玉米大豆复合ACE抑制肽的分离纯化及结构初探

为了探明ACE抑制活性玉米大豆复合肽的结构,采用超滤、Cu~(2+)-Sephadex G-25柱层析、大孔树脂脱盐对复合肽进行分离纯化后,采用HPLC-MS/MS对其中一种复合肽进行了结构鉴定,初步探讨了其构效关系。结果表明:复合粗肽经超滤分离后,得到复合肽的ACE抑制活性大大提高,再经Cu~(2+)-SephadexG-25柱分离后得到两个级分——复合肽Ⅰ和复合肽Ⅱ,前者的ACE抑制活性明显高于后者。复合肽中Pro、Leu、Phe和Ala等氨基酸的含量明显高于原料蛋白质,有助于ACE抑制活性提高。m/z为597.6的质谱峰是一个五肽。结论:m/z为597.6的化合物是氨基酸序列为Leu-Arg-Pro-Asp-Pro的五肽,其端基有助于ACE抑制活性的提高。     

HPLC-ESI-MS对珠蛋白酶解液中的血管紧张素I转换酶抑制肽的分离鉴定

本实验利用ESI-MS/MS对反相高效液相色谱分离的具有血管紧张素I转换酶(ACE)抑制活性的珠蛋白小肽的结构进行鉴定。结果表明:此肽的序列为Val-Val-Tyr-Pro-Trp-Thr(VVYPWT),位于猪的血红蛋白β链的34-39氨基酸序列片断,它对ACE有很好的抑制活性,其IC50为6.02μmol/L。     

酶膜耦合制备高活性ACE抑制玉米肽及结构研究

为了充分提高酶解效率及获得高活性的ACE抑制玉米肽,采用酶解与膜分离耦合技术连续化制备高活性ACE抑制玉米肽,考察了该制备过程中产品的质量和稳定性,比较了不同分子质量级分玉米肽的ACE抑制活性,以及采用HPLC-MS/MS对几种玉米肽的结构进行了解析。结果显示:在连续制备5 h内,所得产品的ACE抑制活性及肽含量较稳定,ACE抑制率在84%左右(最高达到89.82%),其中Mw<3 ku级分玉米肽其ACE抑制活性最高(IC50=0.29 mg/mL);解析出了3种玉米肽的结构,其氨基酸序列分别为QQLLPF、QQFLPF和QFLPF。试验表明:连续化酶膜耦合技术制备的ACE抑制玉米肽产品质量高且稳定,其中Mw<3 ku的玉米肽级分的ACE抑制活性最高;解析出的3种玉米肽均具有ACE抑制肽的结构特点。     

模拟移动床色谱分离纯化绿豆ACE抑制肽

模拟移动床(Simulated Moving Bed,SMB)色谱多被用于二元糖混合物、二甲苯异构体等化学成分的大批量分离。本文采用SMB技术产业化分离具有较高血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性的绿豆肽。以ACE抑制活性和收率为指标,分析SMB系统中不同操作参数对产业化分离绿豆肽效率的影响,并采用二维纳升液质谱联用技术(2D-nano LC-MS/MS)分析高活性绿豆ACE抑制肽的氨基酸序列。结果表明:采用SMB技术可实现高活性绿豆ACE抑制肽的产业化分离。通过调整各区流速提高产品的活性和收率。在进样流速9 m L/min,水洗脱1流速19 m L/min,醇洗脱流速11 m L/min,水洗脱2流速19 m L/min条件下,分离得到的绿豆肽ACE抑制率为95.32%,其收率86%。将分离的高活性绿豆ACE抑制肽进行质谱分析,得出其氨基酸序列分别为Phe-LeuVal-Asn-Arg-Ile(885.1 u)、Phe-Leu-Val-Asn-Pro-Asp-Asp(961.06 u)、Lys-Asp-Asn-Val-Ile-Ser-GluLeu(1 043.13 u)。     

两种来源于牛皮胶原蛋白的新型ACE抑制肽

从牛皮胶原蛋白中鉴定分离出抑制血管紧张素Ⅰ转换酶(ACE)的多肽片段。首先优化牛皮胶原蛋白水解方法,应用胃蛋白酶和碱性蛋白酶获得活性最高的水解产物(抑制ACE的IC50为0.168 mg/m L)。经MW 5000超滤分离后,得到水解液中活性最高的部分(IC50为0.079 mg/m L)。对分离后低于MW 5000的部分经RP-HPLC进一步分离,发现含有大量ACE抑制肽,并应用RP-HPLC-MS/MS鉴定出两种新型ACE抑制肽,氨基酸序列分别为ISVPGPM和LGPVGNPGPA,IC50值分别为0.017 mg/m L(24.3μmol/L)和0.077 mg/m L(87.8μmol/L)。最后,本文模拟了两种抑制肽在体内生理环境下的消化,发现均可被部分降解,且消化产物具有与原始多肽相近的ACE抑制活性。     

