细菌纤维素高产菌株的鉴定及产物分析

目的:对1株静置培养产生凝胶样物质的菌株CIs51进行鉴定,并对其产物进行分析,确定其工业化生产前景。方法:以CIs51为目的菌株,根据其形态学特征、生理生化特性、16SrDNA序列分析,鉴定其种属。对CIs51所产凝胶干膜进行纤维素酶水解试验、红外光谱分析、X-射线衍射分析,确定其主要成分及性质。研究菌株在柑橘果渣水培养基中的凝胶干膜产量、传代稳定性等,确定该菌株的工业化生产前景。结果:根据形态观察、生理生化特性与16SrDNA序列分析结果,CIs51被鉴定为汉逊氏葡糖酸醋杆菌(Gluconac etobacter hasenii),命名为汉逊氏葡糖酸醋杆菌CIs51。该菌株所产凝胶膜中纤维素含量达94%;红外光谱分析表明其主要成分为β构型葡聚糖,为I型纤维素,结晶度为75%。CIs51在柑橘果渣水培养基中生长良好,纤维素产量达10.17g/L,传代稳定性好。结论:汉逊氏葡糖酸醋杆菌CIs51为新型细菌纤维素高产菌株,适宜在柑橘果渣水培养基中生产细菌纤维素,具有工业化生产的潜力。     

黄酒等食品中产细菌纤维素菌的筛选与鉴定

为了拓宽细菌纤维素的取得途径并加强对黄酒产品的综合利用,本实验旨在从黄酒产物如酒糟浸出液、陈年黄酒、米浆水及市售红茶菌饮料中获得稳定高产细菌纤维素菌株。产细菌纤维素菌株在发酵培养基中在30℃左右下培养会在培养基的液面形成乳白色的胶状菌膜。同时,产细菌纤维素菌株大多具有产酸、为杆菌并且为革兰氏阴性菌的特点。因此,根据这些已知的特征,通过富集培养和分离纯化等方法在市售红茶菌饮料和黄酒各类产品中取得2株产细菌纤维素细菌。经过DNA提取后,PCR扩增得到的产物送往上海生工生物工程有限公司进行16Sr DNA测序分析,结果表明两菌株分别为木醋杆菌CW-1与木醋杆菌CW-2。     

细菌纤维素高产菌株的筛选及鉴定

以残次的水果为原料,经静置富集培养、多次筛选纯化等步骤,分离出一株细菌纤维素产量较高且遗传性能稳定的菌株G-29。根据第二版《伯杰系统细菌学手册》和第九版《伯杰氏细菌鉴定手册》,对该菌株进行形态、生理生化特征和16S rDNA 分子序列分析。初步鉴定该菌为葡糖醋杆菌属(Gluconacetobacter sp.)一个新菌种或者中间葡糖醋杆菌(Gluconacetobacter intermedius)的一个亚种。菌株G-29 已保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M208234。     

醋杆菌产纤维素发酵条件的优化

本文在已筛选出在摇瓶培养条件下高产细菌纤维素菌株--醋杆菌C2的基础上,研究了不同发酵条件对该菌株产纤维素的影响。实验结果表明,醋杆菌C2 发酵产生细菌纤维素的最适温度为27℃,最适pH为4.5,装液量50ml/250ml三角瓶,转速为160r/min,发酵终点204h。     

细菌纤维素高产菌株的诱变选育和发酵条件研究

为了选育高产细菌纤维素的木葡糖酸醋杆菌((Gluconacetobacter oboediens)突变菌株,通过硫酸二乙酯和氯化锂复合诱变,得到-株产细菌纤维素能力最高的突变菌株GO2,其细菌纤维素产量为9.91 g/L,比出发菌株提高36.5%.同时确定突变菌株GO2的静置培养条件为发酵时间为6 d,接种量为80(v/v),面积/体积比为1.58～2.08 cm-1.     

细菌纤维素合成菌的筛选、鉴定及其产物结构和性质表征

该研究从腐败葡萄中筛选、分离细菌纤维素（BC）合成菌株,对其进行分子生物学鉴定,并对其产物的结构与性质进行表征。结果表明,筛选分离得到一株细菌纤维素合成菌株,该菌株的16S rRNA基因测序结果表明其属于醋酸菌属（Acetobacter sp.）,编号为ZX C6-15。扫描电镜（SEM）和傅立叶变换红外光谱（FT-IR）分析结果表明,菌株ZX C6-15产膜具有典型的3D纳米纤维状结构且具有典型细菌纤维素吸收峰。凝胶渗透色谱（GPC）、X-射线衍射（XRD）分析结果表明,菌株产膜重均分子质量（Mw）为14.1×104 kDa,数均分子质量（Mn）为32.3×104 kDa,分散度为2.28,结晶度指数为96%,吸水率达298%。该菌株合成细菌纤维素具有优良的材料性质,为后续培养条件优化及规模生产奠定基础。     

