强阳离子交换色谱法从牛初乳中分离纯化乳铁蛋白的研究

本实验研究了离子交换色谱技术大规模纯化乳铁蛋白的色谱条件。选用的SP Sepharose Fast Flow离子交换剂对乳铁蛋白有很好的吸附选择性,洗脱速度可达到2L/h。以pH值为7.7～8.0,10mmol/L的磷酸盐为起始缓冲液,通过改变离子强度进行分步洗脱。先采用0.5mol/L的NaCl溶液选择性洗脱分泌型免疫球蛋白A和乳过氧化物酶组分,再采用1mol/L的NaCl洗脱LF组分。经SDS-PAGE测定,所得乳铁蛋白组分显示为单一区带,相对分子质量为80400Da。经等点聚焦测定,所得乳铁蛋白的等电点为8.65。中试生产的精制品中乳铁蛋白的纯度和回收率分别为94.20%和75.45%。     

纳米磁性微球快速分离纯化牛血清免疫球蛋白

研究纳米磁性微球(MNPs)快速分离纯化牛血液中免疫球蛋白(IgG)。研究结合液(磷酸盐缓冲溶液)和解离液(醋酸钠缓冲溶液)pH、NaCl浓度和吸附时间对IgG纯度和回收率的影响,并采用响应面试验设计确定最佳分离纯化条件。结果表明,随着结合液pH增大,IgG纯度和回收率都是先增加后急剧降低,最佳pH为6.65;随着结合液NaCl浓度增加,IgG纯度先增大后降低,但是IgG的回收率保持不变,最佳NaCl浓度为0.5mol/L;MNPs对IgG最佳吸附时间为2h。该条件下IgG的回收率与纯度分别为90.33%和83.75%。     

木瓜蛋白酶在金属螯合亲和双水相中分配行为的研究

利用金属螯合双水相亲和分配技术对木瓜蛋白酶的萃取进行了研究。考察了不同无机盐和浓度、PEG的分子量和浓度、亲和配基的加入量、pH、酶添加量对木瓜蛋白酶分配的影响,对不含亲和配基的双水相和含亲和配基的双水相萃取木瓜蛋白酶的效果进行比较。优化的分配条件为:质量分数17%PEG 4 000,1%PEG-IDA-Cu~(2+),18%Na_2SO_4,pH 7.0,酶添加量为2 mg/g,在此条件下,木瓜蛋白酶的酶活性回收率可达到90%左右,蛋白分配比达到5.11。结果表明,PEG 4 000/Na_2SO_4系统比PEG 4 000/(NH_4)_2SO_4系统更有利于木瓜蛋白酶亲和分配;无机盐的浓度和亲和配基的加入量是影响木瓜蛋白酶分配的关键因素;与不含亲和配基的双水相系统相比,亲和配基的加入可以提高木瓜蛋白酶在PEG相的分配,酶活性回收率和蛋白分配比可分别提高10%和2.0左右,表明金属鳌合双水相分配技术分离木瓜蛋白酶是可行的,为该体系的放大试验或规模化生产奠定了相应的试验基础。     

一步亲和纯化蒜氨酸酶及其酶学性质研究

以自制S-烷基-L-半胱氨酸为配基的亲和凝胶直接从独头蒜粉碎液中提取蒜氨酸酶.用自制亲和凝胶吸附蒜氨酸酶后,考察含0.2 mol·L-1葡萄糖溶液的洗脱效果.利用SDS-PAGE对酶纯度进行检验,并研究温度、pH和底物浓度对酶活性的影响.结果表明,利用葡萄糖溶液洗脱,得到8.29倍的纯酶.而阴性对照纯化倍数为3.78倍.提纯的蒜氨酸酶为电泳纯,亚基约为50 kDa和44 kDa.以合成的蒜氨酸为底物,蒜氨酸酶的最适温度是40℃,最适pH4.92,Kin为19.795μmol·mL-1,Vmax=8.446 μmol·mg-1·min-1.     

