α-ALDC产生菌的抗性标记与融合条件初探

利用青霉素和链霉素分别对α-ALDC产生菌枯草芽孢杆菌3226-5、V-20进行抗药性标记,筛选得到稳定的青霉素抗性标记株P-67和链霉素抗性标记株S-17,并以P-67和S-17为融合的亲本在溶菌酶浓度,酶解时间,酶解温度,PEG浓度和pH等不同的条件下进行原生质体融合,从而确定了其融合的最佳条件。     

α-ALDC产生菌的抗性标记与融合条件初探

利用青霉素和链霉素分别对α-ALDC产生菌枯草芽孢杆菌3226-5、V-20进行抗药性标记，筛选得到稳定的青霉素抗性标记株P-67和链霉素抗性标记株S-17，并以P-67和S-17为融合的亲本对其原生质体融合条件进行了初探。     

黄色短杆菌原生质体制备与再生条件的研究

目的 研究高产谷氨酰胺的黄色短杆菌原生质体制备和再生的最佳条件.方法 用青霉素和甘氨酸预处理黄色短杆菌后,用溶菌酶酶解,研究菌龄、青霉素和甘氨酸预处理浓度及时间、酶浓度、酶解时间、酶解温度等条件对原生质体制备和再生的影响.结果 原生质体制备和再生的最佳条件为:预处理处于对数生长早期的黄色短杆菌,青霉素最适浓度0.4 u/mL,甘氨酸浓度2％,预处理时间2h,酶浓度1 mg/mL,酶解时间12h,酶解温度37℃.结论 在最佳条件下原生质体形成率达99.71％,再生率达16.52％.     

膜法制备血红蛋白血管紧张素Ⅰ转化酶抑制肽

研究了猪血粉酶解及超滤法制备血管紧张素Ⅰ转化酶(ACE)抑制肽的工艺条件。首先将胃蛋白酶的猪血粉水解产物,依次通过30、10 ku和6 ku 3个截留分子质量(MWCO)的超滤膜,获得4组不同分子质量段(P-Ⅰ、P-Ⅱ、P-Ⅲ和P-Ⅳ)的血红蛋白多肽组分,质量浓度为1 mg/m L时,4个组分对ACE的抑制率分别为16.5%、21.7%、24.3%和55.6%。其次对抑制活性较低的3组分,分别用胰蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶进行二次酶解,底物浓度均为2.0%,酶与底物质量比1.0%,根据ACE抑制率,分别确定各组分的二次酶解条件,结果显示P-Ⅰ、P-Ⅱ使用碱性蛋白酶酶解1 h时活性最强,P-Ⅲ使用中性蛋白酶酶解5 h时活性最强,得出结论血红蛋白二次酶解使水解产物的活性增强,且蛋白酶水解与膜分离的工艺适合于工业化生产。     

酶解法制备荞麦抗性淀粉的工艺优化

为确定荞麦粉制备抗性淀粉的工艺条件,采用普鲁兰酶酶解脱支法,并通过单因素和正交试验研究了影响抗性淀粉得率的因素。结果表明：影响抗性淀粉得率的因素主次顺序依次为荞麦粉浓度、普鲁兰酶用量、酶解时间和酶解温度。酶解法制备荞麦抗性淀粉的适宜工艺条件为荞麦粉浓度5 g/（100 mL）、普鲁兰酶用量7.2 PUN/g、酶解温度45℃、酶解时间8 h,在此条件下测得的抗性淀粉含量为15.82%。与原粉相比,普鲁兰酶酶解脱支与湿热法相结合制备荞麦抗性淀粉使其抗性淀粉含量显著提高。     

板栗RS3型抗性淀粉压热-酶解法制备及工艺优化

通过比较抗性淀粉含量和体外消化性能试验筛选板栗RS₃型抗性淀粉最佳制备方法，并采用正交试验进行优化，确定板栗RS₃型抗性淀粉的最佳制备工艺。结果表明，压热-酶解法制备的抗性淀粉含量显著高于压热法和微波法(P<0.05)，且体外消化率最低，故选择压热-酶解法为最佳制备方法。单因素试验证明：淀粉乳浓度，酶解时间，酶用量以及压热温度是影响压热-酶解工艺的主要因素。正交试验确定板栗RS₃型抗性淀粉最佳制备工艺条件为：淀粉乳浓度20%、酶解时间6h、酶用量25 npun/g淀粉、压热温度100℃，在此条件下抗性淀粉含量为10.01%。综上压热-酶解法是制备板栗RS₃型抗性淀粉的最佳方法，具有一定的应用前景。     

