两株双歧杆菌药敏性及其质粒DNA的检测

利用药敏纸片琼脂扩散法,检测了两株双歧杆菌BB-11和BB-12对临床常用的9大类20种广谱抗生素的药物敏感性.结果显示,两株菌对同一类药物的敏感性有着较好的吻合.对青霉素类、喹诺酮类、氨基糖甙类(卡那霉素除外)全部表现为耐药,对β-内酰胺类、大环内酯类、万古霉素、四环素等全部表现为敏感或中度敏感.随后采用碱裂解法对两株受试菌进行了质粒提取,电泳检测未见条带,初步判断BB-11、BB-12中无质粒存在.     

健康人体及保健品中乳酸菌和双歧杆菌的抗药性分析

目的:研究常用抗生素对来自健康人体和保健品的乳酸菌的影响.为构建乳酸菌和双歧杆菌食品级基因克隆和表达系统,为研制益生菌食品级微生态制剂而筛选无耐药性受体菌株和安全菌株.为乳酸菌的抗性筛选提供科学依据.方法:采用标准药敏纸片琼脂扩散法(K-B法),以金黄色葡萄球菌ATCC 25923为标准对照菌株,研究15株乳酸球菌,14株乳酸杆菌,5株双歧杆菌对8大类19种常用抗生素的敏感性.结果:15株乳酸球菌对氨苄西林、青霉素G、头孢霉素、头孢曲松、卡那霉素、四环素、红霉素、氯霉素均敏感或中度敏感:对磺胺、多黏菌素B均耐药;对其它抗生素表现出不同药敏性.14株乳杆菌都对氨苄西林、青霉素G、头孢霉素、卡那霉素、红霉素、四环素、氯霉素敏感或中度敏感;对磺胺、甲氧嘧啶、多黏菌素B均耐药:对其它表现出不同药敏性.5株双歧杆菌均对氨苄西林、青霉素G、头孢霉素、卡那霉素、甲氧苄氨嘧啶、红霉素、四环素、氯霉素敏感或中度敏感;对庆大霉素、阿米卡星、链霉素、磺胺、杆菌肽、环丙沙星均耐药;对其它抗生素表现出不同药敏性.     

奶牛源性双歧杆菌的分离及耐药特性

为探究奶牛源性双歧杆菌的耐药特性,用双歧杆菌选择性培养基对当地25头乳牛粪便进行了双歧杆菌的分离,筛选耐特定抗菌药菌株,对其进行属种鉴定,选择鉴定为双歧杆菌的7株菌进行12种抗菌药耐药特性研究。结果表明,试验双歧杆菌菌株（以下称试验菌株）中2株被鉴定为豚双歧杆菌（Bifidobacterium choleyium）,4株为链状双歧杆菌（Bif. catenulatum）,1株为青春双歧杆菌（Bif. adoleacentis）。在抗菌药浓度一定的条件下,试验菌株对四环素（Tetracycline Hydrochloride）、氯霉素（Chloramphenicol）和红霉素（Erythromycin）敏感;对诺氟沙星（Norfloxacin）、乙酰螺旋霉素（Acetylspiramycin）、盐酸左氧氟沙星（Levofloxacin）、氨苄西林（Ampicillin）、头孢氨苄（Cephalexin）,因菌株不同,敏感性不同;但对链霉素（Streptomycin）、庆大霉素（Gentamycin）、阿米卡星（Amikacin）和甲硝唑（Metronidazole Tablest）表现出强的耐受性,并且,试验菌株用三种方法均未检测到质粒。     

酸奶中乳酸菌的药物敏感性分析

目的:分析和鉴定不同产地酸奶中乳酸菌对一些常用抗生素的敏感性,指导合理使用抗菌药物与合理使用乳酸菌发酵制品。方法:利用改良的MRS培养基从各地酸奶中分离获得乳酸菌,然后采用琼脂稀释法,对分离获得的18株保加利亚乳杆菌和28株嗜热链球菌对11种常用抗生素的药物敏感性进行检测和分析。结果:同一菌株对不同的抗生素具有不同的药物敏感性,不同菌株对同一种抗生素也显示出不同的敏感性。结论:乳酸菌对常用抗生素的多重耐药已成为普遍现象,不同来源的菌株表现出了不同的耐药性。     

双歧杆菌的质粒检测

实验通过3种方法对14株来源不同的双歧杆菌的质粒进行检测,发现只有一种方法可检测到1株长双歧杆菌(B-2778)存在着1个质粒,且质粒的分子量大约是23000bps;其它菌株在所用的3种方法均未检出有质粒存在。     