酪蛋白磷酸肽（CPPs）的纯化研究

研究了用大孔强碱性阴离子交换树脂提纯酪蛋白磷酸肽（CPPs)的方法,结果表明,树脂GM201对CPPs的分离提纯效果较好,最佳洗脱纯化工艺条件为：盐酸浓度0.2mol/L,NaCl浓度0.3mol/L,温度45℃。在上述最佳工艺条件下,CPPs回收率可达77.7%-80%,纯度提高到N：P=4.7:4.9。     

醇析法结合离子交换法提取分离卵转铁蛋白

乙醇析出法结合两步弱酸性阳离子交换层析可有效地从鸡蛋清中分离纯化卵转铁蛋白,结果表明:预处理后黏度降低的蛋清经两步醇析法(45%浓度乙醇沉淀杂蛋白、59%乙醇浓度沉淀获得OVT粗品),再经两步阳离子层析法(第一步:pH8.0,20 mmol/L磷酸盐缓冲液平衡,含0.5 mol/L NaCl的pH8.0,20 mmol/L磷酸盐缓冲液洗脱;第二步:pH5.2,10 mmol/L柠檬酸盐缓冲液平衡,含0.5 mol/L NaCl的pH5.2,10 mmol/L柠檬酸盐缓冲液洗脱)可得到纯度较高的卵转铁蛋白;SDS-PAGE电泳检测终产品的纯度大于96%。     

SD3 离子交换树脂分离提取ATP 的研究

通过对SD3 离子交换树脂对ATP 动态吸附、洗杂和洗脱条件的考察,确定最适吸附条件为：样品溶液H 2.0,浓度8.25g/L,离子交换柱的高径比为10(装柱湿树脂80g),流速1.0ml/min;最优洗杂液为pH1.5 HC1＋ 0.05mol/L NaCl 的溶液;ATP 的最优洗脱液为pH12.0 NaOH+0.1mol/L NaCl 溶液,优洗脱速度为0.5ml/min。     

磁珠离子交换吸附法纯化兔血清中多克隆抗体的研究

以羧基化的超顺磁纳米磁珠作为离子交换吸附介质,建立一种新型的非层析离子交换吸附方法,用于对兔血清中抗副溶血弧菌多克隆抗体进行纯化。通过优化吸附、洗脱缓冲液pH值、盐离子浓度以及洗涤液Tween-20体积分数,确立磁珠离子交换吸附纯化条件,并将该纯化方法和辛酸-硫酸铵法、亲和层析法进行比较。结果表明:血清中的多克隆抗体能够在pH6.0的磷酸盐缓冲液(0.01mol/L)中被磁珠完全吸附,经过含0.1%Tween-20的洗涤液两次洗涤,能够达到较好的洗涤效果,用含0.3mol/L NaCl的磷酸盐缓冲液(pH8.0)可以将吸附的抗体洗脱;经该法纯化后,多抗纯度为82.6%,回收率为58.0%,效价为1/64000;每克磁珠可纯化10mL的血清,整个过程只需要1h。该方法和辛酸-硫酸铵法、亲和层析法相比有明显的优势,因此具有较好的应用前景。     

蛋清溶菌酶的提取及其酶学性质探究

采用阳离子交换法-超滤法协同分离提取蛋清中溶菌酶,首先通过单因素试验和Box-Behnken试验,优化蛋清中溶菌酶的提取工艺,然后对其酶学性质进行探究。结果表明:在树脂用量为蛋清滤液的24.2%,NaCl浓度1.00 mol/L,蛋清滤液pH 9.10,洗脱时间62.61 min时,溶菌酶经超滤离心后测得纯度为96.36%,比活力为23 718.61 U/mg。对所得溶菌酶酶学性质的研究表明:溶菌酶最适pH 7.0,在pH 4.0～7.0范围内稳定性较好,最适反应温度60℃,低温下热稳定性良好,在较高温度下酶活下降较快。Na~+和Ca~(2+)对酶有较强激活作用,K~+有一定激活作用,Mg~(2+)和Mn~(2+)对酶活影响不大,而Zn~(2+)对酶有明显抑制作用。甘油、Tween20、Tween40、Tween80等表面活性剂均对溶菌酶有抑制作用,其中甘油抑制效果最强。本研究结果对溶菌酶的工业化提纯和生产具有重要的意义。     

双水相萃取分离米曲霉中性蛋白酶

采用聚乙二醇(PEG)/盐双水相体系萃取分离米曲霉中性蛋白酶。探讨了不同成相盐及其浓度、成相聚合物PEG及其浓度、pH和NaCl浓度对中性蛋白酶萃取的影响。结果表明,适宜的双水相萃取体系为20%PEG1000/25%(NH4)2SO4(m/m)、pH8.0、不添加NaCl,此条件下中性蛋白酶上相酶活回收率和纯化倍数分别为99.88%和2.32。     