酪蛋白非磷肽中一种ACE活性抑制肽的分离和鉴定

酪蛋白经碱性蛋白酶Alcalase水解后,加入乙醇提取出的酪蛋白非磷肽(CNPPs)对血管紧张素转化酶(ACE)的活性有很强的抑制作用。采用凝胶过滤色谱Sephadex G-15和反相高效液相色谱(RP—HPLC)对CNPPs进行分离纯化,通过高效液相色谱/电喷雾电离质谱联用分析和氨基酸组成分析鉴定出一种抑制ACE活性肽,其氨基酸序列为Ser-Trp,ACE半抑制浓度为92.8μmol/L。     

花生ACE抑制活性肽的分离纯化与结构鉴定

本实验研究了花生水酶法提油中的另一产物--花生肽的抑制血管紧张素转换酶(Angiotcnsin converting enzyme,ACE)活性,并对其中ACE活性抑制率最高的肽进行了分离纯化和结构鉴定.该组分的氨基酸序列为Tyr-Gly-Asn-Leu-Tyr.     

绍兴黄酒中一种ACE活性抑制肽的分离和鉴定

首次利用超滤、大孔吸附树脂柱层析和反相色谱法将绍兴黄酒中的肽类组分进行分离制备,并进行了血管紧张素转换酶(ACE)的活性抑制试验,通过高效液相色谱/电喷雾电离质谱联用分析和氨基酸组成分析鉴定出一种ACE活性抑制肽的氨基酸序列为Gln-Ser-Gly-Pro。     

ACE抑制肽构效关系的研究进展及乳源性ACE抑制肽的加工利用现状

对ACE抑制肽的降压机理、构效关系及乳源性ACE抑制肽的加工利用现状等方面进行了介绍。在人体血压调节方面,血管紧张素转换酶(ACE)起着重要的生理作用,越来越多的天然食品源ACE抑制肽被研究和开发利用。本文主要对ACE抑制肽的降压机理、结构、定性/定量构效关系及乳源性ACE抑制肽的加工利用现状等方面进行了综述介绍,以期更好的获得和人工合成优良的ACE抑制肽产品。结果表明,ACE抑制肽的活性与其分子大小、氨基酸种类、序列结构以及空间构象等都密切相关,乳源性的ACE抑制肽的产品在国外已日渐成熟。     

深海鲑鱼皮来源ACE抑制肽的分离及鉴定

为了考察海洋胶原低聚肽中ACE抑制肽的活性和结构,本文以深海鲑鱼皮为原料,采用两步酶解法制备出海洋胶原低聚肽,在对其分子量分布进行分析的基础上,测定了其血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性。结果表明,海洋胶原低聚肽中分子量小于1000 u的组分高达90.79%,主要分布在132~576 u范围内,其ACE抑制活性的IC50为1.18±0.12 mg/m L。然后利用反相高效液相色谱(RP-HPLC)对海洋胶原低聚肽进行分离纯化,收集11个组分峰,对其ACE抑制活性进行了测定。结果表明,有7个组分的ACE抑制活性比海洋胶原低聚肽高。最后利用Q-TOF质谱仪对收集的11个组分进行了结构鉴定,并对鉴定出的15个肽段进行了ACE抑制活性测定。结果表明,15个肽段均有一定的ACE抑制活性,其中Ala-Pro(AP)、Val-Arg(VR)、Gly-Arg(GR)的ACE抑制率比海洋胶原低聚肽高,IC50值分别为0.07±0.01 mg/m L、0.35±0.03 mg/m L、0.92±0.85 mg/m L,活性大约是海洋胶原低聚肽的16.86、3.37、1.28倍,是具有较高ACE抑制活性的肽段。     

蚕蛹源ACE抑制肽的稳定性和抑制ACE动力学

研究了温度、pH、干燥方式和体外肠道酶消化对蚕蛹源ACE抑制肽稳定性的影响,并通过Lineweaver-Burk双倒数曲线作图和紫外光谱初步探讨了蚕蛹源ACE抑制肽对ACE的抑制机理。结果表明:蚕蛹源ACE抑制肽在高温、酸性和碱性条件下不稳定,易失活;冷冻干燥和喷雾干燥对蚕蛹源ACE抑制肽的活性影响较小;蚕蛹源ACE抑制肽对胃蛋白酶、胰蛋白酶和α-胰凝乳蛋白酶具有较强的抗消化能力,经胃蛋白酶、胰蛋白酶和α-胰凝乳蛋白酶共同消化后,蚕蛹源ACE抑制肽仍能保留初始活性的94.0%;蚕蛹源ACE抑制肽竞争性抑制ACE,其抑制常数(Ki)为0.06 mg/mL;ACE被蚕蛹源ACE抑制肽抑制后,ACE在240～280 nm附近的紫外吸光值明显增加,初步揭示了蚕蛹源ACE抑制肽抑制ACE活性时,ACE的分子结构发生了改变。     