酶制剂抗菌活性检测标准菌株的药敏性分析

即将正式颁布的国家标准《食品加工用酶制剂通用卫生标准》首次将酶制剂的抗菌活性列入检验指标,并采用了国际标准检验方法。研究针对国际标准方法中规定的6株酶制剂抗菌活性检验标准菌,选择了9大类40种常用抗生素,采用Kirby-Bauer法进行药敏性测定与分析。结果显示,6株标准菌对不同类的抗生素表现为不同的敏感性,但这一菌株组合对全部40种抗生素均为敏感。因此,此菌株组合具有较为广谱的药物敏感性,能较为全面的检测酶制剂中的抗菌物质;且标准菌株的药敏性图谱可为今后进一步分析酶制剂中抗菌活性物质的种类提供参考。     

生猪屠宰环节沙门氏菌携带状况、耐药性及其耐药基因分析

目的 调查河南省生猪屠宰环节沙门氏菌污染情况, 并分析其耐药性及耐药基因。方法 本研究从河南省不同规模的生猪屠宰企业共采集825份样品, 通过常规检测方法和分子生物学技术对样品进行沙门氏菌分离鉴定, 然后通过药敏实验检测沙门氏菌分离株对17种抗菌药的敏感性; 对部分沙门氏菌分离株进行了12种耐药基因检测。结果 样品中共分离出沙门氏菌241株, 总分离率为29.21%; 所有受试沙门氏菌分离株均对阿米卡星敏感, 而对多西环素耐受性最强(耐药率为95.00%), 其次对其他抗菌药都表现出不同程度的耐受性; 上述分离株存在着严重的多重耐药问题, 其中耐3种及以上药物的菌株占比高达98.34%。耐药基因检测结果显示, 受试菌株均含有针对全部5大类受试药物的抗性基因, 但aac(3)-Ⅰa、gurA、tetB 3个耐药基因均未有检出。结论 河南省生猪屠宰企业存在严重的沙门氏菌污染情况, 且菌株存在严重的耐药性。     

益生乳杆菌质粒抗生素抗性基因与其耐药性的相关性探讨

采用K-B药敏纸片法检测了5株具有潜在益生乳杆菌的耐药性,通过质粒消除,分析了菌株质粒与耐药性之间的联系,应用PCR确定了质粒决定的耐药基因.5株乳杆菌对万古霉素、多粘菌素B以及链霉素等7种抗生素普遍表现出抗性,但主要对四环素敏感.采用SDS与SDS-高温两种方法消除戊糖乳杆菌CH8的质粒后,菌株CH8表现出头孢噻吩和氯霉素敏感性.设计β-内酰胺类抗性基因blr、ECP-1569和nps-1以及氯霉素抗性基因cmlA、cat和cmlA1的引物进行PCR,与目的产物测序比对表明,戊糖乳杆菌CH8的质粒上含有β-内酰胺类抗性基因blr,该基因与其头孢噻吩抗性有关.该研究为探讨乳酸菌的抗药基因转移性提供了前期基础,有助于益生乳杆菌安全性评价体系的建立与完善.     

广东地区副猪嗜血杆菌的耐药表型和基因及其进化分析

本研究探讨了广东地区副猪嗜血杆菌的亲缘关系、药物敏感性及耐药基因的携带现况,对分离自广东不同区域的53株副猪嗜血杆菌进行了16S rRNA进化分析,使用K-B琼脂扩散法针对21种抗菌药物进行敏感性检测,并通过全基因组测序分析其耐药基因携带情况。结果表明,菌株对苯唑西林、复方新诺明、链霉素和四环素耐药率较高,且多重耐药菌株占比较高(84.91%)。通过与耐药基因数据库对比共检测到21种耐药基因,介导9大类抗生素的耐药,其中春日霉素耐药基因ksg A和杆菌肽耐药基因bac A首次在副猪嗜血杆菌被发现。氨基糖苷类和林可霉素类耐药基因携带情况与耐药表型之间符合率可达100%。16S rRNA分析结果显示,不同区域来源的副猪嗜血杆菌亲缘关系较近,且耐药基因携带情况与16S rRNA进化关系以及分离时间存在一定的关联性。本研究结果可对广东地区养猪业副猪嗜血杆菌疾病的防御和治疗起到指导作用。     

酸奶中保加利亚乳杆菌药物敏感性分析

从酸奶中分离保加利亚乳杆菌,对其遗传多样性和药物敏感性进行分析,并进一步对耐药菌株的抗性基因进行检测。利用改良MRS培养基,从国内不同品牌酸奶中分离获得18株保加利亚乳杆菌。18株分离菌先经RAPD分型后采用琼脂稀释法测定其对11种抗生素的药敏性,并通过PCR对耐药菌株中可能存在的抗性基因进行检测。结果显示,18株受试菌具有明显的遗传多样性和耐药表型多样性。18株菌全部对罗红霉素敏感,而全部对卡那霉素耐药;对氨苄青霉素、青霉素G、金霉素、氯霉素、四环素、林克霉素、链霉素、新霉素及庆大霉素等9种抗生素均表现出不同程度的耐药性。通过检测耐药菌株的抗性基因,从1株菌(B-8)中检出四环素抗性基因tet(M),从2株菌(B-8和B-41)中检出链霉素抗性基因ant(6),从4株菌(B-43、B-47、B-49和B-51)中检出卡那霉素抗性基因aph(3’)-Ⅲa。结果表明,供试18株保加利亚乳杆菌多重耐药现象比较严重。     