双亲灭活青霉菌与枯草芽孢杆菌原生质体融合

目的:为选育具有高纤维素酶活性且强抗逆性的新菌株,将高产纤维素酶的青霉菌Penicillium Q5与强抗逆性的枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis K3进行原生质体融合。方法:采用双亲灭活原生质体技术对青霉菌与枯草芽孢杆菌进行原生质体融合,考察原生质体制备条件与融合中的影响因素。结果:对亲本菌株进行酶解前处理,随着酶解浓度和酶解时间的增加,原生质体的形成率随之增大,而再生率下降。对融合过程进行正交试验,结果在融合温度38℃,融合时间10 min,PEG质量浓度0.4 g/L的条件下,融合率为3.08×10-7。在172株融合子中筛选出1株R62,保留了亲本的酶活且在p H 8~10条件下有较强的抗逆性。结论:双灭活原生质体融合方法成功选育出具有抗逆性的高产纤维素酶菌株。     

压热-酶解法制备青芒果抗性淀粉

本研究采用压热-酶解法制备青芒果抗性淀粉,实验以青芒果淀粉为原料,在压热条件和α-淀粉酶作用的基础上,研究普鲁兰酶酶浓度、酶解温度、酶处理p H和酶解时间对青芒果抗性淀粉含量的影响。正交实验结果表明,压热-酶解法制备青芒果抗性淀粉的最佳条件为鲁兰酶添加量30 U/g、酶解p H5、酶解时间15 h、酶解温度60℃,该条件下,青芒果抗性淀粉产率最高可达7.368%。     

酶解处理对大米RS_3型抗性淀粉产率的影响

以大米淀粉为原料,研究比较了α-淀粉酶、葡萄糖淀粉酶和普鲁兰酶对大米RS3型抗性淀粉产率的影响,试验结果表明:普鲁兰酶对大米RS3型抗性淀粉产率影响最为显著,抗性淀粉产率相对较高。在酶法制备大米RS3型抗性淀粉过程中,α-淀粉酶在最佳添加量为1%、酶解30 min、淀粉浓度均为10%条件下,抗性淀粉产率可达14%;葡萄糖淀粉酶在酶添加量为0.5%、酶解20 min、淀粉浓度均为10%条件下,抗性淀粉产率可达15%左右;普鲁兰酶添加量为40μL/g淀粉、酶解12 h、淀粉浓度为20%条件下,大米RS3型抗性淀粉产率高可达20.57%。研究结果可为酶法制备大米RS3型抗性淀粉提供参考。     

酸奶中保加利亚乳杆菌药物敏感性分析

从酸奶中分离保加利亚乳杆菌,对其遗传多样性和药物敏感性进行分析,并进一步对耐药菌株的抗性基因进行检测。利用改良MRS培养基,从国内不同品牌酸奶中分离获得18株保加利亚乳杆菌。18株分离菌先经RAPD分型后采用琼脂稀释法测定其对11种抗生素的药敏性,并通过PCR对耐药菌株中可能存在的抗性基因进行检测。结果显示,18株受试菌具有明显的遗传多样性和耐药表型多样性。18株菌全部对罗红霉素敏感,而全部对卡那霉素耐药;对氨苄青霉素、青霉素G、金霉素、氯霉素、四环素、林克霉素、链霉素、新霉素及庆大霉素等9种抗生素均表现出不同程度的耐药性。通过检测耐药菌株的抗性基因,从1株菌(B-8)中检出四环素抗性基因tet(M),从2株菌(B-8和B-41)中检出链霉素抗性基因ant(6),从4株菌(B-43、B-47、B-49和B-51)中检出卡那霉素抗性基因aph(3’)-Ⅲa。结果表明,供试18株保加利亚乳杆菌多重耐药现象比较严重。     

纳他霉素高产菌株的选育及其发酵条件的研究

利用链霉素抗性突变选育纳他霉素高产菌株 ,即将经过紫外线诱变处理的纳他霉素(natamycin)产生菌褐黄孢链霉菌 (Streptomycesgilvosporeus)ATCC1 332 6菌株孢子涂布在含有链霉素最小抑制浓度 (0 6μg/mL)的培养基平板上 ,获得了 1 2 2株链霉素抗性突变株。其中纳他霉素产量高于出发菌株的有 1 3株。其中突变株SG 56的生产能力比出发菌株提高到 1 4 6 % ,研究了其发酵性能 ,优化了培养基组成和发酵工艺条件 ,使纳他霉素产量提高到 1 70 %。     

原生质体融合构建耐高温酵母菌株

通过原生质体融合选育耐高温的酵母 ,以解决在纤维素类物质同步发酵过程中酵母发酵温度同纤维素酶酶解温度不一致的问题。利用电场诱导原生质体融合技术对产酒率高的菌株Sb1和产酒率低但耐高温的菌株No 30进行融合。经过融合条件的选择 ,分别对 2亲株进行遗传标记 ,3 5 %蜗牛酶处理原生质体 ,在脉冲强度为 11kV、宽度 10 μS、次数为 2次时进行融合 ,得到数株融合子。鉴定得知 ,融合子 2是所需要的融合子 ,其在固态发酵 45℃时产酒精能力达到体积分数 7 2 8%。     