Expanded bed adsorption for purification of alcohol dehydrogenase using a dye-iminodiacetic acid matrix

Expanded bed adsorption (EBA) was successfully applied for the purification of alcohol dehydrogenase (ADH) from unclarified bakers' yeast homogenate using a new dye-iminodiacetic acid (IDA) matrix carrying immobilized metal ions. The existence of cells and cell debris do not have a significant effect on the adsorption of ADH on the matrix. The presence of imidazole in adsorption buffer was found to be an important factor in reducing the level of the adsorbed contaminant proteins. The optimal imidazole concentration was 5 mM. The dynamic binding capacity of the dye-IDA matrix in EBA was found to be 569 U/ml matrix. A chromatography of one-step elution with imidazole was developed, in which ADH was successfully adsorbed in the presence of 5 mM imidazole; subsequently, the column was washed with 5 mM imidazole containing 1 M NaCl and eluted with 150 mM imidazole containing 1.5 M NaCl. The purification factor and ADH recovery were 8.8 and 93.5%, respectively.     

Development of new dye-metal agarose-coated alumina matrix and elution strategy for purification of alcohol dehydrogenase

A high-density matrix was prepared by coating an alumina particle with agarose using an emulsion technique. Iminodiacetic acid and Cibacron Blue 3GA were immobilized onto this matrix. Charging this matrix with zinc created a useful chromatography matrix for purification of yeast alcohol dehydrogenase. The elution strategy was then investigated to obtain a high recovery of this enzyme and a high purification factor. One-step elution using 4 mM EDTA containing 0.5 M NaCl resulted in 66% enzyme recovery and a purification factor of 4.7. Two-step elution using imidazole containing NaCl resulted in a higher purification factor. The first-step elution using 5 mM imidazole containing 1 M NaCl released most contaminant proteins. The second-step elution using 150 mM imidazole containing 1.5 M NaCl resulted in high-performance purification with a purification factor of 6.5 and an enzyme recovery of 40.7%. Equilibration of the matrix with imidazole prior to sample application increased the purification factor and the enzyme recovery to 8.4 and 76.8%, respectively.     

阳离子交换树脂静态吸附法特异性分离乳清中乳铁蛋白的关键技术

乳铁蛋白(lactoferrin,Lf)是一种对婴幼儿有重要生理功能的活性乳蛋白,掌握Lf特异性分离技术对打破国外技术垄断、降低成本、促进我国婴幼儿配方奶粉发展具有重要意义.该研究以乳清为原料,基于最大吸附量、吸附率、特异吸附为指标,对不同吸附剂做了筛选,探讨了工艺参数对吸附效果的影响及洗脱液离子浓度对洗脱效果的影响,...     

D-101树脂纯化胭脂虫红色素的工艺研究

为了提高胭脂虫红色素的纯度,研究了D-101树脂纯化胭脂虫红色素的工艺。比较了不同pH值预处理胭脂虫红色素提取液的吸附效果,研究了树脂动态吸附和洗脱动力学曲线,并对树脂吸附条件和洗脱条件进行了研究。优化得到D-101树脂纯化胭脂虫红色素的最佳工艺条件为:提取液采用pH为3进行预处理,上柱液体积为2BV,上柱流速为3BV/h,体积分数为75%的乙醇洗脱,洗脱液体积为3.5BV,洗脱速率为2BV/h,在此条件下,吸附量为42.15mg/mL树脂,洗脱率高达98.24%,胭脂虫产品纯度可达58.47%,能够满足一般食品工业的对胭脂虫红色素的纯度要求。采用D-101大孔吸附树脂分离提纯胭脂虫红色素具有吸附量较大、洗脱率高、产品纯度较高、适合工业化大规模生产等优点,具有广阔的工业应用前景。     

大孔树脂分离啤酒废酵母中谷胱甘肽的研究

对大孔树脂D001分离啤酒废酵母中的还原型谷胱甘肽进行了研究.其最佳试验条件为:pH 4.5的0.02 mol/L磷酸缓冲液平衡,pH 7.5的0.02 mol/L磷酸缓冲液洗脱,洗脱流速为2.0 mL/min.在最佳分离条件下,大孔树脂D001分离GSH的平均收得率为20.03%,产品中GSH的含量为28.47%,产品颜色为白色.     