5株发酵食品源乳酸菌的抗药性分析

以实验室前期分离自混合果蔬酵素的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum S)、分离自树莓酵素的植物乳杆菌(L. plantarum WD)和分离自不同奶制品的保加利亚乳杆菌(L. bulgaricus LB-DR)、鼠李糖乳杆菌(L. rhamnosus Lr-05-281)与干酪乳杆菌(L. casei D-400)5株乳酸菌为研究对象,采用平板药敏纸片扩散法、PCR及RT-PCR技术从表型、基因型以及基因表达几个方面分析菌株的抗药性。结果表明5株菌对氨基糖苷类、喹诺酮类、糖肽类抗生素、多粘菌素B均有抗性;对大环内酯类、四环素类、磺胺类抗生素、呋喃妥因均敏感,并有较为相似的耐药谱;而对不同的β-内酰胺类抗生素敏感性不同;5株乳酸菌均含有质粒,供试的12个抗性基因中,在质粒上检测到erm、aph、vanⅠ、aacⅠ4种抗性基因,基因组DNA上检测到aph、erm、vanⅠ、blaⅡ、aacⅠ、aacⅡ6种抗性基因。部分抗性基因在MRS和加抗生素的MRS培养下会表达,不表达的抗性基因在相应抗生素诱导的条件下其抗性基因不表达。L. plantarum WD菌株质粒上因只含一种vanⅠ抗性基因,其应用安全性较好。     

小檗碱和绿原酸对质粒介导的耐药基因接合转移的影响

目的 研究小檗碱和绿原酸对质粒介导的耐药基因接合转移的影响及其可能的机制。方法 采用微量稀释法测定小檗碱和绿原酸对供试菌株的最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentrations,MICs）,使用临床实验室标准化委员会（Clinical and Laboratory Standards Institution,CLSI）发布的微量肉汤稀释法测定抗生素的MICs,膜接合法测定耐药基因转移水平,S1核酸酶脉冲场凝胶电泳（S1 nuclease pulsed-field gel electrophoresis,S1-PFGE）确定质粒谱,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR）检测接合转移相关基因的表达水平。结果 小檗碱对供试的6株多重耐药沙门氏菌和1株大肠杆菌的MICs均为1.25 mg/mL,绿原酸对其的MICs均为6.25 mg/mL,小檗碱的抑菌效果强于绿原酸。小檗碱和绿原酸分别连续诱导供试菌后,16种抗生素对原始株和诱导株的MICs变化程度不同,对 庆大霉素和四环素的抗性先增大再减小。小檗碱和绿原酸诱导所得的第2、4、6代子代菌株作为供体,与受体菌大肠杆菌EC600接合时,与原供试菌株相比,绿原酸诱导株的接合频率先增大再减小,小檗碱诱导株的接合频率主要是先减小再略有增大。小檗碱和绿原酸诱导未对原供试菌株携带的质粒产生影响,诱导显著调控了traX和pilL等15个接合转移相关基因的表达水平（P<0.05）,与接合频率的变化趋势基本一致。结论 小檗碱和绿原酸对质粒介导的耐药基因接合转移有一定的抑制作用,具有作为耐药基因接合转移抑制剂的潜力。     

水产品中副溶血性弧菌的污染、毒力基因及耐药性研究

采集上海市各大农贸市场3类水产品共273份,分离出副溶血性弧菌105株,平均检出率为38.46%,其中甲壳类、贝类、鱼类检出率分别为50.96%、27.12%、15.79%,三者间有极显著差异(P＜0.01)。多重PCR检测分离菌株发现所有分离菌株没有耐热直接溶血毒素和相对耐热直接溶血毒素基因,仅有不耐热溶血毒素基因。K-B氏药敏纸片法检测了105株分离菌株对10种抗生素的耐药性,发现所有菌株对头孢曲松、萘啶酸和诺氟沙星敏感,部分菌株对氨苄西林(69.50%)和阿莫西林(12.38%)等具有较强的耐药性。另外采用碱裂解法提取所有分离菌株的质粒,发现只有7株菌株含有1～3个质粒,大小范围在1～24kb之间,且菌株耐药性与其所携带的质粒的数量和大小并无直接联系。表明分离菌株的耐药性主要是由于细菌染色体相关基因突变造成的。     

Antibiotic susceptibility profiles of new probiotic Lactobacillus and Bifidobacterium strains

