海藻酸钠裂解酶酶活测定方法研究

应用酶反应动力学原理对海藻酸钠裂解酶酶活测定反应体系和反应条件进行系统研究,以改进海藻酸钠裂解酶的测定方法。本实验采用紫外吸收法测定酶活,改良后的酶活测定方法为:300 μL底物溶液（海藻酸钠2.2%,KCl 5 mmol/L,0.1 mol/L Na₂HPO₄-NaH₂PO₄缓冲液,pH7.0）加入50 μL稀释至2.4～30 U/mL的酶液,于37 ℃水浴静置反应20 min后用冰浴终止反应,反应液稀释20倍后在235 nm处测定吸光度。每份底物溶液均需用新枪头移取以提高精密度,使移液误差小于2%。本酶活测定方法的相对标准偏差小于5%。     

京尼平苷为底物测定β-葡萄糖苷酶活力的方法

研究以京尼平苷为底物氨基酸为显色剂测定β-葡萄糖苷酶活力的方法.β-葡萄糖苷酶水解京尼平苷的温度为50℃,pH为5.0,京尼平苷浓度为0.625mmol/L,水解10min后,立即加入1ml 1mo1/L Na2CO3终止反应,混匀,再加入体积比为1：1的0.2mg/ml的精氨酸溶液,沸水浴显色10min,冷却后于590nm处测光吸收度值.该方法的检测线性范围为0.05～1U/ml,相关系数为0.9998,检测限为0.02U/ml,精密度为1.5%（n=5）,回收率为99.5%～101.1%,该方法准确度高,结果稳定.     

比色法快速测定酶转化反应中γ-氨基丁酸含量的研究

基于Berthelot显色反应,研究L-谷氨酸在谷氨酸脱羧酶催化下产物γ-氨基丁酸含量测定的比色法.实验确定测定γ-氨基丁酸适宜反应条件为酶反应液1.0 mL,1.0 mol/L Na2CO2溶液0.2 mL,0.01 moL/L四硼酸钠缓冲液1.0 mL,6%苯酚溶液1.0 mL,7.5%NaClO溶液5.0 mL,沸水浴10 min,冰浴5 min,60%乙醇溶液2.0 mL,测定OD640绘制标准曲线并计算样品中γ-氨基丁酸的含量.结果表明,该方法灵敏度较高、重现性较好.测量相对误差＜5%、操作简单易行、设备要求简单,适合大批量样品的快速分析.     

褐藻胶的酶法提取研究

采用纤维素酶、果胶酶和蛋白酶酶解法提取了海带褐藻胶,并对工艺进行了优化.试验结果表明:加入海带干重的2%纤维素酶,55℃(pH值4.5)水解20min,然后加入1%果胶酶60℃(pH值4.5)浸提1.5h,再加入1%蛋白酶,80℃(pH值8.0)水解3h,接着将浸提液加热至沸腾10min钝化酶活,最后加入1 mol/L氯化钙(浸提液:氯化钙=4:1(v/v),离心沉淀后即得褐藻酸钙沉淀,加入次氯酸钠漂白后经盐酸酸化生成褐藻酸,干燥脱水后加入稀碳酸钠溶液即制得褐藻酸钠.     

南瓜谷氨酸脱羧酶酶学特性及γ-氨基丁酸富集条件

对生鲜南瓜(Cucurbita moschata)所含谷氨酸脱羧酶(Glutamate decarboxylase,GAD)的最适反应温度、最适pH、热稳定性和冷冻稳定性等酶学特性进行研究,并利用其富集γ-氨基丁酸(γ-Aminobutyric acid,GABA),探索了反应时间、南瓜品种、缓冲体系、南瓜及味精添加量、料水比对富集效果的影响。结果表明,南瓜GAD最适反应温度为30~35 ℃,最适pH为5.8。南瓜GAD对热比较敏感,50 ℃保温30 min,酶活力损失20%,70 ℃以上保温30 min可导致酶活力完全丧失。冷冻对GAD影响较小,但长期冷冻仍会导致酶活力损失,冷冻8周酶活力损失36%。GABA最适富集条件为:以pH5.8,0.2 mol/L磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液作为反应溶液,南瓜与缓冲液比例为1:3,南瓜添加量25%,味精添加量1.5%,30 ℃反应18 h,反应液中GABA浓度可达7633.2 mg/L,转化率为93.3%,单位质量南瓜GABA富集量为30.5 mg/g,与未富集时相比提高了132倍。     

