RP-HPLC法分离和定量测定未变性的乳清蛋白成分

建立了一种基于反相高效液相色谱(RP-HPLC)来分离并定量测定脱脂乳、加热脱脂乳及脱脂乳粉中未变性的乳清蛋白的分析方法。采用Venusil ASB-C8色谱柱;流速0.8 mL/min;检测波长215 nm;柱温30℃;流动相A为体积分数0.1%的三氟乙酸水溶液;流动相B为体积分数0.1%的三氟乙酸乙腈溶液;洗脱方式:流动相B开始在38%下等度洗脱2 min,然后在5 min内上升到43%,最后在43%下等度洗脱13 min。此方法在20 min内将4种乳清蛋白组分分离且各蛋白线性关系良好,适合定性和定量检测未变性的乳清蛋白组分。     

高效液相色谱法测定食品中的叶酸

在食品样品中加入体积分数 60 %高氯酸溶液去蛋白 ,过滤后进样检测叶酸。流动相选用pH 3 .5 ,体积分数 12 %的乙腈 ,浓度 5 0mmol/L的KH2 PO4溶液。流速为 1mL/min ,经ODSC 18柱分离 (柱温为 40℃ ) ,用质量分数 0 .5 %的过二硫酸钾溶液作柱后衍生剂 ,流速为 0 .3mL/min ,柱后反应温度为 60℃ ,经荧光检测器 (Ex :3 65nm ,Em :45 0nm)检测定量。实验结果表明 ,在 0 0 1～3 2 μg/mL的浓度范围内 ,线性良好 ,相关系数为 0 .9999;最低检出浓度为 0 .0 1μg/mL ;方法回收率为 98.1% ;变异系数为 2 3 %。     

高效液相色谱法定量分析茶籽粕中的茶皂素

以脱脂冷榨茶籽饼粕为原料,采用反相ODS填料纯化制备茶皂素标准品,并采用紫外吸收光谱、红外光谱及质谱对该标准品进行鉴定;采用自制标准品为标样,建立一种高效液相色谱法定量分析茶籽饼粕中茶皂素含量的方法。高效液相色谱法条件为反相ODS色谱柱、检测波长215nm、柱温室温、流速1.0mL/min、流动相以乙腈-水体系进行梯度洗脱(0～5min内乙腈体积分数保持为20%,5～10min内流动相乙腈体积分数从20%增至100%,10～15min内流动相乙腈体积分数从100%回至20%)。采用该条件检测得到的茶皂素峰型对称,保留时间合适,杂峰和茶皂素峰分离度较高。     

高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定玉米浆中游离L-精氨酸

建立了高效液相色谱-蒸发光散射(HPLC-ELSD)测定玉米浆中游离L-精氨酸(L-Arg)的检测方法。采用Alltima C18(250 mm×4.6 mmi.d.,5μm)色谱柱,以5.0 mmol/L七氟丁酸的体积分数0.2%三氟乙酸溶液和乙腈(体积比为93.75∶6.25)为流动相,流速为0.8 mL/min,ELSD漂移管的温度为110℃,载气流速为2.8 L/min。在该色谱条件下,L-精氨酸浓度50.0～500 mg/L时,其浓度的自然对数与峰面积的自然对数线性关系良好(R2=0.999 6),回收率为97.70%～102.2%,精密度RSD<2.48%。     

高效液相色谱法测定发酵液中表面活性素的含量

建立一种以高效液相色谱法测定发酵液中表面活性素(surfactin)含量的新方法。采用COSMOSIL 5C18-AR-Ⅱ(4.6 × 250mm)色谱柱,以乙腈(含0.1%三氟乙酸)和水(含0.1%三氟乙酸)为流动相,流速0.84ml/min,梯度洗脱,紫外检测波长210nm,在20min 内检测到表面活性素。结果表明,运用本方法在1～100mg/L 范围内表面活性素浓度与积分面积之间具有良好的相关性(r=0.9998),精密度为1.5%,检出限为1mg/L,回收率达到91.36%。     

