核桃清蛋白抗氧化肽的制备及其活性研究

以核桃清蛋白为原料,用碱性蛋白酶进行酶解制备抗氧化肽,通过单因素与响应面试验,分析确定制备核桃清蛋白抗氧化肽的最佳工艺条件为:pH9.5,温度45℃,底物浓度4%,加酶量8 000 U/g,酶解时间2.5 h。对最优条件下制备的抗氧化肽进行活性研究,测定其Fe~(2+)螯合能力及对羟基自由基、DPPH·、ABTS~+·3种自由基的清除能力,结果表明核桃清蛋白抗氧化肽对几种自由基均有显著的清除作用和金属离子螯合能力,是一种活性的的天然抗氧化剂。     

海产小杂鱼抗氧化肽制备工艺

以海产小杂鱼为原料,分别测定风味蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶和碱性蛋白酶酶切小杂鱼所得酶解液的羟自由基清除率,结果表明中性蛋白酶的酶解液羟自由基清除率最高,并且氨基态氮含量较高。以中性蛋白酶为试验用酶,通过正交试验L9(34)得到制备小杂鱼抗氧化肽最佳酶解条件为反应pH7.0、料液比1:2、加酶量500U/g、反应温度42℃,所得的酶解液对羟自由基清除率高达95%以上。Sephadex G75凝胶分离结果显示海产小杂鱼抗氧化肽混合物主要由分子质量低于3000D的肽类组成。     

酶解发酵酸肉制备抗氧化肽的工艺优化

以侗族酸肉、苗族酸肉两种酸肉为原料,采用木瓜、碱性、风味及中性蛋白酶四种蛋白酶进行酶解,测定酶解液短肽得率、羟自由基及DPPH自由基清除率,结果表明碱性蛋白酶酶解液的短肽得率(侗族86.01%,苗族82.52%)、羟自由基(侗族87.48%,苗族79.88%)及DPPH自由基(侗族74.63%,苗族87.87%)清除率最高。通过比较分析苗族酸肉较侗族酸肉短肽得率更高,因此选择以蛋白酶种类、加酶量、酶解时间及料液比为自变量的单因素试验基础上,以苗族酸肉短肽得率及DPPH自由基清除率为评价指标,采用响应面优化最佳酶解条件。结果表明,酸肉抗氧化肽最佳酶解工艺为:碱性蛋白酶添加量12600 U/g、酶解时间1 h、料液比1:1.09(m:V)。在此最优条件下酶解获得的抗氧化肽得率为83.35%,是预测值的98.99%,DPPH自由基清除率力为84.01%,是预测值的97.33%,与预测值基本一致,表明以碱性蛋白酶酶解的酸肉肽具有较高的抗氧化活性及营养价值,同时为酸肉抗氧化肽的开发及利用提供理论依据。     

加酶超声提取核桃抗氧化肽工艺优化

实验利用脱脂核桃粕为原料,在加酶提取核桃抗氧化肽工艺基础上,采用超声辅助技术,研究了超声辅助加酶提取核桃抗氧化肽的最佳提取条件。以对DPPH自由基清除率为考察指标,在单因素实验基础上进行正交实验优化超声辅助加酶提取核桃抗氧化肽工艺。结果表明:加酶超声提取核桃抗氧化肽的最优工艺为:酶解时采用Alcalase2.4L碱性蛋白酶,料液比(核桃粕:缓冲液)1:20,[E]/[S]为13:500、pH9、酶解温度49℃的条件下酶解2h;超声功率150W,超声时间20min,超声温度50℃,在此条件下制备的核桃抗氧化肽对对二苯代苦味肼基自由基(DPPH·)的清除率达65.11%,抗氧化肽产率62.37%。     

双酶法制备沙丁鱼ACE抑制肽的工艺研究

本实验以广东大宗低值沙丁鱼为原料,采用不同蛋白酶降解沙丁鱼以筛选合适的酶组合,然后对原料的酶解制备血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽的工艺进行研究。结果表明,制备沙丁鱼ACE抑制肽的酶组合为:木瓜蛋白酶与碱性蛋白酶;酶解的最佳工艺参数为:第一步采用木瓜蛋白酶进行酶解,酶解温度70℃、p H7.5、反应时间2.25 h、酶添加量4000 U/g、料液比30%(w/v);采用碱性蛋白酶进行第二步酶解,酶解温度70℃、p H10.0、反应时间2.0 h、酶添加量5000 U/g。通过工艺优化,沙丁鱼蛋白质的水解度提高到28.44%,并且最终水解蛋白肽的ACE抑制率为73.44%。     