不同乳酸菌产谷氨酸脱羧酶特性研究

通过对发酵乳杆菌、植物乳杆菌、短乳杆菌所产谷氨酸脱羧酶(GAD)的酶学性质进行比较,分析酶反应温度、pH值、磷酸吡哆醛(PLP)浓度、酶浓度与酶活性的关系,并对高活性乳酸菌GAD酶的米氏常数进行测定。结果表明,3株乳酸菌GAD酶的最适温度为40℃,最适pH值为4.5,在PLP添加量为0.1mol/L时,对酶的促进作用达到最高,发酵乳杆菌Km值为0.05215mmol/L,最大反应速度Vmax=2.08μmol/min;短乳杆菌Km值为0.0243mmol/L,最大反应速度Vmax=1.01μmol/min。     

α-鼠李糖苷酶最佳测定条件的建立及酶学性质研究

对α-鼠李糖苷酶酶活的最佳测定条件及部分酶学性质进行了研究,结果表明,α-鼠李糖苷酶的最佳测定条件为:以pH4.1的磷酸氢二钠-柠檬酸为缓冲液,5mmol/L的pNP-Rha为底物,于45℃恒温水浴中反应4min,立即加入2ml1mol/LNa2CO3溶液终止反应,400nm测定其O.D值。α-鼠李糖苷酶适于酸性环境,最适pH4.1;该酶为热不稳定性酶,其稳定的温度范围为35～55℃;以pNP-Rha(对硝基苯基-鼠李糖苷)为底物,Km值为47.84mmol/L,Vmax为75.12U。     

米糠脂肪氧化酶活力的快速测定及其酶学特性研究

紫外分光光度法是测定脂肪氧化酶活力的常用方法,但其测定准确度受到底物溶液透明度和酶液纯度的制约,尤其在反应缓冲体系的pH低于7.0的条件下,难以进行粗酶液中LOX活力的直接测定。为克服现有方法的不足,本文建立一种改良的米糠中LOX紫外光谱检测方法。首先对米糠进行脱脂处理,提高方法的检测限与精确度;采用"磷酸盐溶液-亚油酸-吐温20"体系,简单、快速地获得透明的底物溶液;在获取米糠粗酶液LOX酶学特性的基础上,通过选择合适pH的缓冲体系,确保底物溶液的相对稳定;以"磷酸盐缓冲液+底物溶液+钝化的LOX溶液"为参比,省去繁杂的酶纯化步骤。结果表明:部分脱脂对米糠中脂肪氧化酶起到激活作用,其活力最高增加了46.33%;米糠LOX最适pH7.5,最适温度35℃;其活力测定的条件为:反应缓冲体系为2.0mL0.05mol/L磷酸盐缓冲溶液(pH7.5)、200μL底物溶液,其中亚油酸和吐温-20浓度分别是2.53×10-3mol/L、1.68×10-3mol/L,测定温度25℃。此优化条件下,粗酶液添加量在10～40μL范围,反应速率与酶浓度呈正比,△OD234/min=0.001V-0.0026(R2=0.9996);米糠LOX酶促反应最大速率Vmax=0.136△A/min,米氏常量Km=11.592×10-3mol/L。该方法能简便、快速和准确地进行米糠中LOX的活力测定以及酶钝化动力学研究。     

巨大芽孢杆菌产亚硝酸还原酶活性测定条件优化

为探明巨大芽胞杆菌产亚硝酸还原酶(nitrite reductase,NiR)的催化特性,更好发挥其催化性能,该文从缓冲液种类、电子供体种类及浓度、NaCl浓度、加酶量以及反应温度和反应时间等几个方面研究了巨大芽胞杆菌产亚硝酸盐还原酶活性测定的适宜条件.研究结果表明,该菌产NiR酶活测定体系为:在250μL反应体系中加入Na2HPO4(0.1mol/L)-柠檬酸(0.05mol/)缓冲液(pH6.0)125μL;1mol/L NaCl 15μL;0.05mol/L甲基紫精(MV)7.5μL、0.05mol/L硫代硫酸钠20μL和0.15mol/L连二亚硫酸钠20μL作为电子供体,加酶量50μL;优化后的反应条件为反应温度35℃,反应时间1.5min.     