反相高效液相色谱法分析米曲霉发酵液中的圆弧偶氮酸

为建立米曲霉培养液中圆弧偶氮酸的检测方法 ,采用 4 %乙酸水溶液 (三氟乙酸调至pH2 2 )与乙腈配比做流动相 (5 5 +45 ) ,选择 2 80nm紫外吸收波长 ,测定米曲霉发酵液中的圆弧偶氮酸 ,圆弧偶氮酸在C18色谱柱上获得良好的分离 ,检出限为 0 0 0 2 μg mL ;麦芽汁 -蛋白胨培养液、麦芽汁 -酵母膏培养液、马铃薯 -酵母膏培养液中的圆弧偶氮酸回收率分别为 93 4 %、95 2 %、96 7% ;RSD分别为 4 3%、3 4 %、3 2 %。该方法适宜米曲霉发酵液中圆弧偶氮酸的检测。     

高效液相色谱法测定发酵液中聚苹果酸方法的建立

采用高效液相法在Prevail C18色谱柱(4.6mm×250mm,4μm)上定量测定发酵生产的聚苹果酸,流动相为乙腈和0.025mol/L磷酸二氢钾混合溶液(用磷酸调pH2.5)(v∶v=5∶95),流速为1.0mL/min,检测波长为210nm,柱温为25℃。发酵液经离心、水解处理后进样,4min可以将其中的L-苹果酸完全分离定量。方法的回收率为98.84%～101.47%,RSD为1.35%～1.72%。实验结果表明,该法是测定发酵液中聚苹果酸的快速、有效的定量分析方法。     

高效液相色谱分析乳清蛋白方法研究

建立测定乳清蛋白中α-乳白蛋白和β-乳球蛋白含量的高效液相色谱分析方法,采用Agilent的ZORBOX Eclipse XDB-C8色谱柱(150 mm×4.6 mm),流动相A为10%乙腈中含0.1%三氟乙酸,流动相B为90%乙腈中含0.1%三氟乙酸。采用梯度洗脱,流速为0.25 mL/min,二极管阵列检测器,检测波长214 nm,柱温40℃。外标法定量,α-La和β-Lg两种组分线性关系良好,相关系数分别为0.993 1和0.990 9,检测限为3μg/mL、8μg/mL。     

反相高效液相色谱法检测大豆蛋白外啡肽的研究

大豆蛋白序列中隐藏着外啡肽β-酪啡肽-3(β-CM-3)的片段,使得大豆肽食品中含有外啡肽β-CM-3成为可能,因此有必要对大豆肽食品进行外啡肽β-CM-3定性和定量的检测。采用反相液相色谱的方法,以β-酪啡肽-3标准品进行了包括分离柱、流动相的选择、柱温、柱压、流速、检测波长和灵敏度等色谱条件的探索,得出检测条件为波长220nm,柱温25℃,进样量10μL,采用等度洗脱,洗脱条件为:含0·1%TFA的14%乙腈溶液。流速0·9mL/min,洗脱时间为60min。该方法的相对标准偏差为4·07%,平均回收率为95·3%,最小检测浓度为0·4μg/mL。对照标准品保留时间和峰面积,得出酸性蛋白酶/Alcalase=4h/2h酶解液中含有目标外啡肽156·41μg/g。     

反相高效液相色谱法测定苹果酸发酵液中的有机酸

采用反相高效液相色谱法分析测定苹果酸发酵液中的有机酸,最终确定了适用于发酵液中各种有机酸含量测定的色谱条件,色谱柱:COSMOSIL 5C18-PAQ(4.6 mm I.D.×250 mm);紫外检测波长:210 nm;流动相:1%乙腈-20 mmol/L KH2PO4溶液(pH 2.8);流速:0.5 mL/min;柱温:23℃。结果表明,在该条件下苹果酸发酵液中的7种有机酸都得到了较好分离,方法的回收率为94.2%～102.7%,表明具有较好的准确度和精密度。     

青海藏系绵羊肉中肌苷酸、肌苷的含量测定

采用高效液相色谱法对藏系绵羊肉中的肌苷、肌苷酸进行定量分析。色谱柱：Kromasil C18 柱(4.6mm× 250mm,5μm);流动相：甲醇-水(95:5,V/V);流速1ml/min;紫外检测波长：254nm。结果表明：肌苷酸、肌苷分别在12.96～207.50mg/L和1.40～22.42mg/L范围内呈线性关系,回收率分别为97.98%、98.26%,该方法可用于动物肌肉组织中的肌苷酸、肌苷含量的测定。     