The antimicrobial susceptibilities and presence of plasmids in four new probiotic lactic acid bacteria (LAB) strains, Lactobacillus rhamnosus HN001 (DR20) HN067, Lactobacillus acidophilus HN017 and Bifidobacterium lactis HN019 (DR10), were determined. Resistance to 18 commonly used antibiotics was assessed by disk diffusion. The three Lactobacillus strains had similar antibiotic susceptibility profiles to those of Lactobacillus plantarum strain HN045 and two commercial probiotic Lactobacillus strains, GG and LA-1. The B. lactis strain HN019 had a similar profile to three commercial probiotic B. lactis strains (Bb12, HN049 and HN098). All 10 strains were sensitive to the Gram-positive spectrum antibiotics erythromycin and novobiocin, the broad-spectrum antibiotics rifampicin, spectinomycin, tetracycline and chloramphenicol and the beta-lactam antibiotics penicillin, ampicillin and cephalothin. By contrast, most strains were resistant to the Gram-negative spectrum antibiotics fusidic acid, nalidixic acid and polymyxin B and the aminoglycosides neomycin, gentamicin, kanamycin and streptomycin. All three L. rhamnosus strains (HN001, HN067 and GG) were resistant to vancomycin and several strains were also resistant to cloxacillin. Of the four new probiotic strains, only L. rhamnosus HN001 contained plasmids; however, a plasmid-free derivative of HN001 had the same antibiotic susceptibility profile as the parent strain.     

Use of plasmid profiles and restriction endonuclease digest in environmental studies of Listeria spp. from raw milk

Forty-eight isolates of Listeria spp. (19 L. monocytogenes, 27 L. innocua, 2 L. welshimeri) from bulk raw milk were screened for plasmid DNA. These isolates were collected over a period of 1 year. Only L. innocua harboured plasmids (8/27 strains) which ranged in size 10-44 megadaltons. The plasmid bearing strains could be arranged into three groups 10 Md, 44 Md and 44 + 10 Md. In two farms where Listeria innocua were persistent in bulk raw milk different plasmids profiles were found (farm 1 and 3). In species carrying similar plasmid profiles (44 Md) isolated from the same bulk tank raw milk samples over a period of 2-4 months (farm 2) no similarities in restriction endonuclease digest patterns of the plasmids were observed. This study suggests there may be a constant influx of Listeria spp. into raw milk supplies on the farm.     

嗜热链球菌在鲜奶发酵中的抗逆性研究

本研究旨在探讨嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)对低蛋白浓度、双氧水及抗生素等因素的抗逆性,为产品研发提供依据。试验采用添加9ppm双氧水和蛋白含量为2.3%的鲜奶作为试验组,正常无添加双氧水和蛋白含量为2.9%的鲜奶为对照组,测定菌株发酵时间和酸奶质构差异,评价菌株对低蛋白浓度和双氧水的耐受性;采用纸片琼脂扩散法(K-B法),以金黄色葡萄球菌ATCC25923为参比菌株,测试菌株对5大类(林可霉素类、β内酰胺类、氨基糖苷类、氟喹诺酮类及其他类)共8种抗生素的耐药性。结果显示,供试菌株对于低蛋白、双氧水和抗生素等条件的抗逆性存在较大差异,少量菌株表现出较好的抗逆性,所有菌株对林可霉素类、青霉素类和氯霉素类表现敏感。     

Antibiotic susceptibility patterns of Enterococcus strains isolated from Turkish Tulum cheese

The aim of this study was to detect the plasmid profiles, haemolytic activity and antibiotic susceptibility patterns of 47 Enterococcus strains isolated from Turkish Tulum cheese. Enterococcus strains were found to comprise 1–9 plasmids with molecular weight from 2.0 to 47.6 kb. None of the Enterococcus strains displayed haemolytic activity. The Enterococcus strains were found mostly resistant to tetracycline (30 μg) followed by high‐level streptomycin (300 μg). The Enterococcus faecalis strains were found to be highly resistant to antibiotics than Enterococcus faecium and Enterococcus durans strains. In total, 4.3% of the strains exhibited multiple antibiotic resistance patterns.     

双歧杆菌基因组DNA提取及其遗传多态性研究

用自行改良的氯化苄法，从液体培养的双歧杆菌菌中提取基因组DNA，用紫外吸收光谱、琼脂糖凝胶电泳等方法进行鉴定。结果表明，该法提取的基因组DNA分子量高，收获量大，蛋白质污染少，而义快速、高效、经济和实用。以该基因组DNA为模板，用随机引物S256通过AP—PCR扩增出清晰的RAPD谱带，并呈现出一定程度的遗传多态性。讨论了RAPD指纹图谱在双歧杆菌分类鉴定及工业菌株分子标记中潜在的应用价值。