原生质体融合技术选育弱后酸化乳酸菌菌株的研究

对新疆地方乳酸菌Lactobacillus bulgaricus LN1#进行原生质体融合,应用均匀设计的方法得到L.bulgaricus LN1#的原生质体制备条件:溶菌酶质量浓度为15.00 g/L,酶解细胞壁的时间为60 min,酶解温度为44℃。对原生质体进行灭活,致死率达到100%的条件:紫外线灭菌为120 s;高温为53℃,60 min。应用青霉素对融合子进行筛选,最终得到37℃培养时产乳酸量与出发菌株相同,10℃贮藏时,产乳酸量明显减少的目标菌株NO2#和NO3#。     

原生质体融合选育冠菌素高产菌株

研究以抗卡那霉素突变株189(KMr、Glu+)和谷氨酸缺陷营养型突变株A4.6.727(Glu、KM8)为亲本,进行原生质体融合构建冠菌素高产菌株.确定了制备原生质体的适宜条件为溶菌酶浓度0.05mg/mL和酶解时间100min,此条件下原生质体形成率达79.1%,再生率为12.8%.所得融合子经多次转管培养,检测融合子发酵产冠菌素产量,最终筛选到一株高产冠菌素菌株S1893,其冠菌素相对产量比出发菌株提高184.1%和519.0%.     

四川泡菜中乳酸菌链霉素抗性与抗性基因的检测（英文）

目的探明四川泡菜中链霉素抗性乳酸菌及抗性基因的种类。方法利用含有8μg/ml链霉素的MRS初步分离泡菜液中的抗性乳酸菌,通过16S r RNA分析确定抗性乳酸菌的分类地位后,测定同种不同菌株对链霉素的MIC,并与欧洲食品安全官方机构(EFSA)建议的最低临界值比较确定抗性菌株;通过PCR扩增链霉素抗性基因str A、str B,aad A、aad E、ant(6)、aac(6')-aph(2')和aph(3')-Ⅲa,确定抗性菌株的抗性基因。结果分离到67株链霉素敏感性或抗性菌株,这些菌株分别属于Pediococcus ethanolidurans(36),Lactococcus garvieae(14),Lactobacillus buchneri(12),Lactobacillus acetotolerans(2),Lactococcus lactis(1)和Staphylococcus.spp(2)。其中Lactococcus garvieae、Lactobacillus acetotolerans、Lactococcus lactis和Staphylococcus.spp全部为抗性菌株,Pediococcus ethanolidurans中有抗性菌株20株、Lactobacillus buchneri中有7株。在抗性基因检测中,除Lactobacillus acetotolerans抗性菌株没有检测到被检基因外,其他5个种的抗性菌株中均检测到部分或全部抗性基因。str A和aph(3')-Ⅲa基因在除Lactobacillus acetotolerans外的被检菌株中均有检出,其检出率分别为50%-100%和21.4%-100%;str B基因在抗性菌株Pediococcus ethanolidurans,Lactobacillus buchneri,Lactococcus garvieae和Lactococcus lactis检测率分别为70%、42.9%、28.6%和100%;aac(6')-aph(2')基因仅在3株Pediococcus ethanolidurans、1株Lactobacillus buchneri、1株Lactococcus garvieae和Staphylococcus spp中检测到。aad A、aad E and ant(6)在所有抗性菌株中都没有检测到。总体而言,str A、str B和aph(3')-Ⅲa基因在链霉素抗性菌株中的检出率高于其他抗性基因。结论当前的研究结果表明:四川泡菜中存在链霉素乳酸菌抗性菌株,这些抗性菌株对四川泡菜存在潜在安全风险。     