蓝莓果渣花色苷大孔树脂纯化工艺研究

以蓝莓果渣为原料,利用大孔树脂分离纯化蓝莓果渣花色苷。对比了D101和AB-8两种不同极性的大孔树脂静态吸附和解吸效果。结果表明,AB-8型大孔树脂吸附率和解吸率分别为88.5%、64.7%;D101型大孔树脂吸附率和解吸率分别为86.7%、61.2%,AB-8型大孔树脂吸附率和解吸率均优于D101型大孔树脂,故选用AB-8型大孔树脂对蓝莓果渣进行纯化试验。AB-8型大孔树脂最佳吸附和解吸条件为吸附平衡时间4 h,解吸平衡时间4 h,花色苷溶液pH 3.0,解吸液pH 3.0,解吸液乙醇体积分数60%,上样质量浓度1 mg/mL,上样流速1 mL/min,洗脱流速1 mL/min。纯化后蓝莓果渣花色苷色价约为纯化前的3倍,糖和蛋白质等杂质大幅降低,纯度有了较大提高。     

微波焙烘法在羊毛抗菌中的应用

壳聚糖单胍盐酸盐采用微波焙烘固着的方式对羊毛织物进行处理,研究不同的微波辐射功率、辐射时间对整理后羊毛织物物理机械性能包括白度、断裂强力和整理剂在羊毛上吸附率的影响,并与传统的烘干焙烘加热固着方式进行了对比。采用元素分析对壳聚糖单胍盐酸盐处理羊毛前后的氮含量变化进行了测定。运用扫描电子显微镜和傅利叶变换红外光谱图对微波焙烘固着后整理剂壳聚糖单胍盐酸盐,交联剂柠檬酸与羊毛之间的交联机理进行了分析,与传统的烘干焙烘加热固着的交联程度进行了对比。采用微波焙烘固着方式和传统的烘干焙烘加热固着方式将壳聚糖单胍盐酸盐对羊毛织物进行处理,对比了两种不同方式处理后羊毛织物的抗菌性能。     

吸附树脂对蛹虫草黄酮纯化工艺条件优化

以蛹虫草黄酮粗提物为研究对象,分析黄酮纯化过程中树脂种类、上样体积、淋洗液pH值、洗脱液体积分数与体积及树脂重复使用次数多种影响因素,优化吸附树脂对黄酮的分离纯化工艺。通过对AB-8、D-101、NKA-9和NKA-Ⅱ 4 种吸附树脂对蛹虫草黄酮的静态吸附、静态解吸和静态吸附动力学等特性的研究,发现AB-8吸附树脂对蛹虫草黄酮有较高的吸附速率和单位吸附量,且易于解吸,是蛹虫草黄酮分离的理想树脂。通过优化实验,确定AB-8吸附树脂对蛹虫草黄酮分离纯化的最优工艺条件为树脂装柱体积100 mL时,上样体积40.0 mL、黄酮上样量47.536 mg、淋洗和洗脱速率2 BV/h、淋洗液pH 5、洗脱液乙醇体积分数和洗脱体积分别为85%和500 mL,树脂重复使用次数为2 次,在此条件下,蛹虫草黄酮的回收率在65%以上,纯度在17%以上,具有良好的分离纯化效果。     

树脂柱色谱纯化甘油磷脂酰胆碱

研究了树脂柱色谱纯化甘油磷脂酰胆碱(L-α- GPC)的可行性,通过树脂筛选,确定D001大孔阳离子交换树脂为最佳纯化树脂,并对纯化工艺条件进行了优化.通过静态实验得到最优条件:上样质量浓度1.52 mg/mL,样品溶液pH为7,吸附时间300 min,解吸液为去离子水.在静态实验的基础上,进行了树脂柱色谱纯化L-α - GPC的动态实验,对吸附流速、解吸液和解吸流速进行优化.动态实验最优条件:吸附流速2 mL/min,解吸液为去离子水,解吸流速2 mL/min.依据动态实验最优条件,最终L -α- GPC的纯度为96％,回收率为54.1％,这表明树脂柱色谱纯化L-α - GPC的方法是经济、方便、可行的.