黏细菌的筛选及鉴定的初步研究

目的筛选并鉴定黏细菌。方法用多菌灵抑制霉菌等真菌的生长,加热除去不耐热的杂菌,低温冷冻除去可能存在的蠕虫及不耐反复冻融的细菌;鉴定时用VY/4培养基、纤维素培养基、WCX培养基等。结果根据菌株的子实体结构、菌落形态、营养细胞和黏孢子形态等特征,有3株菌初步鉴定为嗜细菌群的囊球黏细菌属(Angiococcus)。结论得到3株黏细菌新菌株。     

醋杆菌产纤维素发酵培养基的优化

本文在已筛选出在摇瓶培养条件下高产细菌纤维素菌株--醋杆菌C2的基础上,研究了不同碳氮源及无机盐对该菌株产纤维素的影响,并优化了该菌株产纤维素的最佳培养基。醋杆菌C2的最适碳源为蔗糖,D-甘露糖醇,最适氮源为蛋白胨,酵母粉,无机盐为MgSO4•7H2O和柠檬酸三钠;经正交试验确定该菌株产酶最佳培养基配方为:蔗糖7%,酵母膏0.7%,蛋白胨1.1%,MgSO4•7H2O 0.2%,柠檬酸三钠0.1%。使用优化后的培养基配方,醋杆菌C2的纤维素产量可达9.5g/L。     

嗜碱性木素降解菌降解能力的初步研究

通过比较不同嗜碱细菌对麦草中木素、纤维素和半纤维素的降解率, 并比较不同菌株的产酶及酶活情况, 筛选出了木素降解能力较强, 而纤维素和半纤维素降解能力相对较弱的嗜碱性木素降解菌。在ｐＨ≈１０－４的条件下培养８ｄ 后, 菌株６ 降解了３２－３７％ 的麦草木素, 而纤维素和半纤维素分别降解了２１－４８％ 和２２－６９％ 。这与其产酶情况基本一致, 该菌株的酶活最高, 分别为ＭｎＰ２７１－３０Ｕ／Ｌ和ＬｉＰ４１－９４Ｕ／Ｌ。     

木醋杆菌在转盘式反应器中的发酵动力学研究

对细菌纤维素生产菌株QAX993的发酵动力学特性进行了研究,基于Logistic方程,提出了菌体生长动力学、基质消耗动力学、纤维素合成动力学模型,得到了使用转盘式反应器分批发酵合成细菌纤维素的动力学模型参数,同时对实验数据与模型进行了比较,模型与实验数据能够较好地拟合,模型基本上反映了该菌株在转盘式反应器中分批发酵过程的动力学特征.     

豆豉优势细菌菌株的酶活、抑菌作用和初步鉴定

为了获得豆豉多菌种发酵的候选菌株,以著名的自然发酵豆豉——黄姚豆豉和天马山豆豉为材料,首先采用平板划线法分离纯化其中的优势细菌菌株,接着采用透明圈法考察这些菌株对蛋白质、淀粉和纤维素的分解能力,然后采用琼脂平板扩散法考察具有分解能力的菌株对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌的抑制作用,最后根据形态及生理生化特征对菌株进行鉴定。结果表明,黄姚豆豉和天马山豆豉各存在3种不同菌落形态的优势细菌菌株,分别命名为HX-1、HX-2、HX-3和TX-1、TX-2、TX-3;分解蛋白质能力最强的是菌株HX-1,分解淀粉和纤维素能力最强的是菌株TX-1;菌株HX-1和TX-1不仅对蛋白质、淀粉和纤维素都具有分解能力,而且对大肠杆菌具有抑制作用,均为枯草芽孢杆菌。     

淋浇发酵法生产细菌纤维素的结构与性质研究

主要对淋浇发酵生产的细菌纤维素的外观形态、微观结构、化学结构、纯度、持水性、孔隙度和热重特性进行了研究,将其与静态和摇瓶培养方式得到的细菌纤维素进行了比较。结果表明,培养方式不同,细菌纤维素的外观形态、合成模式和微观结构都不相同;淋浇发酵法得到的细菌纤维素的-OH缔合度、聚合度、纯度、持水性、孔隙度、热稳定性均高于静态发酵细菌纤维素和摇瓶发酵细菌纤维素,但结晶度和晶体粒度小于静态发酵细菌纤维素,大于摇瓶发酵细菌纤维素。     

和田地区酸奶中产细菌素乳酸菌的筛选及细菌素特性的研究

从和田地区酸奶中筛选出了乳酸菌A3,其所产抑菌物质在排除过氧化氢和有机酸的干扰及蛋白酶失活实验后,可以初步确定是一种细菌素。该细菌素对热较稳定,在酸性条件下表现出很好的抑菌活性,同时具有广谱的抑菌活性。根据该菌株的形态和生理生化特性,将A3菌株初步鉴定为肠膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)。     

传统广式米醋中醋酸菌的分离与鉴定

从表面发酵法生产的广式米醋发酵醪中分离出8株自然驯化的醋酸菌,经分离纯化及产酸试验,筛选出一株醋酸及细菌纤维素高产菌株RF4,发酵醋酸浓度可达4.80 g/dL,细菌纤维素产量达8.0 g/L,产酸最适酒精度为5％(v/v).通过形态观察、生理生化试验及16S rDNA鉴定证实为萄糖醋杆菌属的木醋杆茵(Gluconacetobacter xylinus).     