HPLC-MS/MS-LIQ法同时定性定量测定染料产品中的分散黄3

采用高效液相色谱-三重四极杆/复合线性离子阱质谱,在多反应监测触发增强子离子扫描模式下对染料产品中的分散黄3同时进行定性定量测定。通过二级质谱进行定性,多反应监测扫描进行定量,定量方法检出限低于5μg/L,在20~200μg/L质量浓度范围内线性关系良好,R~2达0.998;10、50、100μg/L低中高三个质量浓度的加标回收率在90%~110%,具有较好的准确度;RSD为5.2%,具有较好的精密度。     

浓缩石榴汁中熊果苷的超高效液相-串联质谱检测方法研究

建立了浓缩石榴汁样品中熊果苷含量测定的固相萃取-超高效液相-串联质谱测定方法。样品用水稀释,HLB和氨基固相萃取柱净化,采用BEHAmide色谱柱(100mm×2.1mm,1.7μm)分离,以乙腈和水梯度洗脱,多反应监测模式测定,定量离子对为m/z271.2>108.0,定性离子对为m/z271.2>160.9,外标法定量。熊果苷的检测限为0.006mg/kg,在0.004～0.2mg/L浓度范围内,熊果苷的线性相关系数为0.9994,熊果苷的加标回收率均在80.6%～108.1%范围内,相对标准偏差均低于8.3%。该方法样品净化效果良好,检测简便、快速、准确,能够满足浓缩石榴汁中熊果苷含量测定和定性确证的要求。     

Survey of aflatoxins in rice from Iran using immunoaffinity column clean-up and HPLC with fluorescence detection

A study was undertaken to determine levels of aflatoxins in rice. A total of 261 rice samples were analyzed by HPLC using a method was based on the extraction of 50?g of finely ground rice plus 5?g?NaCl with 200?ml of 80% methanol. After filtration and immunoaffinity clean-up, 20?µl was injected onto the HPLC. HPLC analysis was carried out using a Genesis RP C₁₈ column (250?×?4.6, 4?µm I.D.) and a mobile phase with a linear gradient of water/methanol/acetonitrile (6?:?2?:?2?v/v) over 16?min. Aflatoxins were determined after post-column derivatisation with iodine by fluorescence detection at excitation and emission wavelengths of 365 and 445?nm, respectively. It was found that 68.9% of the rice samples contained aflatoxin B₁ at levels greater than 0.2?ng?g^?1.     

高效液相色谱-串联质谱法测定生活饮用水中11种抗生素

目的建立固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法测定生活饮用水中磺胺醋酰、磺胺嘧啶、氧氟沙星、恩诺沙星等11种抗生素。方法选用Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱,以10 mmol/L甲酸铵-0.1%甲酸(A)和甲醇(B)为流动相,采用梯度洗脱进行分离。样品经过固相萃取小柱富集,多重反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)方式检测,外标法定量。结果 11种抗生素在1.0~200.0 ng/m L范围内线性关系良好,平均回收率在45.9%~109.6%。结论该方法灵敏度高,选择性好,准确可靠,方便快捷,适用于水体中抗生素残留的定量定性分析。     

RP-HPLC法测定水果中的蛇麻醇酯

应用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)建立蛇麻醇酯简便的分析方法。分析条件为：色谱柱Nucleosil C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相A为甲醇和水(甲醇:水=20:80),用体积分数50%的磷酸调pH值至3.2±0.05,流动相B为甲醇(含0.01%的磷酸),A:B=4:96,流速1.2mL/min,检测波长为210nm,柱温40℃。蛇麻醇酯的标准曲线为5～250μg/mL 7个治疗质量浓度梯度,y=4.6068x＋11.2640,R2=0.9992。精密度实验结果：连续5次进样,保留时间 RSD为0.2107%,峰面积的RSD为1.2843%;同一样品,在0～48h内9次进样,保留时间的RSD为0.3383%,峰面积的RSD为1.9737%。准确度实验结果：回收率为94.971%～101.964%,回收率的RSD为2.5825%。仪器的最低检出限为1.8886μg/mL。被测定的几种水果(青果、草莓、香蕉、巨峰葡萄、美国红提、番木瓜)中,以青果(干粉)中含量最高,达359μg/g以上。本研究建立的分析条件,能满足水果等样品中蛇麻醇酯定性定量分析的需要。     