四川泡菜中乳酸菌链霉素抗性与抗性基因的检测

目的 探明四川泡菜中链霉素抗性乳酸菌及抗性基因的种类。方法 利用含有8 μg/ml链霉素的MRS初步分离泡菜液中的抗性乳酸菌,通过16S rRNA分析确定抗性乳酸菌的分类地位后,测定同种不同菌株对链霉素的MIC,并与欧洲食品安全官方机构（EFSA）建议的最低临界值比较确定抗性菌株;通过PCR扩增链霉素抗性基因strA、strB, aadA、aadE、ant(6)、aac(6')-aph(2')和aph(3')-Ⅲa,确定抗性菌株的抗性基因。结果 分离到67株链霉素敏感性或抗性菌株,这些菌株分别属于Pediococcus ethanolidurans (36), Lactococcus garvieae (14), Lactobacillus buchneri (12), Lactobacillus acetotolerans (2), Lactococcus lactis (1)和Staphylococcus.spp (2)。其中Lactococcus garvieae、Lactobacillus acetotolerans、Lactococcus lactis和Staphylococcus.spp全部为抗性菌株,Pediococcus ethanolidurans中有抗性菌株20株、Lactobacillus buchneri 中有7株。在抗性基因检测中,除Lactobacillus acetotolerans抗性菌株没有检测到被检基因外,其他5个种的抗性菌株中均检测到部分或全部抗性基因。strA 和aph(3')-Ⅲa基因在除Lactobacillus acetotolerans外的被检菌株中均有检出,其检出率分别为50%-100%和21.4%-100%;strB基因在抗性菌株Pediococcus ethanolidurans, Lactobacillus buchneri, Lactococcus garvieae和Lactococcus lactis检测率分别为70%、42.9%、28.6%和100%;aac(6')-aph(2')基因仅在3株Pediococcus ethanolidurans、1株Lactobacillus buchneri、1株Lactococcus garvieae和Staphylococcus spp中检测到。aadA、aadE and ant (6)在所有抗性菌株中都没有检测到。总体而言,strA、strB和aph(3')-Ⅲa基因在链霉素抗性菌株中的检出率高于其他抗性基因。结论 当前的研究结果表明：四川泡菜中存在链霉素乳酸菌抗性菌株,这些抗性菌株对四川泡菜存在潜在安全风险。     

玉米抗性淀粉酶解法制备工艺的研究

以抗性淀粉得率为评价指标,采用酶解法制备玉米抗性淀粉,通过正交试验确定了酶解法制备的最佳工艺条件:α-淀粉酶酶解条件为淀粉乳浓度20%,α-淀粉酶用量15u/g,酶解温度70℃;普鲁兰酶脱支条件为普鲁兰酶用量4u/g,脱支时间10h,pH值4.5;糊化条件为糊化时间20min,糊化温度120℃。     

枇杷核抗性淀粉制备工艺优化及其性质测定

目的 优化枇杷核抗性淀粉的最佳制备条件,并对枇杷核抗性淀粉的结构特征和理化性质进行探究,以期得到枇杷果核再利用的可行性。方法 选用淀粉乳浓度、超声功率、酶添加量、酶解时间为主要条件,通过压热超声酶解法制备枇杷核抗性淀粉;采用扫描电镜、X-射线衍射分析、傅里叶红外变换光谱研究不同品种枇杷核淀粉与抗性淀粉的颗粒结构和理化性质。结果 最佳制备条件：淀粉悬浮液浓度30%、超声提取功率设定180 W、普鲁兰酶添加量25 U/g、酶解时间10 h,在此条件下,枇杷核抗性淀粉得率为12.457%。枇杷淀粉颗粒近椭圆型,抗性淀粉形状变为块状堆叠。枇杷淀粉均呈现C型晶体特征,抗性淀粉均为B型晶体特征。抗性淀粉的红外光谱图在3000-4000 cm-1之间的吸收峰变窄、多,其他区域与淀粉的光谱基本一致。结论 优化后的方法制备效率稳定,在此条件下制备的枇杷核抗性淀粉,形态结构与理化性质良好,可以为枇杷核综合利用提供依据。     

产番茄红素红酵母基因组重排实验条件的优化

目的:探索基因组重排技术应用于产番茄红素红酵母育种中关键步骤的最优条件.方法:本实验以3株产生番茄红素的红酵母ep-2-11、cp-2-6、cp-28为实验菌株,研究菌体培养时间、酶解浓度、酶解时间、灭活条件以及融合时间对基因组重排的影响.结果:当菌体培养12h,酶解浓度为2％,酶解70min时,原生质体制备与再生率最佳;15w紫外灯,照射距离为35cm,磁力搅拌50r/min的条件下照射18min,60℃下灭活35min作为双亲灭活条件;35％聚乙二醇4000(PEG-4000)作为融合剂,处理23min为最佳融合时间.结论:通过基因组重排最佳条件的确定,后续重排实验的效率得到很大的提升,最终筛选出了高产的目的菌株,产量较融合亲本提高了122％.     

L-缬氨酸产生菌的原生质体融合及抗高糖融合株的筛选

通过原生质体融合技术选育出一株抗高糖的融合株。以黄色短杆菌(Brevibacterium flavum)NV128和黄色短杆菌(B.flavum)JV16(Leu-Ile-Met-)为亲本菌株,通过单灭活原生质体融合、高糖梯度平板筛选及进一步的硫酸二乙酯(DES)诱变,获得了一株L-缬氨酸高产菌NJ-237。同时研究了影响原生质体形成、再生的3种重要条件(青霉素、酶和渗透压稳定剂),并确定了其最佳处理浓度和时间。该融合株经7 L发酵罐培养72 h L-缬氨酸达到46.8 g/L,糖酸转化率为27.7%,比两亲株都有显著提高。