不同培养方式生产细菌纤维素的研究

采用RBD反应器与传统静态培养方式生产细菌纤维素,对2种培养方式的发酵动力学参数进行了分析和讨论。结果表明,实验菌株QAX993适合在RBD反应器中生产细菌纤维素,产量比静态培养方式提高了2.79g/L。     

唾液乳杆菌的分离鉴定及生物特性研究

从健康散养的溜达鸡小肠黏膜中分离出一株乳杆菌,通过菌落形态观察、革兰氏染色、生理生化鉴定以及16S rRNA基因序列测定和同源性分析,确定所分离的菌株为唾液乳杆菌,并命名Lactobacillus salivarius C-1-3。对该菌进行抑菌、纤维素降解、耐酸、耐胆盐、耐高温实验。结果表明：其对常见的致病菌大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌都具有良好的抑制作用,且该菌株能够降解纤维素。经过多次驯化后,该菌株表现出较好的抑菌作用及耐酸、耐高温特性。     

产细菌纤维素菌株中间葡糖醋杆菌的分离与发酵条件优化

从中国传统固态发酵食醋醋醅中分离出5株产细菌纤维素(BC)的菌株,经生理生化特征及16S rDNA序列分析,它们均属于中间葡糖醋杆菌(Gluconacetobacter intermedius),其中编号为1-17的菌株初始产量较高。应用扫描电镜技术(SEM)和傅里叶红外光谱技术(FT-IR)分析了BC结构特征。采用单因素研究了温度、培养时间、碳源、初始pH对BC合成的影响。确定菌株1-17最适温度为35℃,发酵时间为7d,甘油和葡萄糖为最适碳源,最适初始pH为6.0,乳酸根离子和钙离子能够促进BC的合成。通过培养条件优化使得细菌纤维素产量从初始的(3.90±0.08)g/L增加到(7.90±0.19)g/L。     

绿豆酸浆中淀粉絮凝菌的分离鉴定及其生长特性

以自然发酵绿豆酸浆为研究对象,采用平板分离技术从酸浆中分离出5株具有絮凝淀粉活性的产酸细菌,通过群体形态、个体形态观察、生理生化实验及16S rDNA序列分析对絮凝活性最高的菌株LLY11进行菌种鉴定,鉴定该菌株为Acetobacter indonesiensis,并命名为Acetobacter indonesiensis LLY11。通过单因素实验优化了其培养条件,其最佳培养条件为:分别以1%葡萄糖、2%牛肉膏作为绿豆汁培养基的碳源和氮源、初始pH5.0、培养温度30 ℃,在该培养条件下,测定了LLY11菌株的生长曲线,确定菌株从12 h才开始进入对数期,有二次生长,分别在24 h和42 h菌体数量达到最高值,随后进入衰亡期。     

藏羊源纤维素降解菌-沙福芽孢杆菌的分离鉴定及其生物学特性

为获得藏羊源纤维素降解益生菌,该试验采用纤维素刚果红培养基从藏羊瘤胃液中分离筛选出可降解纤维素的细菌,结合形态学、生理生化鉴定及16S rDNA序列分析对其进行种属鉴定,通过生长曲线的测定、抑菌试验和药敏试验研究该分离菌株的部分生物学特性。结果表明：筛选出一株纤维素刚果红培养基上呈粉红色、革兰氏染色呈阳性的菌株,命名为BS1-ql。分离菌株BS1-ql产芽孢,氧化酶试验、触酶试验呈阳性等生理生化特征符合芽孢杆菌属的特点,其16S rDNA序列与多株芽孢杆菌属菌株相似度达到96%以上,与沙福芽孢杆菌同源性达100%且处于同一最小分枝,明确该分离菌株是沙福芽孢杆菌。沙福芽孢杆菌BS1-ql生长迅速、接种2 h后进入对数生长期;对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、产气荚膜梭菌的抑菌圈均达8.96 nm以上,均有一定的抑制能力;对大多数常用抗生素呈现不同程度的敏感,对头孢他啶抗生素表现为耐药。结论：成功分离鉴定出一株藏羊源沙福芽孢杆菌,该分离菌株生物学特性良好,为藏羊源益生菌提供了候选菌株。     

白酒酿造过程中耐稀氧含量菌株的筛选

主要运用平板厌氧技术对中高温大曲整个制作过程和窖泥中耐稀氧含量菌株进行了筛选,共筛选出17株耐稀氧含量的细菌,并通过菌落形态、菌株形态的分析比较以及16S rDNA序列分析等,对这17株细菌进行分类鉴定。同时检测其酶活及生长特性为下一步运用于白酒酿造做准备。