饮料和糖果中5种非法添加色素的检测

采用聚酰胺吸附法提取样品溶液的色素,用乙醇-氨水-水混合溶液解吸,用高效液相色谱-二极管阵列检测器测定。采用ODS柱分离,以甲醇和硫酸铵溶液为流动相进行洗脱,在520nm波长处检测。亮黑、荧光素钠、红色2G、荧光桃红和孟加拉玫瑰红的质量浓度在1.0～10.0mg/L范围内与其色谱峰面积的线性关系良好(r=0.999),在1、2、5mg/kg添加水平时的平均回收率在82.95%～95.43%范围内,RSD值在1.99%～5.95%范围内。方法检出限为1.0mg/kg。该方法准确度高,分离效能好,结果稳定可靠,适合于饮料和糖果中亮黑、荧光素钠、红色2G、荧光桃红和孟加拉玫瑰红的测定。     

全自动固相萃取-UPLC-MS/MS法检测清咽类保健食品中非法添加的盐酸二氧丙嗪和沙丁胺醇

建立全自动固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）检测清咽类保健食品中非法添加的盐酸二氧丙嗪和沙丁胺醇的方法。样品用乙酸铵缓冲溶液和甲醇溶解,采用MCX固相萃取柱进行在线净化,然后通过ACQUITY UPLC BEH C₁₈ （2.1 mm×50 mm,1.7 μm）分离,以甲酸溶液（0.1%甲酸和10 mmol/L甲酸铵）和甲醇为流动相,梯度洗脱,流速0.2 mL/min,采用电喷雾离子源（ESI）正离子模式,多反应监测（MRM）进行检测。所测盐酸二氧丙嗪和沙丁胺醇的线性范围分别为 4.9~49.2 ng·mL?1 和 4.3~42.7 ng·mL?1,线性回归方程的决定系数分别为0.9999和0.9998。盐酸二氧丙嗪和沙丁胺醇呈良好的线性关系,且得到较好的分离度。低、中、高3个添加水平的平均回收率为87.4%~98.8%,RSD为0.83%~3.9%（n=3）,盐酸二氧丙嗪和沙丁胺醇的检出下限分别为0.65和0.58 μg/kg。经方法学验证,所建立的分析方法可靠、灵敏、准确,可用于清咽类保健食品中非法添加的盐酸二氧丙嗪和沙丁胺醇同时定性和定量分析。     

气相色谱-氢火焰离子化检测器法测定白酒中50种风味物质

为满足企业对白酒中多种风味物质进行快速准确地定量分析的需求,以叔戊醇、乙酸正戊酯、2-乙基丁酸为内标物,建立气相色谱-氢火焰离子化检测器（GC-FID）检测白酒中50种挥发性风味物质的方法。结果表明,色谱条件为CP-WAX57CB色谱柱（50 m×0.25 mm×0.20 μm）,载气为高纯氮气（N2）,流速1.0 mL/min。进样量1 μL,分流比20∶1,进样口温度250 ℃;检测器温度250 ℃;标准品比对进行定性,内标法定量。50种风味物质在各自质量浓度范围内线性关系良好,相关系数（R2）均＞0.995。精密度试验结果的相对标准偏差（RSD）均＜5%,检出限在0.34～25.62 mg/L之间,加标回收率在90.06%～106.30%之间。该方法简单,精密度及准确度均满足白酒中风味物质检测的要求,可用于白酒中50种风味物质含量的检测分析。     

气相色谱-串联质谱法测定原料类果酱中百菌清残留量

建立了原料类果酱中百菌清农药残留的气相色谱-串联质谱（GC-MS/MS）测定方法。通过对关键步骤进行优化,样品经乙腈提取,氟罗里硅土固相萃取柱净化,气相色谱-串联质谱仪测定,外标法定量。结果表明：百菌清的定量限为0.01 mg/kg;标准曲线在5~250 ng/mL范围内线性良好,相关系数＞0.99;在0.01~0.1 mg/kg浓度范围的加标实验中,回收率为83.0%~111.0%,精密度为3.7%~10.3%,符合方法学验证要求。该方法操作简便,结果准确,可适用于不同种类的原料类果酱中百菌清残留的测定。