丙二酸碘量法测二氧化氯含量

用碘量法测定稳定性二氧化氯时,除了有二氧化氯外,还有一定量的次氯酸钠,使二氧化氯的检测值偏高。因为丙二酸能与亚氯酸产生氧化分解反应,以除去亚氯酸。在酸性条件下二氧化氯氧化碘化钾,以标准硫代硫酸钠溶液进行滴定,计算二氧化氯的浓度。用碘(1)硫酸溶液:2mol/l用碘(2)碘化钾:10%用碘(3)硫代硫酸钠溶液:0.1mol/l用碘(4)淀粉指示剂:0.5%1原原 理2试试 剂3测测定步骤4计计 算用碘用移液管吸取1ml待测溶液3份,分别置于250ml碘量瓶中,加20ml蒸馏水,再加10%丙二酸2ml,摇匀,静置反应2min后,加入2mol/l硫酸10ml,10%碘化钾10ml,此时溶液出现棕色…     

气相色谱-电子捕获检测器分析葡萄酒中的8种生物胺

该研究建立了气相色谱-电子捕获检测器（GC-ECD）分析葡萄酒中8种生物胺（腐胺、尸胺、精胺、亚精胺、酪胺、β-苯乙胺、组胺和色胺）的方法。取0.5 m L葡萄酒样品与0.5 m L 0.2 mol/L碳酸钠溶液以及4 m L二氯甲烷混合,加入20μL衍生剂氯甲酸-2,2,2-三氯乙酯和10μL催化剂三乙胺,于40℃反应10 min进行葡萄酒中生物胺的提取衍生,随后使用HP-5毛细管色谱柱采用升温程序（初始柱温120℃保持1 min,以3℃/min升至270℃,保持1 min）分离目标物并采用GC-ECD进行检测,外标法定量。方法学评价结果表明,8种生物胺的检出限（LOD）为0.2～0.8 mol/L,定量限（LOQ）为0.7～2.0 mol/L,平均加标回收率为91.2%～102.1%,精密度试验结果相对标准偏差（RSD）为1.8%～3.3%。表明该方法具有较高的准确度、精密度和灵敏度。     

732阳离子交换树脂对屎肠球菌谷氨酸脱羧酶活性的促进作用

通过对732阳离子交换树脂对屎肠球菌谷氨酸脱羧酶（glutamate decarboxylase,GAD,EC4.1.1.15）活性的影响进行探讨,构建了732阳离子交换树脂-细胞GAD复合转化体系。结果表明：经含0.2?mol/L?L-谷氨酸（L-glutamic acid,L-Glu）的0.2?mol/L乙酸-乙酸钠缓冲液（pH?4.2）平衡的732阳离子交换树脂可显著提高屎肠球菌细胞GAD的转化活性,γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid,GABA）产量较对照组增加了32.30%;L-Glu/谷氨酸一钠（monosodium glutamate,MSG）（2∶1）固体混合物能有效调节反应体系的pH值和维持反应液的底物浓度,显著增加GABA产量,当添加量为30?g/L时,GABA产量较不添加L-Glu/MSG（2∶1）固体混合物的对照组提高了52.40%;732阳离子交换树脂与L-Glu/MSG（2∶1）固体混合物对细胞GAD的转化活性具有协同促进作用,适宜的732阳离子交换树脂-细胞GAD复合转化体系组成为732阳离子交换树脂10?g、0.3?mol/L?MSG溶液（溶于0.2?mol/L乙酸-乙酸钠缓冲液,pH?4.2）10?mL、100?mg/mL屎肠球菌细胞悬液10?mL和L-Glu/MSG（2∶1）混合物30?g/L。在该反应体系下,80?r/min、40?℃水浴振荡器反应24?h,GABA产量为（4.57±0.11）mmol,较对照组GABA产量（（2.29±0.08）mmol）提高了99.56%。     

米糠谷氨酸脱羧酶的酶学性质研究

研究了米糠谷氨酸脱羧酶(GAD)的酶学性质。结果表明:米糠GAD的最适温度为40℃,最适pH5.6,米糠GAD耐热性较差,60℃下保温0.5 h后,酶活下降至65%,保温1 h,酶活下降至48%,而70℃时酶就完全失活,而此酶在pH5.5～9都可以保持84%以上的酶活力。米糠GAD对底物和辅酶PLP的Km分别为0.028 45 mol/L和1.13μmol/L。KI、Ag~(2+)、SDS、乙酸对米糠GAD的活力有较大的抑制作用,而Ca~(2+)对米糠GAD的活性有较强的激活作用,提高了底物与米糠GAD的亲和力。     