基于模拟酶切的酪蛋白定向酶解探究

用模拟酶切软件peptidecutter提供的39种蛋白酶,对已知序列的酪蛋白进行模拟酶切,以生成的寡肽数量为指标建立酶解肽库,选择适用酶并进行真实条件下的酶解验证,获得最适用酶;以血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽的抑制率和酪蛋白磷酸肽(CPP)的氮磷摩尔比来评价ACE抑制肽的活性及CPP的纯度,超滤分离酶解液获得高纯度的ACE抑制肽和CPP。结果表明:胰蛋白酶为最适用酶,超滤后ACE抑制肽的抑制活性及CPP的纯度显著升高(p<0.01),获得了高活性的ACE抑制肽和高纯度的CPP。     

ACE抑制肽的制备及其结构对活性的影响

血管紧张素转化酶（ACE）通过一系列的生理反应,从而起到升高血压的作用,在人体中过量ACE的产生会引起高血压,而生物活性物质ACE抑制肽能够抑制ACE的功能。文章主要综述了ACE抑制肽的主要制备方法及氨基酸序列特点与ACE抑制活性的关系,并阐述了脯氨酸对ACE抑制活性的影响,以及部分氨基酸的结构特点及功能,为今后ACE抑制肽的制备与应用提供参考依据。     

蚕蛹蛋白源血管紧张素转换酶抑制肽抑制机理研究

以纯化得到的两条具有ACE抑制活性的肽(P1和P2)为基础,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI TOF MS)确定P1、P2的氨基酸序列,并采用固相合成法合成,随后对它们的抑制动力学进行研究,最后用Sybyl软件分别将其与ACE进行分子对接。结果表明:P1的氨基酸序列为Gly-Asn-Pro-Trp-Met(IC50值为12.61μg/m L),为非竞争性抑制肽,抑制常数Ki,1=0.037 mmol/L;P2的氨基酸序列为Asn-Arg-Tyr-Leu-Arg(IC50值为14.68μg/m L),为竞争性抑制肽,其抑制常数Ki,2=0.020 mmol/L;P1、P2都能与ACE活性位点氨基酸残基形成氢键。P1、P2可以作为预防高血压的功能性食品,为蚕蛹蛋白的进一步开发利用提供理论基础。     

酶解法制备绵羊乳酪蛋白ACE抑制肽的工艺优化及其抑制机制

为优化酶解法制备绵羊乳酪蛋白ACE抑制肽的工艺条件以及筛选和鉴定一种新的ACE抑制肽,选用5种蛋白酶水解酪蛋白,以水解度、分子质量分布和ACE抑制率为指标筛选最适蛋白酶,采用单因素和响应面试验优化工艺,采用三合一质谱仪(Orbitrap Fusion Lumos Tribrid MS)方法鉴定分子质量小于3 ku组分的氨基酸序列,筛选潜在ACE抑制肽,进行人工合成,测定其IC50值。采用Linewaver-Burk作图确定酶抑制动力学,结合分子对接解析肽段的抑制机制。结果表明:碱性蛋白酶水解酪蛋白的最佳条件为pH 6、底物含量8%、酶添加量4%、温度55 ℃、水解时间90 min,此时酪蛋白水解液ACE抑制率为99.1%。验证具有ACE抑制活性的肽段10条,筛选出一条新颖的降血压肽——LFRQFY(源自αs1-酪蛋白),其ACE抑制活性的IC50为(7.9±1.7)μmol/L,酶抑制动力学为混合抑制模式。分子对接结果表明:LFRQFY能与ACE的氨基酸残基Ala354(活性口袋S1)、His353(活性口袋S2)形成氢键,具有显著的体外降血压活性。     