蛋白酶水解鸡枞菌制备酶解液工艺优化及抗氧化活性

以鸡枞菌为原料,以DPPH·、ABTS^+·、O2^-·清除率及水解度为指标,采用蛋白酶对鸡枞菌进行水解,制备酶解液。以碱性蛋白酶为水解酶,以DPPH·清除率和水解度为参考值,采用单因素和正交试验分析法研究料液比、加酶量、pH、温度、时间对酶解效果的影响。结果表明:应用碱性蛋白酶制备的鸡枞菌酶解液抗氧化效果最佳,酶解条件为料液比1∶25(g/mL),加酶量3500 U/g,pH 7,酶解温度45℃,酶解时间2.5 h。此条件下所得酶解液的DPPH·清除率为73.23%,水解度为44.6%,酶解液对DPPH·、ABTS^+·和O2^-·3种自由基均有清除作用,其IC50分别为0.25,0.39,1.09 mg/mL,但清除能力明显低于同浓度Vc的清除能力。     

大鲵多肽制备工艺的研究

以人工养殖大鲵为原料,酶解大鲵肌肉粉制备大鲵肽。结果表明,采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、Flavourzyme、Protamex、Alcalase 5种酶,在各酶最适pH和温度下,按照加酶量2000U/g、料液比1:25对大鲵肌肉粉酶解5 h,以肽得率为指标,Protamex酶解产物的肽得率最高;采用L9(33)正交试验进行Protamex水解大鲵肌肉粉的水解工艺研究,获得最佳工艺参数为:温度50℃、酶解时间7 h、料液比1:35。     

羊骨多肽酶法制备工艺优化及抗氧化活性研究

以羊骨粉为原料,用碱性蛋白酶进行酶解制备具有抗氧化活性的酶解多肽液。以水解度为指标,优化了羊骨多肽酶法制备工艺条件,并对酶解液的抗氧化能力进行了测定。结果表明,碱性蛋白酶制备羊骨多肽的最佳制备工艺条件为酶解时间5 h,酶解温度45 ℃,加酶量8 200 U/g,酶解pH值10,该条件下羊骨粉的水解度为(28.36±0.02)%。羊骨粉酶解液与对照组(未被碱性蛋白酶酶解的羊骨粉溶液)的抗氧化能力均随着溶液浓度的增加而上升,当酶解液浓度达到2.5 mg/mL时对DPPH自由基、羟自由基、超氧阴离子自由基清除率和还原力均达最大值,分别为(65.42±0.11)%,(82.30±0.27)%,(79.83±0.22)%,0.484±0.007,显著高于对照组(P＜0.05)。说明碱性蛋白酶水解羊骨粉得到的酶解多肽液具有体外抗氧化活性。     

长白山松子抗氧化肽制备及活性研究

以长白山松子分离蛋白为原料,采用碱性蛋白酶制备抗氧化肽,通过Box-Behnken中心组合试验确定最佳水解工艺条件为:酶解温度56.5℃、加酶量7822U/g、底物质量浓度0.021g/mL、pH9.0、酶解时间240min。对该条件制备的抗氧化肽进行活性研究,结果显示随着浓度的升高,松子抗氧化肽在4mg/mL时对ABTS自由基的清除率和Fe2+螯合率达到100%,16mg/mL时对DPPH自由基清除率达到80.95%,24mg/mL时,对羟基自由基清除率达到100%。     

鮟鱇鱼肝抗氧化肽的酶法制备及对羟自由基的清除作用

以脱脂鮟鱇鱼肝为原料,以水解度及对羟自由基的清除活性为考察指标,用木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶及胰蛋白酶进行单酶解筛选试验。以水解度及对羟自由基的清除作用为指标,应用二次正交旋转组合设计试验研究加酶量、酶解时间、pH值及温度对制备鮟鱇鱼肝抗氧化肽工艺的影响。综合考虑水解度和对羟自由基的清除活性因素,最终确定碱性蛋白酶酶解鮟鱇鱼肝制备抗氧化肽的最佳工艺条件是:加酶量3000U/g,酶解时间6h,pH8.5,酶解温度55℃。该条件下制备的鮟鱇鱼肝抗氧化肽产物水解度和对羟自由基的清除分别为69.52%、76.74%。     

