min,在此条件下酶解,核桃粕多肽酶解液水解度25.90%;第二阶段胰蛋白酶酶解阶段,其最佳条件为:加酶量800 U/g、温度20 ℃、pH为6、酶解时间240 min,在此条件下酶解,核桃粕多肽酶解液的水解度为35.57%。三种酶解液的总抗氧化能力V_C当量值分别为:双酶酶解液0.0516 mg/mL,体外模拟胃肠道消化酶解液0.0634 mg/mL、体外模拟胃肠道消化+混合乳酸菌酶解液0.0411 mg/mL,用双酶、体外模拟胃肠道消化、体外模拟胃肠道消化+混合乳酸菌三种体系制备的核桃粕蛋白酶解液均具有抗氧化性活性,而双酶法制备的核桃粕酶解液具有较强的抗氧化活性。