豆粕血管紧张素转化酶抑制肽的结构鉴定及作用机制解析

以大豆粕为原材料,利用超声辅助酶解技术、超滤-?KTA层析相结合的方法分离纯化获取豆粕酶解产物中血管紧张素转化酶（angiotensin-converting enzyme,ACE）抑制肽,对其分子质量分布进行研究,后通过质谱分析与分子对接技术鉴定并筛选出ACE抑制活性肽的氨基酸序列,经固相合成肽序列,检测其ACE抑制肽的活性并基于分子对接技术探索其抑制机制。结果表明：经超声辅助酶解提取获得的豆粕肽分子质量主要分布在6 000 Da以下;根据分子对接的最低预测自由能筛选出的GVRP（－8.44 kcal/mol）和IIVTP（－9.04 kcal/mol）可以抑制ACE活性,半抑制浓度（50% inhibitory concentration,IC50）分别为（84±0.06）、（77±0.08）μmol/L;分子对接结果表明：GVRP、IIVTP能够与ACE的活性口袋S1、S1′、S2形成氢键相互作用,共有的过近接触（3.5 ?范围内）ACE氨基酸残基为His513、Ala354和Glu384。本研究基于串联质谱与分子对接技术,建立从混合多肽中快速鉴定、筛选活性多肽的方法,探究活性多肽与ACE稳定结合并体现其ACE活性的抑制机制,为后续的深入研究提供一定参考。     

ACE抑制肽构效关系研究进展

血管紧张素转化酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)抑制肽是一类从食源性蛋白质中分离得到的具有降高血压活性的多肽。由于其降血压效果好,而且没有降压药物的毒副作用从而引起了广泛关注。近年来,ACE抑制肽的构效关系研究成为研究重点。结构生物信息学研究表明,ACE抑制肽的ACE抑制能力不仅与其分子质量有关,而且与其氨基酸序列以及其立体空间构象之间存在高度相关性。ACE抑制肽的抑制类型与ACE抑制活性、构效关系也存在一定相关性。对ACE抑制肽构效关系进行深入研究将有助于指导开发高活性的功能性食品及降血压药物。     

南瓜籽ACE抑制肽的Plastein反应修饰及分离鉴定

为进一步提升南瓜籽多肽的ACE抑制活性,利用Plastein反应对南瓜籽ACE抑制肽进行修饰,探究底物质量分数、反应温度、反应时间以及3种外源氨基酸添加量对ACE抑制率的影响。采用超滤和Sephadex G-25柱层析等分离修饰产物,并利用LC-MS/MS鉴定肽序列。结果表明：Plastein反应修饰的最佳条件为底物质量分数45%,反应温度20℃,反应时间3 h;分别添加亮氨酸、苯丙氨酸或甘氨酸均能显著提升修饰产物的ACE抑制率,其中添加0.5 mmol/g亮氨酸时,修饰产物的ACE抑制率最高,比修饰前提高了24.50百分点;经超滤和Sephadex G-25柱层析分离,获得ACE抑制率达89.61%的组分,经LC-MS/MS鉴定出76个肽段,固相合成其中4种多肽IFH、IFF、LAAF、DFHPR,其抑制ACE的IC₅₀分别为1.55、2.24、3.79 mmol/L和7.86 mmol/L。综上,Plastein反应修饰可显著改善南瓜籽ACE抑制肽的ACE抑制活性,经超滤和Sephadex G-25柱层析分离,可获得高ACE抑制活性的南瓜籽ACE抑制肽。     

源于驴血清白蛋白的肽抑制高血压的活性研究

目的:研究从动物血液中的主要蛋白质--驴血血清白蛋白中获得的肤对血管紧张素转换酶(ACE)的抑制作用.方法:运用生物信息学方法用胶蛋白酶水解从驴血清白蛋白中模拟筛选具有抑制ACE活性的肤LH6.并通过化学方法合成该预示肽,验证肽LH6对ACE的活性作用.结果:肽LH6具有很好的抑制ACE活性功效,其IC50值为4.61μg/mL.结论:驴血作为食品被人体摄入后,经系列酶的作用而水解,其水解产物生物活性肽具有抑制ACE的作用.从而推测驴血清白蛋白肽具有潜在的治疗高血压的功效.     

预处理对胶原蛋白水解和血管紧张素转化酶抑制肽段释放的影响

以胰蛋白酶为工具酶,研究短时热处理、超高压处理对胶原蛋白水解和血管紧张素转化酶（angiotensinconverting enzyme,ACE）抑制肽段释放的影响。结果表明：热处理可显著促进胰蛋白酶对胶原蛋白的水解和ACE抑制活性肽段释放,超高压处理组水解物水解度（degree of hydrolysis,DH）与无处理组无显著差异,ACE抑制活性显著低于无处理组。水解物DH和ACE抑制活性关系研究显示,胰蛋白酶水解胶原蛋白过程中,水解度小于5%时,ACE抑制率随水解度呈明显上升趋势,水解度大于5%后,其上升趋势不再明显。肽谱分析进一步证明热处理可有效促进胶原蛋白的水解,超高压处理可改变胰蛋白酶作用位点。热处理组水解物序列分析显示,获得序列均来源于胶原蛋白三螺旋区域,且大部分序列都具有潜在的ACE抑制活性。说明短时热处理可以有效破坏胶原蛋白的三螺旋结构,促进ACE抑制肽段的释放。