双酶酶解制备黑小麦麸皮抗氧化肽

采用双酶法分步酶解黑小麦麸皮蛋白制备抗氧化肽,以水解度、肽得率及总抗氧化活性为指标,通过单因素试验及正交法优化其最佳工艺条件。第一步采用碱性蛋白酶酶解的最佳条件为pH 9,时间2 h,温度50℃,酶添加量18000 U/g;黑小麦麸皮蛋白水解度为11.46%,肽得率为38.33%,总抗氧化活性为6.65μmol/g。第二步采用风味酶酶解的最佳条件为pH 6,温度50℃,时间2 h,酶活添加量10000 U/g;此时水解度为22.74%,肽得率为52.36%,总抗氧化活性为8.47μmol/g。     

酶法水解富硒平菇蛋白工艺优化

研究碱性蛋白酶对富硒平菇蛋白的水解作用,并优化其工艺条件。以恩施产地的富硒平菇粉为原料,选取碱性蛋白酶进行试验,研究料液比、加酶量、温度、pH、水解时间五个因素对碱性蛋白酶水解富硒平菇蛋白的影响。以水解度和蛋白质溶出率为评价指标,在单因素试验的基础上进行正交试验,优化碱性蛋白酶水解富硒平菇的工艺条件。结果表明,酶法水解富硒平菇蛋白的最佳工艺条件为:料液比1:30,碱性蛋白酶添加量为4200 U/g,水解温度55 ℃,pH为10.5,水解反应时间为4 h。在此条件下,富硒平菇蛋白水解度可达到28.46%,蛋白质溶出率为82.85%,水解所得蛋白肽中硒含量为2739.78 μg/g。本研究确定了碱性蛋白酶水解富硒平菇蛋白工艺的最佳条件。     

响应面法优化复合酶酶解制备可口革囊星虫胶原蛋白抗氧化肽工艺研究

以可口革囊星虫为原料提取胶原蛋白,以总抗氧化能力和超氧阴离子清除率为考察指标,通过单因素实验和响应面法优化复合酶酶解制备可口革囊星虫胶原蛋白抗氧化肽工艺条件。结果表明,选用酶筛选试验中多肽抗氧化活性较高的木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶和酸性蛋白酶进行单酶和复合酶试验,最佳方案确定为木瓜蛋白酶与中性蛋白酶复合酶解。在单因素实验基础上确定复合酶添加量（U/g）、酶解温度（℃）、酶解pH、酶解时间（h）为自变量,通过响应面法优化并参考实际因素,确定复合酶酶解的最优条件是:复合酶添加量8135 U/g、酶解温度51.6 ℃、酶解pH6.4、酶解时间4.2 h,在此条件下酶解制备的胶原肽总抗氧化能力为(1.333±0.021）μmol/mL,超氧阴离子清除率为78.75%±0.94%。     

响应面法优化秋刀鱼酶解制备抗氧化活性肽的工艺

采用酶解法从秋刀鱼肌肉中提取抗氧化活性肽,以水解度(DH)、TCA-可溶性肽含量、DPPH自由基清除率、Fe3+还原力、·OH清除率以及O2?·清除率为指标,从六种商业用酶中(中性蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、胰蛋白酶)筛选出最适蛋白酶.以料液比、酶添加量、酶解时间、温度、pH五个因素进行单因...     

辣木籽抗氧化肽的分离鉴定及其稳定性分析

采用碱性蛋白酶酶解辣木籽蛋白制备抗氧化肽,通过超滤、Sephadex G-15葡聚糖凝胶柱层析分离纯化辣木籽抗氧化肽,利用LC-MS/MS鉴定其抗氧化肽序列,并分析pH、金属离子、温度对辣木籽抗氧化肽活性的影响.结果表明:当酶解物、超滤物(<3 kDa)、柱层析纯化物的浓度为8 mg/mL时,对应的还原力吸光值分别为0...     