米糠谷氨酸脱羧酶的分离纯化及酶学性质研究

利用(NH_4)_2SO,分级沉淀、DEAE-Sephrose FF离子交换色谱技术分离纯化米糠谷氨酸脱羧酶(GAD).米糠GAD纯化倍数为8.8,比活达到了30.1U/mg,酶活回收率为45.5%.同时对米糠GAD酶学性质进行了研究,结果表明.最适温度为40℃,耐热性较差;最适pH5.5,在pH5.5～9都可以保持较高酶活.米糠GAD对底物和辅酶PLP的K_m分别为28.45、1.13μmol/L.KI、Ag~+、SDS、乙酸对米糠GAD的活力有较大的抑制作用,而Ca~(2+)对米糠GAD的活性有较强的激活作用.     

助染剂处理芳纶纤维的阳离子染色性能探究

通过对芳纶1414纤维助染剂预处理,进行阳离子染料染色实验,探讨染色工艺参数对芳纶1414纤维染色性能的影响。实验表明,染色最佳工艺为染料用量5%(omf),助染剂用量2%,氯化钠用量15g/L,染浴pH为4.5,染色温度110℃,染色保温时间60min;染色后耐皂洗色牢度可达到4～5级。     

余甘果酒酿制工艺的研究

研究并制定了余甘果酒酿制的工艺路线与技术参数,结果表明:原料果在2.5%～4.0%的NaOH溶液(温度70～80℃)中去皮20～40s,再用100℃蒸汽处理1.5～2min,浆体中果胶酶和NaHSO3分别按0.1%(浆体重)、120～150mgSO2/L(浆体重)进行添加,采用一次加糖法将浆液糖度调至20%～25%,pH值控制在3.5～4.0(酸度为1.0～1.10g/100ml)的条件下主发酵10～12d(发酵温度15～20℃),后发酵3～4d并陈酿2～3个月,采用明胶澄清法澄清酒体并过滤,最后在65～70℃、杀菌时间15min条件下进行巴氏杀菌,所酿制出的余甘果酒品质最好。     

鸡蛋壳制备乳酸钙工艺条件的研究

本试验对鸡蛋壳制备乳酸钙的工艺进行了研究。结果表明最佳条件为:鸡蛋壳在900℃下灰化110min,4g灰分加水50ml制成石灰乳,石灰乳中加入13mol/L乳酸14ml发生中和反应,经过滤、结晶、过滤后干燥制得白色粉末产品。产率为75.6%,乳酸钙含量为88.1%。     

泡菜中亚硝酸盐测定方法研究

通过试验发现:在进行泡菜样品中亚硝酸盐提取时,提取的最佳条件是在70℃的水浴中提取30～45min;样品液中加入2g活性炭粉,能有效的排除色素和抗坏血酸对亚硝酸盐测定造成的干扰;显色剂先加入2ml对氨基苯磺酸溶液,5min后再加入1mlN-1-萘乙二胺盐酸溶液,使显色稳定。     

花生壳不溶性膳食纤维提取工艺的研究

为了促进花生加工副产品的高值化利用,以花生壳为原料,应用酸碱结合法制备花生壳不溶性膳食纤维。通过对碱的质量分数、碱处理温度、碱处理时间、碱用量、酸处理温度、酸处理时间与酸液用量7 个影响因素进行单因素及正交试验,获得了花生壳不溶性膳食纤维的最佳工艺条件。结果表明,3g 花生壳粉在碱的质量分数4% 的碱液60mL、恒温水浴40℃条件下处理30min、然后用60mL 酸液恒温水浴60℃处理90min,不溶性膳食纤维的提取率为86.44%,纯度为91.13%,综合得分为88.01。     

腌肉色素制备工艺的研究

本试验主要研究了使用血色素和亚硝酸盐制备腌肉色素的最佳工艺条件。采用三因素三水平正交试验设计进行研究,结果表明,亚硝酸钠的添加量为2%,加热温度为85℃,加热时间为20min时合成的色素产量最高;柠檬酸摩尔浓度为0.1mol/L、pH值为4时提取的腌肉色素的产量和质量都较好。