不同分子量红花籽抗氧化肽稳定性研究

目的:研究不同分子量红花籽蛋白抗氧化肽活性的稳定性。方法:以脱壳红花籽粕为实验材料,经复合酶酶解分离制备抗氧化肽,以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1-diphenyl-2-trinitrophenylhydrazine,DPPH）自由基、超氧阴离子自由基（superoxide anion radical,O₂?·）及羟自由基（hydroxyl free radicals,·OH）清除能力为指标,探讨温度、pH、食品原辅料、金属离子及模拟胃肠消化等环境因素对不同分子量红花籽抗氧化肽活性的影响。结果:红花籽蛋白酶解物<3 kDa（SSPH-Ⅰ）、3~5 kDa（SSPH-Ⅱ）较分离前活性显著增加（P<0.05）,SSPH-Ⅲ（5~10 kDa）和SSPH-Ⅳ（>10 kDa）较分离前活性显著降低（P<0.05）,选取活性显著增加组分研究发现SSPH-Ⅰ抗氧化活性更加稳定,能在60~121 ℃高温、pH6~8弱酸弱碱条件下保持活性,各自由基清除率维持率达到90%以上,10 g/100 mL NaCl和葡萄糖、0.2 g/100 mL柠檬酸对SSPH-Ⅰ抗氧化活性有增强协同作用,各自由基清除率维持率增加至105%左右,10 g/100 mL的蔗糖和0.2 g/100 mL的防腐剂对活性影响不大,添加Cu2+、Zn2+和K+金属离子对SSPH-Ⅰ抗氧化稳定性显著下降（P<0.05）,其影响顺序为:Cu2+>Zn2+>K+>Mg2+>Ca2+,经模拟胃肠消化后活性较稳定,维持率为80%。结论:筛选得到<3 kDa红花籽蛋白抗氧化肽组分活性较高且稳定,为其工业化生产及应用提供理论依据。     

酶解虾壳蛋白制备ACE 抑制剂的工艺优化

以虾壳粉为原料,以水解度和ACE抑制率为指标,利用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶进行酶解,其中中性蛋白酶和碱性蛋白酶有较高的ACE抑制活性,因此对碱性蛋白酶和中性蛋白酶的工艺条件进一步优化。结果表明：碱性蛋白酶酶解工艺优化条件为：温度60℃、pH9.5、底物质量浓度2.5g/100mL、加酶量4000U/g、酶解时间2.5h,在此条件下ACE抑制率最高,为67.70%,水解度为69.79%;中性蛋白酶酶解工艺优化条件为：温度50℃、pH7.0、底物质量浓度2.5g/100mL、加酶量2000U/g、酶解时间2h,在此条件下ACE抑制率最高,为84.04%,水解度为26.76%。提示中性蛋白酶酶解能够产生更多的ACE抑制肽,是酶解虾壳蛋白制备ACE抑制肽的较优酶。     

双酶法制备银杏抗氧化肽工艺研究

为获得制备银杏抗氧化肽的最佳工艺,采用2709碱性蛋白酶和胃蛋白酶分步水解银杏种仁蛋白,以总还原能力为指标,考察酶用量、酶解温度、pH值和酶解时间这4个因素对银杏种仁蛋白酶解效果的影响。通过响应面试验得出2709碱性蛋白酶的最佳酶解工艺为：酶用量为6976U/g、酶解温度为55℃、pH值为8.9、酶解时间为5h,此时银杏种仁蛋白酶解液的总还原能力(A700nm)为1.278;通过正交试验,得到胃蛋白酶的最佳酶解工艺为：酶用量为9000U/g、pH值为3.0、酶解温度为50℃、酶解时间为2h,此时银杏种仁蛋白酶解液的A700nm为1.636。     

复合酶分步水解法制备汉麻多肽及其抗氧化特性研究

汉麻籽由于其营养丰富,且不含有胰蛋白酶抑制剂等抗营养因子,近年来成为食品、医药等领域的研究热点。本研究以汉麻分离蛋白为原料,采用碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶复合酶分步酶解的方式对其进行酶解,通过响应面优化酶解参数,制取汉麻多肽。并采用分光光度计测定其DPPH自由基清除率与铁还原能力,对汉麻多肽抗氧化能力进行评价。结果表明,采用先碱性蛋白酶后木瓜蛋白酶的酶解方式,制得的汉麻多肽含量最高。酶解最优条件为:第一步碱性蛋白酶水解:底物浓度为5%,酶解时间2 h,pH为8.5,酶解温度为54℃,加酶量为10100 U/g;第二步木瓜蛋白酶水解:pH为6.5,温度为50℃,加酶量为5000 U/g,酶解时间1.5 h,最终获得汉麻多肽混合物的水解度为24.48%,肽含量为8.48 mg/mL;汉麻多肽的DPPH自由基清除率为82.32%,与汉麻分离蛋白相比具有较强的铁还原能力,表明汉麻多肽具备较强的抗氧化能力。本研究为汉麻多肽的开发利用提供理论基础。